唱韶红
- 作品数：87 被引量：136H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 一种细菌多糖结合疫苗的载体蛋白及其应用
- 本发明公开了一种细菌多糖O糖基化修饰的重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白及其应用。本发明提供了一种多糖和蛋白的偶联物，由细菌多糖和重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白偶联而成；所述细菌多糖以O-糖苷键形式连接在所述重组霍乱毒素B亚单位...
- 吴军孙鹏王恒樑潘超刘波朱力唱韶红巩新曾明
- 文献传递
- 用糖基工程酵母制备具有动物细胞糖基化修饰流感血凝素糖蛋白的方法
- 本发明公开了用糖基工程酵母制备具有动物细胞糖基化修饰流感血凝素糖蛋白的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：使流感病毒的血凝素HA基因在酵母突变体中表达，得到重组酵母；将所述重组酵母培养，制备得到具有哺乳动物糖型结构且无...
- 刘波吴军巩新唱韶红王莎马清钧
- 血清白蛋白与粒细胞集落刺激因子的融合蛋白
- 本发明公开了一种血清白蛋白与粒细胞集落刺激因子的融合蛋白，编码融合蛋白的DNA序列，携带该DNA序列的细菌、酵母、动物细胞、植物细胞；本发明的融合蛋白包括与人血清白蛋白至少85％序列同源的第一区和与人粒细胞集落刺激因子至...
- 吴军唱韶红巩新马清钧
- 文献传递
- 表达幽门螺杆菌粘附素BabA重组蛋白菌株的构建及其粘附活性评价被引量：13
- 2003年
- 目的构建表达幽门螺杆菌(Hp)粘附素BabA重组蛋白的候选菌株并测定其粘附活性。方法用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增粘附素babA2基因,将其定向插入表达载体pET-22b(+)中,并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达,利用光镜计数法测定其粘附活性。结果DNA序列分析表明,所克隆的粘附素babA2基因序列与GeneBank公布的一致。在37 ℃诱导表达3 h后,粘附素BabA重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%,体外实验证实BabA参与了粘附过程。结论本研究获得了表达有生物活性的Hp粘附素BabA的克隆,为深入研究其相关功能奠定了良好基础。
- 白杨唱韶红王继德陈烨张兆山张亚历
- 关键词：幽门螺杆菌粘附素聚合酶链反应基因克隆
- 利用异源启动子控制大肠杆菌基因组N-乙酰基转移酶表达重组菌及应用
- 本发明公开了一种利用异源启动子控制大肠杆菌基因组N-乙酰基转移酶表达重组菌及应用。本发明提供的重组菌，为将外源诱导型启动子插入宿主菌的乙酰基转移酶编码基因的上游，用于启动所述乙酰基转移酶编码基因的表达，得到的重组菌。本发...
- 刘波吴军唱韶红巩新马清钧
- 甘露糖化hLYZ/eGFP融合蛋白的表达纯化及巨噬细胞定位被引量：1
- 2012年
- 目的利用毕赤酵母表达蛋白具有高甘露糖修饰的特性,在毕赤酵母中表达甘露糖化修饰的人溶菌酶(human lysozyme,hLYZ);进而利用巨噬细胞(macrophage,MR)表面的甘露糖受体(mannose receptor,MR)将甘露糖化的人溶菌酶内吞入胞,为研究可入巨噬细胞杀灭其胞内感染菌的人溶菌酶提供基础。方法为使人溶菌酶可以在酵母中产生N-甘露糖化修饰,在人溶菌酶的C端设计2个N-糖基化位点;通过在其C端融合增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP),观察人溶菌酶在巨噬细胞RAW264.7中的亚细胞定位;同时在其C端引入了His标签便于融合蛋白的纯化。毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP与RAW264.7共孵育,借助激光共聚焦显微镜观察该融合蛋白能否进入RAW264.7;通过巨噬细胞甘露糖受体(macrophage mannose receptor,MMR)的竞争性配体甘露聚糖(mannan)的阻断实验,检测甘露糖化的人溶菌酶是否通过MMR介导内吞。结果毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP融合蛋白是相对分子质量(Mr)为(66～97)×103的弥散条带,肽N-糖苷酶F(PNGaseF)酶切后,该融合蛋白变为Mr均一的条带,与非糖基化hLYZ/eGFP融合蛋白的理论Mr一致。该融合蛋白与RAW264.7共孵育后,可见细胞质中存在eGFP的绿色荧光,而加入甘露聚糖可以抑制这一现象发生。结论毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP融合蛋白为高甘露糖型糖基修饰蛋白,该蛋白可以通过MMR介导内吞进入巨噬细胞。
- 左小虎刘波巩新唱韶红胡晓李海燕张部昌曹诚吴军
- 关键词：人溶菌酶EGFP巨噬细胞甘露糖
- H7N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析被引量：6
- 2015年
- 目的利用毕赤酵母表达制备H7N9流感病毒血凝素[HA 1-525个氨基酸（aa）],并对其免疫原性进行研究。方法经全基因合成获得H7N9流感病毒[A/Hangzhou/1/2013（H7N9）]全长HA,以其为模板,PCR得到片段HA^1-525,通过NspⅤ和NotⅠ双酶切连入pPICZαA载体,转入毕赤酵母X33,ELISA筛选阳性克隆。发酵培养后,表达上清经PEG20000沉淀获取HA^1-525,并用糖苷内切酶H（endo H）酶切分析其N-糖链。将制备的HA^1-525免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测特异性HA7抗体滴度,红细胞凝集抑制实验分析血抑活性。结果培养上清用抗HA7抗体经ELISA检测,重组菌成功表达HA7,且Western印迹检测发现有特异性弥散条带,经endo H酶切后,HA^1-525为均一条带,相对分子质量约58×10^3,与理论大小相当,表明HA^1-525存在甘露糖基化结构。HA^1-525两次免疫小鼠后可产生1∶36 000的抗体滴度。以H7N9裂解苗为抗原,检测其血抑活性为1∶700。结论利用毕赤酵母表达的H7N9流感病毒HA1-525可以诱导小鼠产生针对HA7的中和抗体。
- 王莎唱韶红刘波巩新徐威吴军
- 关键词：血凝素类毕赤酵母
- 过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母构建被引量：2
- 2015年
- 目的通过过表达N-糖基转移酶,构建1株糖基化修饰效率更高的糖基工程酵母。方法利用尿嘧啶(URA3)营养缺陷型筛选标记,在糖基工程酵母4-32中转入醇氧化酶1(alcohol oxidase 1,AOX1)启动子控制的利士曼原虫N-糖基转移酶星状孢子素和温度敏感性酶3(staurosporine and temperature sensitivity 3,STT3)D亚基,通过SDS-PAGE、Western印迹和肽N-糖苷酶F(peptide-N-asparigineamidase F,PNGase F)酶切等方法,分析4-32-STT3D表达的抗人表皮生长因子受体2(HER2)抗体(anti-human epidermal growth factor receptor 2)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)N-糖基化程度,并测定STT3D转入和诱导表达对酵母生长情况的影响。结果 SDS-PAGE结果显示,4-32-HL菌表达的抗HER2抗体除有一条相对分子质量约55×103的重链主带外,还有一条约50×103的未糖基化条带。4-32-HL-STT3D菌表达为均一的55×103条带,无50×103条带。PNGase F酶切后,上述重链呈50×103的均一条带。Western印迹证明以上所有条带均为抗体成分。以GM-CSF作为报告蛋白验证STT3D的作用,结果显示,4-32-GM-CSF菌表达的GM-CSF为22×103和20×103的两条带,而4-32-GM-CSF-STT3D表达则为均一的22×103条带。PNGase F酶切4-32-GM-CSF和4-32-GM-CSF-STT3D菌表达的GM-CSF后,GM-CSF呈18×103的均一条带。分别测定STT3D外源基因转入和诱导表达时对酵母生长情况的影响,统计学分析显示,STT3D转入不诱导对酵母生长影响不显著,STT3D诱导表达对酵母生长影响极显著。结论过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母对靶标蛋白具有更高的N-糖基化修饰效率。
- 毛银平巩新唱韶红宋西勇吴军刘波
- 关键词：酵母抗体N-糖基化
- 一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法及其应用
- 本发明公开了一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法及其应用。本发明公开一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法，是将重组融合蛋白和脑膜炎奈瑟球菌O‑寡糖转移酶PglL在O‑抗原连接酶基因缺陷的细菌中共表达，脑膜炎奈瑟球...
- 吴军潘超孙鹏王恒樑刘波彭哲慧朱力唱韶红巩新冯尔玲王斌曾明
- 文献传递
- 人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：19
- 2006年
- 为了延长IFNα2b在血浆中的半衰期,构建了编码HSA和hIFNα2b的融合基因并在毕赤酵母中获得高效表达,工程菌经5L发酵罐培养后获得的含融合蛋白的培养液经超滤浓缩、蓝色葡聚糖凝胶层析、疏水柱层析以及阴离子柱层析,融合蛋白的纯度达到95%以上。该融合蛋白能与干扰素抗体和人血清白蛋白抗体结合,并表现出与重组干扰素α2b相似的抗病毒活性。以猕猴为动物模型,分别从静脉和皮下单剂量给药,给药浓度为90μg/kg时,在336h后血浆中仍可检测到融合蛋白。其静脉注射的血浆半衰期为101h,皮下注射的半衰期为68.2h。皮下注射的生物利用度为67.9%。IFNα2b与HSA融合后,明显的延长了血浆半衰期,显现了其良好的临床应用前景。
- 唱韶红巩新杨志愉王同映马国昌马清钧吴军
- 关键词：干扰素人血清白蛋白融合蛋白半衰期毕赤酵母
