周鹏程
- 作品数：10 被引量：71H指数：5
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家攀登计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 特异寡聚核苷酸对猪瘟病毒在细胞中增殖抑制作用的研究被引量：4
- 2001年
- 本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性。实验结果表明针对CS FV 5’端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核苷酸对CSFV复制均有显著的抑制作用 ,而针对CSFV 3’端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑制作用 ,5′端寡聚核苷酸具有最佳抑制作用 ,同时发现相应序列中正义聚核苷酸的作用要优于反义寡聚核苷酸 ;脂质体介导转染能显著提高寡聚核苷酸对CSFV复制的抑制作用。这些初步结果也提示 ,CSFV 5’端和 3’端非编码区对CSFV复制的重要性和作用有所不同。
- 周鹏程聂玉春曹圻陈建国丁明孝
- 关键词：猪瘟病毒寡聚核苷酸抗病毒
- 黄病毒科病毒编码的非结构蛋白及其功能被引量：4
- 1999年
- 黄病毒科病毒是一类具有囊膜的ＲＮＡ病毒，现包括黄病毒、瘟病毒及类丙型肝炎病毒三个属。该科的许多病毒均是引起人和动物一些严重疾病的病原，其基因组为一单股正链的ＲＮＡ分子，分别编码病毒的结构蛋白和非结构蛋白，其中非结构蛋白对于病毒的复制及病毒与其宿主细胞的相互作用起着极为重要的作用。本文综述了该科病毒编码的非结构蛋白及其主要功能，旨在深入了解和研究该科病毒的复制规律。
- 周鹏程陈建国丁明孝
- 关键词：黄病毒科非结构蛋白
- 猪瘟病毒糖蛋白E0基因的克隆及其表达研究被引量：2
- 2000年
- 用ＲＴ－ＰＣＲＡ法扩增分别获得了中国猪瘟病毒强毒石门株和免化弱毒株糖蛋白Ｅ０基因ｃＤＮＡ，并克隆到ｐＧＥＭ Ｔ载体中测定其核着酸序列和推导出其对应氨基酸序列；结果表明这两个毒株间的Ｅ０基因核着酸序列同源性为９５．３％，氨基酸序列同源性为９４％，有１４个残基的差异；与几个代表毒株ＡＬＤ株、ＧＰＥ株、Ｂｒｅｓｃｉａ株、Ａｌｆｏｒｔ株和国外测得的免化弱毒Ｃ株相应序列进行比较，所测石门病毒核苷酸序列与上述各株对应序列的同源性分别为９８．０％、９７．１％、９２．７％、８６．８％和９５．４％；氨基酸序列同源性分别为９７．４％、９６．１％、９５．３％、９２．７％和９４．４％；所测兔化弱毒核着酸序列与上述各株对应序列的同源性分别为９５．２％、９４６％、９１．３％、８５．１％和９９．０％；氨基酸序列同源性分别为９３．１％、９２．３％、９１．４％、９０．５％和９８．７％；氨基酸序列分析结果还表明：上述各株病毒糖蛋白Ｅ０序列均含有与地衣类及植物核苷酸酶同样保守的两个氨基酸基序ＳＬＨＧＩＷＰＸ（Ｘ为Ｇ或Ｅ）和ＥＷＮＫＨＧＷＣ，基序中Ｈ为ＲＮａｓｅ催化活性关键氨基酸残基；将上述Ｅ０基因亚克隆至真核表达载体ｐＥＧＦＰ－Ｃ１。
- 周鹏程陈建国翟中和丁明孝
- 关键词：猪瘟病毒基因克隆基因表达致病机制
- 猪水泡病病毒主要抗原蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 1998年
- 将编码猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）主要抗原蛋白的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０的ＰｒＰ１串联启动子的下游，分别构建了重组质粒ｐＢＶ２２０－ＶＰ３（０．６ｋｂ）及ｐＢＶ２２０－ＶＰ３－ＶＰ１（约１．６ｋｂ），表达的蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测，结果表明，表达的ＶＰ３蛋白只与猪水泡病病毒ＶＰ３特异性亚单位抗血清反应，而ＶＰ３－ＶＰ１蛋白未能成功表达。该实验为ＳＶＤＶ疫苗研究奠定了基础。
- 周鹏程赵启祖刘卫刘再新刘再新
- 关键词：猪水泡病病毒大肠杆菌
- 猪水泡病病毒的分子生物学研究现状被引量：6
- 1998年
- 猪水泡病病毒的分子生物学研究现状周鹏程（北京大学生命科学学院１００８７１）谢庆阁（中国农业科学院兰州兽医研究所）猪水泡病（Ｓｗｉｎｅｖｅｓｉｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ，ＳＶＤ）是猪的一种急性传染病，其临床表现以口鼻腔粘膜、蹄部等出现水泡或溃烂为特征，与...
- 周鹏程谢庆阁
- 关键词：猪病水泡病病毒分子生物学
- 猪瘟病毒E2(gp55)基因的克隆表达及其DNA疫苗的初步研究被引量：23
- 2000年
- 用RT PCR方法从中国标准强毒株石门毒的细胞培养物中扩增获得了其结构蛋白E2基因cDNA ,将之克隆到 pGEM 5ZT载体 ,用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列 ,并推导出其对应氨基酸序列 ,与几个代表毒株Alfort株、Brescia株和C株相应序列进行比较 ,所测核苷酸序列与各株的同源性分别为 84 7%、92 6%和 95 2 % ,氨基酸序列的同源性分别为89 4% ,92 6%和 94 6% ;将此E2片段亚克隆至真核表达载体 pcDNA3 1 ,构建表达CSFVE2蛋白的重组质粒 pcE2 ,用脂质体转染法将 pcE2导入cos 7细胞进行瞬时表达 ,用针对E2蛋白的特异性单抗以间接免疫荧光法检测 ,结果E2蛋白在cos 7细胞中获得了正确表达 ,随之将pcE2质粒DNA进行小鼠肌内接种免疫 ,ELISA法检测证实在免疫后 2周和 4周的小鼠体内可诱导出较为明显的阳性血清 ,并高于E2单抗的阳性对照 ,病毒中和试验也表明DNA免疫后小鼠体内可诱导产生CSFV中和抗体 ;同时构建了能在昆虫细胞Sf9中表达GST E2和GST GFP E2融合蛋白的重组杆状病毒 ;上述研究结果为研制针对CSFV的DNA疫苗 ,亚单位疫苗及其诊断试剂打下了基础。
- 周鹏程陆宇陈建国翟中和丁明孝
- 关键词：猪瘟病毒DNA疫苗E2基因基因表达免疫防制
- 猪瘟病毒在PK细胞和MPK细胞中繁殖过程的研究被引量：21
- 1999年
- 以猪瘟病毒疫苗Ｔｈｉｖｅｒｖａｌ株（Ｔ株）为实验材料，研究该病毒株在ＰＫ１５细胞中增殖的基本特性与规律。在ＰＫ１５细胞中，猪瘟病毒Ｔ株在感染后１２ｈ即可检测到子代病毒粒子。接毒后４８ｈ，几乎所有的细胞都被病毒感染；到６０ｈ，释放到培养液中有活性的病毒粒子达到最高峰，为１０７ＴＣＩＤ５０／ｍＬ。培养液中的病毒粒子在３７℃半寿期只有３个小时。同时，建立了ＭＰＫ细胞ＣＳＦＶＴ株的感染模式，其ＣＳＦＶ的滴度可达１０８ＴＣＩＤ５０／ｍＬ。在此基础上，用抗ＣＳＦＶ包膜蛋白Ｅ２和非结构蛋白ｐ１２０的单克隆抗体显示了病毒在细胞中增殖的部位。
- 王镇陆宇周鹏程翟中和丁明孝
- 关键词：猪瘟病毒CSFV免疫荧光
- 6株A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1(1D)基因的核苷酸序列分析被引量：6
- 1998年
- 早期收集保藏的６株Ａ型口蹄疫病毒（Ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＦＭＤＶ）（ＡＬ１－ＡＬ６），适应ＢＨＫ２１单层细胞后，提取６株细胞增殖病毒的ＲＮＡ。用一对ＦＭＤＶ通用引物经反转录（ＲＴ）－ＰＣＲ法扩增了约５００ｂｐ的期望的ＤＮＡ片段。克隆目的基因后，采用双脱氧ＤＮＡ链末端终止法测得了６株病毒的ＶＰ１基因２１０－６３９核苷酸序列。分析表明，３株病毒缺失３个核苷酸，从推导的氨基酸序列比较，确定缺失的３个核苷酸正好是一个密码子，位于氨基酸序列的１５２或１５６位。６株病毒的ＶＰ１核苷酸序列的同源率是９１％－９８％，相应氨基酸序列的同源率为９２．６％－９７．５％。结果显示，核苷酸差异的频率高时，相应氨基酸的改变频度亦高。６株病毒ＶＰ１基因的核苷酸序列与已报导的Ａ型ＦＭＤＶＡ２２的同源性较好（８４％）。６株病毒的主要中和抗原位点ＶＰ１１４０－１６０位氨基酸序列差异较小，可能有相近的中和单抗表位和相同的抗原性。Ｇｏｌｄｋｅｙ软件分析表明，６株病毒间的遗传关系密切，在遗传系谱树上邻接。
- 刘在新赵启祖刘卫周鹏程朱彩珠常慧芸谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒病毒结构蛋白核苷酸序列
- 猪水泡病病毒强致病性毒株主要保护性抗原蛋白基因cDNA的序列测定与分析
- 1998年
- 从猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）细胞培养物的ＰＥＧ浓缩毒中提取病毒ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ和套式ＰＣＲ扩增病毒主要保护性抗原蛋白基因，将扩增产物１．６ｋｂ插入ｐＵＣ１８载体中，经亚克隆后用双脱氧链终止法测定其序列，与已发表的ＳＶＤＶ分离物该区序列作比较，核苷酸同源性为９６％－９７％，氨基酸同源性为９８％，参与构成ＳＶＤＶ中和性抗原位点的几个氨基酸残基均很保守；与已发表的柯萨奇Ｂ５病毒的对应序列比较，两者核苷酸序列同源性为７７％，而推导的氨基酸顺序同源性竞高达９２％。本文结果有助于ＳＶＤＶ的分子流行病学研究，并为其和柯萨奇Ｂ５病毒的相互关系提供参考数据。
- 周鹏程赵启祖刘卫刘再新刘再新薛景山
- 关键词：猪水泡病病毒核苷酸序列
- 猪瘟病毒NS3丝氨酸蛋白酶功能区基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：6
- 2001年
- 用RT PCR方法扩增分别获得了中国猪瘟病毒强毒石门株和兔化弱毒株非结构蛋白NS3丝氨酸蛋白酶功能区 [即NS3 (ΔC) ]基因cDNA ,将之克隆到 pGEMT载体测定其核苷酸序列 ,并推导出其对应氨基酸序列 ,结果表明这两个毒株间的NS3 (ΔC)区基因核苷酸序列同源性为95 8% ,氨基酸序列同源性为 99% ,有 2个残基的差异 ;两毒株与一些猪瘟病毒以及同属的牛病毒性腹泻病病毒代表毒株的对应序列进行比较 ,所测核苷酸序列及推导的氨基酸序列均极为保守 ,而且氨基酸序列分析结果还表明 ,瘟病毒NS3 (ΔC)序列也含有与其它黄病毒同样保守的由His,Asp和Ser残基构成的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶催化三分体 ,三分体中Ser为丝氨酸蛋白酶催化活性关键氨基酸残基 ;将上述NS3 (ΔC)基因亚克隆至原核表达载体pET 2 8a中 ,并在E .coli中获得高效表达 ,将表达产物纯化并免疫小鼠 ,间接免疫荧光和Westernblot结果表明制备了针对NS3(ΔC)蛋白的多克隆抗体。上述实验结果为继续深入研究非结构蛋白NS3在猪瘟病毒的复制及病毒与宿主细胞相互关系中的作用 。
- 周鹏程陈建国丁明孝
- 关键词：猪瘟病毒非结构蛋白NS3基因克隆基因表达
