孙岩 作品数:47 被引量:98 H指数:6 供职机构: 潍坊医学院口腔医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山东省自然科学基金 山东省高等学校科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
Runx 2在牙釉质形成中的作用研究 被引量:1 2011年 目的:研究小鼠成釉细胞中Runx 2对釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)、成釉蛋白(Ameloblas-tin,AMBN)、牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-asssociated protein,ODAM)基因表达的调控作用,为研究Runx 2在牙釉质形成中的作用奠定基础。方法:通过RT-PCR法从小鼠成釉细胞中克隆得到Runx 2全长基因,测序正确后将其亚克隆至pcDNA3.1-hisA载体中;构建针对小鼠Runx 2的siRNA表达框架,将反应质粒pcdna-3.1-HisA-Runx 2及针对Runx 2的特异性小分子干扰RNA(siRNA)分别转染小鼠成釉细胞,用RT-PCR方法检测Runx 2,AMTN,AMBN以及ODAM的mRNA水平。结果:转染的小分子干扰RNA(siRNA)对Runx 2mRNA的表达有显著性抑制作用,Runx 2基因沉默可显著抑制AMTN和AMBN的mRNA表达水平;Runx 2基因过表达可显著上调AMTN和AMBN的mRNA表达水平。Runx 2基因的表达变化对ODAM的mRNA表达水平则无显著性调控作用。结论:Runx 2通过调控AMTN和AMBN的表达水平,在牙釉质形成过程中发挥作用。 何永云 梁广智 刘晓影 孙岩 高玉光关键词:核心结合因子 小睑裂综合征家系FOXL2基因的突变研究 被引量:2 2007年 目的对一个常染色体显性遗传的小睑裂综合征家系4代12例患者,及家系中12例正常成员和80例正常对照的FOXL2基因进行研究。方法设计合成FOXL2基因特异引物应用聚合酶链反应(PCR)扩增FOXL2基因,PCR产物直接测序。结果该家系所有患者的FOXL2基因892C〉T,为无义突变。在正常人的FOXL2基因中未发现突变。结论FOXL2基因的突变可能是该家系中小睑裂综合征重要的致病因素。 唐胜建 王小柯 王艳丽 林立新 孙岩关键词:小睑裂综合征 FOXL2 转录因子Runx2调控前成骨细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达 被引量:2 2015年 背景:细胞外基质磷酸化糖蛋白基因在骨的矿化和吸收、成骨细胞与破骨细胞的平衡中起重要的作用,研究细胞外基质磷酸化糖蛋白的功能及其调控机制可为骨质疏松症的治疗提供新的思路。目的:分析转录因子Runx2在小鼠前成骨细胞中对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的调控作用,进而初步研究转录因子Runx2在骨形成发育过程中的作用。方法:首先根据Genbank中Runx2的基因序列构建Runx2真核表达载体;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析Runx2对不同长度的细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响,以确定Runx2有明显作用的启动子区段,分析3种MAPK信号通路抑制剂调控Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响;最后利用定时定量RT-PCR法分析Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子表达活性的影响。结果与结论:成功构建Runx2真核表达载体;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示Runx2能够上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,在(-300-+66)366 bp片段区域内上调效果较为显著,Runx2可通过激活MEK激酶MAPK通路上调细胞外基质磷酸化糖蛋白启动子活性;定时定量RT-PCR法检测再次验证Runx2上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达水平。提示转录因子Runx2可以通过MEK激酶MAPK信号通路对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因表达进行调节,为探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白在骨形成发育过程中的意义奠定基础。 孙玉娇 宫春梅 郝建忠 孙岩 刘晓影关键词:骨细胞 RUNX2 细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的构建及初步研究 被引量:1 2015年 目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)基因启动子在小鼠前成骨细胞中表达的调控机制。方法:利用软件分析小鼠的MEPE基因启动子,得到5条启动子候选序列后,设计引物进行不同长度MEPE基因启动子的构建,并分别将其转染小鼠前成骨细胞;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同长度MEPE基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,并同时观察BPM2对小鼠前骨细胞中不同长度MEPE基因启动子转录活性的影响及其时间效应。结果:成功构建了P-78^+66、P-140^+66、P-300^+66、P-500^+66、P-1 081^+66的MEPE基因启动子;分别转染小鼠前成骨细胞后,不同长度MEPE基因启动子的活性两两相比均有显著性差异(P<0.05),其中以P-500^+66的活性最强,推测-140^-500区域可能为MEPE转录表达的调控元件主要结合部位;BMP2作用于不同长度MEPE基因启动子后检测发现,BMP2在启动子-140^-500区域内可明显上调MEPE基因的转录活性(P<0.05)。结论:成功构建了MEPE基因启动子,并发现BMP2调控MEPE基因启动子的主要区域在-140^-500区域。 宫春梅 张娟娟 夏天永 孙岩关键词:基因克隆 BMP2和TGF-β1对iRoot BP Plus成牙本质修复功能的影响 被引量:1 2022年 目的 构建大鼠实验动物模型,评价BMP2和TGF-β1调控iRoot BP Plus直接盖髓后修复性牙本质形成过程的影响。方法 iRoot BP Plus为对照组、iRoot BP Plus+BMP2组、iRoot BP Plus+TGF-β1组为实验组进行盖髓,在术后14、28、42 d取材,提取RNA,进行荧光定量RT-PCR法观察SIBLING家族在大鼠牙体组织中的表达。结果 术后14 d,BMP2和TGF-β1能上调IBSP、DMP1、SPP1和MEPE的表达水平,TGF-β1作用更显著。术后28 d时TGF-β1能促进DMP1、IBSP及MEPE的表达,BMP2作用不显著。术后42 d时TGF-β1仅能显著促进IBSP的表达。结论 TGF-β1和BMP2可能通过上调SIBLING家族中DMP1、IBSP及MEPE的表达,促进iRoot BP Plus在直接盖髓后修复性牙本质的形成。 赵新春 方佳龙 李玲 李传基 刘晓影 张娟娟 孙岩 刘伽伽关键词:BMP2 TGF-Β1 小睑裂综合征的分期手术治疗 2005年 目的 总结 6 3例先天性小睑裂综合征畸形的矫正情况 ,探讨分期手术治疗的效果。方法 针对6 3例病人的具体情况分期选择性地行内眦韧带缩短固定术、外眦开大术、下睑外翻矫治术、上睑下垂矫治术和隆鼻术 ,并进行了最长达 15年的手术后随访。结果 所有的病人对手术后效果均满意。结论 在合理设计手术时间和手术方案的同时 ,对小睑裂综合征病人行分期手术可获得满意效果。 王艳丽 唐胜建 梁晓琴 周晓燕 林立新 孙岩关键词:小睑裂综合征 先天性上睑下垂 外科 手术 转录因子c-Jun调控成骨细胞Mepe基因表达的研究 被引量:3 2015年 目的:探讨转录因子c-Jun对Mepe基因的转录调控作用,并寻找c-Jun在Mepe启动子上的特异性结合位点。方法:利用免疫组织化学方法定位c-Jun与Mepe在小鼠骨组织的表达;采用real-time PCR的方法检测c-Jun的表达量改变对Mepe mRNA表达的影响;应用双萤光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析c-Jun对Mepe基因启动子转录活性的影响。结果:转录因子c-Jun在小鼠骨细胞胞核中呈阳性表达,而Mepe在小鼠骨细胞的胞浆中有表达;real-time PCR显示c-Jun过表达后,Mepe mRNA的表达显著增加(P<0.05);双萤光素酶报告基因检测系统检测显示,在成骨细胞中转染p CMV-3Tag-1-c-Jun的实验组Mepe启动子的转录活性升高(P<0.05);定点突变c-Jun的潜在结合位点后,Mepe启动子的转录活性显著下降(P<0.05)。结论:转录因子c-Jun可通过Mepe启动子上潜在的c-Jun结合位点上调成骨细胞中该基因的转录。 张娟娟 刘宗霞 孙岩关键词:成骨细胞 整合素β1调控成釉细胞外基质蛋白表达的研究 2013年 目的:观察整合素β1(Integrinβ1)在小鼠牙胚成釉细胞中的表达及其对成釉细胞细胞外基质蛋白——釉原蛋白(Amelogenin,AMELX)、成釉蛋白(Ameloblastin,AMBN)、釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)mRNA表达的影响。方法:采用免疫组化方法检测整合素β1在小鼠牙胚成釉细胞中的表达。构建真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-Integrinβ1,并将其转染至小鼠成釉细胞,利用实时定量Real-time PCR法检测AMELX、AMBN、AMTN mRNA表达水平。结果:整合素β1在小鼠牙胚发育各期成釉细胞中均有表达。RT-PCR检测显示,与转染空白质粒的对照组相比,转染pcDNA3.1/myc-hisA-Integrinβ1的成釉细胞中AMELXmRNA的表达水平明显上调(P<0.05),但对AMBN和AMTN mRNA表达无显著促进作用(P>0.05)。结论:整合素β1在小鼠牙胚成釉细胞中表达,并促进Amelogenin在成釉细胞中的表达,提示整合素β1通过调节釉原蛋白而影响牙齿的发育和矿化。 张海英 邵丹 李伯翰 韩婷婷 李东亮 王玉敏 孙岩 张娟娟 高玉光关键词:整合素Β1 成釉细胞 釉成熟蛋白多肽多克隆抗体的制备和应用 被引量:2 2015年 目的制备兔抗鼠釉成熟蛋白(amelotin)的多克隆抗体并进行鉴定和应用。方法对amelotin的蛋白质序列进行分析,选取一段氨基酸序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联免疫新西兰大白兔,制备多肽抗体,ELISA检测抗体效价,Western blot法分析抗体特异性。免疫组织化学技术观察amelotin在小鼠下颌组织的表达情况。结果制备的兔抗amelotin抗体效价为1∶1 000 000,特异性高。免疫组织化学染色结果显示amelotin在3、7 d小鼠的磨牙釉质全层有强表达,并且在7 d小鼠下颌下腺的导管上皮细胞质中也有表达。结论成功制备了效价高、特异性好的兔抗amelotin抗体。 张娟娟 冀洪海 柳云霞 孙岩关键词:多肽抗体 成釉细胞 转录因子Dlx1和Dlx2在成釉细胞中调控MMP20启动子转录活性的研究 被引量:2 2013年 目的:观察Dlx家族转录因子Dlx1和Dlx2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶20(matrix metallo proteinase20,MMP20)基因的调控作用,初步确定Dlx家族在釉质发育中的作用。方法:构建Dlx1和Dlx2真核表达载体重组质粒,用双荧光素酶报告基因检测系统分析不同剂量的Dlx1和Dlx2对MMP20基因启动子转录活性的影响;确定Dlx1和Dlx2有明显作用的启动子区段,用基因定点突变和双荧光素酶报告基因检测系统分析Dlx1、Dlx2对MMP20基因启动子转录活性的影响,以及Dlx1、Dlx2在调控MMP20基因时的相互作用;最后观察Dlx1与Dlx2共转染时MMP20基因活性表达的变化。结果:Dlx1转染小鼠成釉细胞后MMP20启动子活性表达上调,Dlx2转染小鼠成釉细胞后MMP20启动子活性表达抑制;突变MMP20启动子的Dlx结合位点后,MMP20启动子的转录活性下降,而且Dlx1失去上调MMP20启动子转录活性的作用;当Dlx1与Dlx2共转染后,在Dlx1转染剂量不变的前提下,随着Dlx2转染量的增加,小鼠成釉细胞MMP20启动子转录活性显著增加。结论:Dlx1和Dlx2在釉质发育过程中有重要的生物学意义,对MMP20基因表达具有重要的调节作用。 袁杰 刘晓影 曲政 孙岩 张娟娟 高玉光关键词:DLX 基因定点突变