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姚南: 作品数：16 被引量：10H指数：2; 供职机构：北京协和医学院更多>>; 发文基金：国家科技重大专项协和青年科研基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：医药卫生交通运输工程建筑科学生物学更多>>

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DEAE-葡聚糖在SHIV病毒TCID50滴定及扩增中的作用被引量：1: 2011年; 目的确定DEAE-葡聚糖对CEMx174细胞的半数抑制浓度,明确其在SHIV病毒TCID50滴定及病毒扩增中的促进作用。方法分别使用含DEAE和无DEAE的DMEM完全培养基测定SHIVchn19p7的TCID50。用无血清DMEM培养基系列稀释DEAE,加入CEMx174细胞,使用cck-8测定细胞破坏率。分别选取DEAE浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的无血清DMEM培养基对CEMx174细胞预处理3 h。再加入SHIV-KB9病毒液,定期测定培养上清中的P24水平,同时做正常病毒对照和DEAE-1640对照,比对不同处理下的病毒扩增情况。结果使用了DEAE后,SHIVchn19p7的TCID50达到了3.16×104 TCID50/mL,不使用DEAE,病毒的TCID50测定为阴性。DEAE对CEMx174细胞的IC50为44.85μg/mL。经浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的DEAE预处理后,SHIV-KB9病毒扩增在13 d～17 d达到高峰。而用不含DEAE的1640生长液培养的实验孔在19 d才开始出现阳性反应。结论高浓度的DEAE对细胞有较强的杀伤作用,低浓度的DEAE对细胞的破坏率较低,并且能显著促进病毒扩增。DEAE在病毒进入细胞的过程中确实起了重要的作用。; 丛喆姚南蒋虹金光魏强; 关键词：半数抑制浓度

SHIVchn19p7中国恒河猴细胞适应株的制备和生物特性研究: 2010年; 目的体外制备SHIVchn19p7病毒中国恒河猴细胞适应株,建立病毒库。滴定该批次SHIVchn19p7病毒的TCID50。方法用SHIVchn19p4静脉感染中国恒河猴,并进行恒河猴体内传代。定期采血测定血浆病毒载量,当病毒载量达高峰时采血分离外周血单核淋巴细胞(PBMCs),与正常恒河猴PBMCs共培养。定期测定培养液中的P24抗原水平。当病毒复制达高峰期时收集培养上清,分装并冻存。测定病毒RNA载量、P24抗原浓度。10倍系列稀释SHIVchn19p7病毒,加入TZM-bl细胞,测定TZM-bl细胞中Lucifres值,计算病毒的TCID50。结果本研究共制备了240mL,SHIVchn19p7病毒,gp120序列测定分析表明病毒未发生变异,CCR5的嗜性也未发生改变。病毒载量为4.44×105copies/mL,P24抗原水平为3.57×102pg/mL,TZM-bl细胞测定病毒的TCID50为2.08×104mL。结论此次制备的SHIVchn19p7细胞适应株生物学特性稳定,适合作为毒种库构建SHIVchn19p7/中国恒河猴模型。; 丛喆陶真刘浩姚南金光陈霆魏强

在役桥梁钢结构的损伤检测与安全评估: 随着我国桥梁建设事业和钢结构制造业不断发展,越来越多的桥梁采用了钢结构,于是对在役钢结构的检测、评估、维护和加固方法的研究将成为今后几十年的一个热点,这也符合我国建设资源节约型国家的要求。本文概述述了桥梁钢结构损伤机理和...; 姚南张天申王元清石永久; 文献传递

SHIV1157ipd3N4细胞适应株的制备及其生物特性: 2011年; 目的体外制备SHIV1157ipd3N4病毒中国恒河猴细胞适应株,在细胞水平和中国恒河猴体内评价其生物学特性。方法用SHIV1157ipd3N4病毒阴道感染中国恒河猴,在血浆病毒载量高峰期采血分离外周血单核淋巴细胞(PBMCs),与正常中国恒河猴PBMCs共培养。定期测定培养液中的P24抗原水平。当病毒复制达高峰期时收集培养上清,分装并冻存。测定病毒RNA载量、P24抗原浓度和TCID50。静脉感染中国恒河猴,研究该批次SHIV1157ipd3N4在体内的病毒学、免疫学指标变化及变异情况,分析其基本的生物学特性。结果本研究共制备了243 mL SHIV1157ipd3N4病毒原液,gp120序列分析表明病毒未发生变异,CCR5的嗜性也未发生改变。病毒载量为1.586×108 copies/mL,P24抗原水平为1.16×103 pg/mL,TZM-bl细胞测定病毒的TCID50为3.16×103/mL。1 mL SHIV1157ipd3N4静脉成功感染中国恒河猴G1004V,高峰期病毒载量达到1.0×106 copies/mL以上。结论此次制备的SHIV1157ipd3N4细胞适应株生物学特性稳定,适合作为毒种库构建SHIV1157ipd3N4/中国恒河猴模型。; 丛喆姚南刘浩金光陶真陈霆魏强; 关键词：中国恒河猴

MicroRNA在胚胎干细胞分化过程中作用机制研究: 胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell，简称ES细胞）具有的自我更新、多潜能性等特性，使其具有广泛的应用价值。ES细胞状态的维持受相关信号转导通路和转录因子的调控，现已知在小鼠ES细胞中，最重要的信号转导通路...; 姚南; 关键词：胚胎干细胞微小RNA 自我更新多潜能性重编程; 文献传递

RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用: 目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温...; 鞠斌王卫丛喆姚南陈霆杜文达苏爱华高锡强魏强

RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用被引量：2: 2012年; 目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因PCR扩增方法;在此基础上将模板进行有限稀释,摸索rt基因单拷贝PCR扩增条件;使用该方法扩增感染猴体内RT-SHIV病毒rt基因,BioEdit软件进行基因序列分析。结果筛选得到一组巢式PCR引物,成功建立了RT-SHIV rt基因PCR扩增方法;当模板浓度为100 copies/μL时,扩增产物为单拷贝序列;测序结果显示RT-SHIV感染猴d266和d294血浆样本分别存在1处和6处氨基酸突变。结论本研究建立的全长rt基因单拷贝PCR扩增方法特异性好、灵敏度高、重复性强,可以应用于各类RT-SHIV病毒的全长rt基因分析。; 鞠斌王卫丛喆姚南陈霆杜文达苏爱华高锡强魏强

RT-SHIV中国恒河猴适应株细胞水平生物学特性分析: 2011年; 目的体外增值、制备动物感染来源的RT-SHIV病毒中国恒河猴适应株,比较PBMCs和CEMx174两种细胞制备出病毒的差异,同时用TZM-bl、CEMx174、PBMC三种细胞滴定测定病毒TCID50。方法用RT-SHIV病毒静脉感染中国恒河猴,定期采血测定血浆病毒载量,当病毒载量达高峰时采血分离外周血单核淋巴细胞(PBMCs),与正常恒河猴PBMCs或CEMx174细胞共培养,定期测定培养液中的P24抗原水平,当病毒复制达高峰期时收集培养上清,分装并冻存;测定病毒RNA载量、P24抗原浓度,滴定病毒的TCID50。结果本研究共制备了78 mL PBMCs来源的RT-SHIV病毒和85 mL CEMx174细胞来源的RT-SHIV病毒。RT基因序列和原始序列的相似度为99%,仅在第254和265位的氨基酸发现突变。RT-SHIV(PBMC)和RT-SHIV(CEMx174)病毒载量分别为1.641×108 copies/mL和8.375×108 copies/mL,P24抗原水平分别为20.745 ng/mL和4.28 ng/mL,TZM-bl、CEMx174、PBMC细胞测定病毒的TCID50分别为3.16×105 TCID50/mL和1×104 TCID50/mL,5×102 TCID50/mL和5×105 TCID50/mL,5×102 TCID50/mL和5×103 TCID50/mL。结论 PBMCs细胞来源制备的病毒较CEMx174制备的病毒具有更高的感染性。; 姚南王卫丛喆金光陶真魏强; 关键词：TCID50 细胞培养

SHIV-XJ02170感染恒河猴后期的传代特点和env基因变异: 2011年; 目的研究SHIV-XJ02170在中国恒河猴感染后期传代过程中病毒和宿主的变化特点,并分析env基因的序列变异。方法将感染中国恒河猴G0401V后期(5年)的SHIV-XJ02170病毒垂直传代2只猴(G0401V→G0402V→0403V),同时,剔除G0401V猴CD8+T细胞使潜伏的病毒大量复制后传代1只猴(G0401V→G0404V),应用流式细胞术、病毒载量测定、序列分析等方法研究该病毒在猴体内长期适应后的病毒和免疫学指标及序列变异特点。结果 G0401V在感染后期仍能稳定传代,且表现出毒力增强的特点。其传代猴G0402V在传代后41 d死亡,外周血CD4+T淋巴细胞衰竭,仅为43个/mL,符合艾滋病感染猴快速进展型的特征。剔除体内CD8+T细胞之后的传代猴G0404V的表现类似G0401V,即长期低水平的病毒血症水平。env基因序列分析发现SHIV-XJ02170在G0401V体内长期适应后发生了可遗传的序列变异,并引起糖基化位点的改变。结论 SHIV-XJ02170在猴体长期适应后的传代过程中表现出向强毒株过渡的特征,为进行SHIV-XJ02170感染性克隆的构建奠定了良好的实验基础。; 陶真丛喆刘强李悦刘浩王卫金光陈霆姚南蒋虹杨贵波李喆魏强; 关键词：传代 ENV

SHIV-KB9病毒中国恒河猴细胞适应株的制备: 2012年; 试验旨在研究体外制备SHIV-KB9病毒中国恒河猴细胞适应株,在细胞水平和中国恒河猴体内评价其生物学特性。试验将SHIV-KB9半长质粒连接后转染CEMx174细胞,转染上清与正常恒河猴PBMCs共培养。定期测定培养液中的P27抗原水平。当病毒复制达高峰期时收集培养上清,分装并冻存,测定病毒RNA载量和TCID50。静脉感染中国恒河猴,研究该批次SHIV-KB9在体内的病毒学、免疫学指标变化及变异情况,分析其基本的生物学特性。结果表明,本研究共制备了95mLSHIV-KB9病毒原液,病毒载量为2.678×105拷贝/mL,TZM-bl细胞测定病毒的TCID50为3.16×103/mL,gp120序列分析表明病毒未发生变异。10倍稀释的3个不同浓度的SHIV-KB9均静脉成功感染中国恒河猴,引起外周血CD4+/CD8+大幅下降。因此,此次制备的SHIV-KB9细胞适应株生物学特性稳定,适合作为毒种库建立SHIV-KB9/中国恒河猴模型。; 丛喆陶真王卫陈霆金光姚南苏爱华魏强; 关键词：中国恒河猴

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