孙岩
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十二五”国家科技计划农村领域陕西高等教育教学改革研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对猪CDK9和PKR基因表达的影响
- 流行性感冒是由一种急性呼吸道传染病,由流感病毒引起。甲型流感病毒属为正粘病毒科,容易发生基因重组,根据血凝素和神经氨酸酶的不同,又分为16个H亚型和9个N亚型。甲型流感病毒属中有H1N1、H2N2、H3N2和H5N1病毒...
- 孙岩
- 文献传递
- 猪Akirin2基因的定位及其影响IL-1β和IL-6 mRNA表达的研究被引量：4
- 2011年
- 本研究旨在研究猪新天然免疫相关基因Akirin2所表达的蛋白在细胞中的定位,以及在受到外源刺激物LPS刺激时,对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达的影响。本试验用实验室构建好的pEGFP-Akirin2真核表达载体转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),用激光共聚焦显微镜分析Akirin2在SUVEC的定位,并用LPS作为外源刺激物刺激转染Akirin2基因的细胞,荧光实时定量分析细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量的变化。结果表明,Akirin2基因编码的蛋白严格定位于细胞核之内,并在核仁区有明显表达,在LPS刺激后,Akirin2基因对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量都具有明显上调作用。本研究证实了Akirin2蛋白的亚细胞定位及其对细胞因子表达的影响,为Akirin2基因的作用机制的进一步研究奠定了基础。
- 徐志坤薄联峰温俊歌孙岩郜原吴江张德礼
- 关键词：LPS细胞定位细胞因子QRT-PCR
- Thr-Ser-Ser位点对猪BCL10募集功能的影响被引量：1
- 2011年
- 在完整克隆出猪BCL10基因的基础上,用大引物PCR法构建3个真核表达载体:pEGFP-B(完整猪BCL10)载体、pEGFP-D(缺失CARD结构域)载体和pEGFP-P(缺失Thr-Ser-Ser位点)载体,转染猪血管内皮细胞(SU-VEC),观察其表达情况,以此研究Thr-Ser-Ser位点(富含TS区)对猪BCL10募集功能的影响。结果显示,pEGFP-B仅在胞质中表达,并呈短棒状,而pEGFP-D与pEGFP-P则在胞质和核内均有表达。表明CARD结构域参与猪BCL10募集过程,且Thr-Ser-Ser为CARD结构域中关键氨基酸位点,这为进一步研究猪BCL10功能和作用机制奠定了基础。
- 薄联锋徐志坤郜原孙岩温俊歌张德礼
- 猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达
- 2011年
- 【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。
- 孙岩胡健温俊歌郜原薄联锋徐志坤吴耀丽张德礼
- 关键词：克隆原核表达真核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒相关猪microRNA的初步筛选
- 2012年
- 本试验旨在初步筛选出与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染相关的猪microRNA(miRNA)。采用生物信息学方法预测可能与PRRSV 3′非编码区(3′utr)产生相互作用的猪miRNA,构建PRRSV 3′utr的双荧光素酶报告基因载体psi-CHECK-utr,同时合成预测到的miRNA(ssc-miR-323、ssc-miR-105-1)及其相应的抑制物,共转染猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVEC),检测双荧光素酶活性。结果发现,ssc-miR-323与psiCHECK-utr共转染后,荧光比率略有升高,ssc-miR-105-1与psiCHECK-utr共转染后,荧光比率降低。初步判定ssc-miR-323对PRRSV 3′utr没有抑制作用,而ssc-miR-105-1对PRRSV3′utr有一定的抑制作用。
- 郜原薄联锋武小椿孙柏温俊歌孙岩徐志坤张德礼
- H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对猪CDK9基因表达的影响
- 2013年
- 【目的】研究H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对仔猪肺脏CDK9基因表达的影响,揭示流感发病机制与CDK9基因的相关性。【方法】以接种PBS的仔猪为空白对照,利用实时荧光定量PCR技术和半定量免疫组织化学法,检测H3N2和H1N1甲型流感病毒接种感染7d后,仔猪肺脏CDK9的mRNA和蛋白表达的变化,并在电子显微镜下观察CDK9阳性细胞的定位。【结果】实时荧光定量PCR检测表明,H3N2和H1N1甲型流感病毒感染仔猪7d后,肺脏组织内CDK9基因mRNA的相对表达量分别为0.42和0.36,与对照(1.0)相比显著降低(P<0.05)。半定量免疫组织化学检测结果显示,仔猪受到H3N2和H1N1流感病毒感染后,肺脏组织内CDK9蛋白的相对表达水平分别为31.4和38.7,较正常组织(61.4)显著降低(P<0.05)。电子显微镜观察发现,H3N2和H1N1甲型流感病毒感染仔猪后,肺脏细胞界限不明显,CDK9阳性细胞散在分布于终末细支气管和肺泡内,且胞核着色较深,但是细胞整体着色变浅。【结论】受到流感病毒感染后,仔猪肺脏组织内CDK9表达量降低,可能是RNApolⅡ磷酸化水平降低的原因之一。
- 李登云孙岩蒋鹏飞亢展展王静娜华琳琳张洋张德礼
- 关键词：流感病毒实时荧光定量PCR免疫组织化学
- 猪新基因P58^IPK的分子克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2011年
- 目的:分子克隆出猪P58IPK新基因,制备其多克隆抗体,为下一步研究流感病毒与宿主相互作用机制提供条件。方法:根据猪EST数据库,利用生物信息学方法,电子克隆猪P58IPK新基因;采用RT-PCR方法从猪淋巴组织分子克隆P58IPK基因完整开放阅读框(ORF),全长1 518 bp,编码505个氨基酸(GenBank登录号:HQ287801),并对其进行初步生物信息学分析;构建P58IPK原核表达载体pET-P58IPK,诱导表达并纯化重组的his-P58IPK融合蛋白,后免疫兔子制备多克隆抗体。结果:成功制备P58IPK多克隆抗体,通过双向琼脂扩散实验检测抗体有活性,ELISA鉴定血清中多抗效价达到1∶20 000,Western blot与免疫荧光检测反应特异性良好。结论:成功克隆猪新基因P58IPK,并制备了其多克隆抗体。
- 温俊歌宋豪孙岩郜原徐志坤薄联锋张德礼
- 关键词：多克隆抗体WESTERNBLOT免疫荧光
- 猪CDK9基因的克隆及其过表达对SUVEC细胞周期的影响被引量：2
- 2010年
- 【目的】克隆猪细胞周期蛋白激酶9(CDK9)基因,观察该基因过表达对猪脐静脉血管内皮细胞(SU-VEC)周期的影响。【方法】采用电子克隆方法筛选得到猪CDK9基因全长序列,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法从猪脾脏中扩增出包含完整开放读码框架(ORF)的CDK9 cDNA片段,将其与真核表达载体pEGFP-C1连接,构建重组真核表达载体pEGFP-CDK9。将pEGFP-CDK9以脂质体介导法转染至SUVEC细胞,采用绿色荧光标记和Western blot检测SUVEC细胞中CDK9基因的表达,用流式细胞仪检测转染CDK9基因后SUVEC细胞周期的变化。【结果】得到猪CDK9基因全长1820bp的cDNA序列,其ORF为1119bp,编码372个氨基酸;CDK9分子质量为42.76ku,等电点为9.04;CDK9基因定位于猪的1号染色体上。酶切和测序结果证明,重组真核表达载体pEGFP-CDK9构建成功。pEGFP-CDK9转染SUVEC细胞48h后,荧光显微镜和Western blot检测到目的基因序列在SUVEC细胞中成功表达;试验组各期SUVEC细胞比例与空载体组相比,差异无统计学意义(P>0.05),细胞周期未发生显著变化。【结论】克隆了猪CDK9基因,并在SUVEC细胞中成功进行了表达。CDK9基因的过表达未引起细胞周期发生显著变化,其可能并不参与细胞周期的调控。
- 张亚杰宋豪李艳丽孙柏孙岩张德礼
- 关键词：真核表达细胞周期
- H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对猪PKR基因表达的影响
- 2013年
- 为了研究H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对猪PKR基因表达的影响,揭示流感发病机制与PKR基因的相关性,研究利用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学法检测H3N2和H1N1甲型流感病毒感染168 h后猪肺脏组织内PKR mRNA和蛋白表达变化。结果表明:H3N2和H1N1甲型流感病毒感染仔猪168 h后肺脏组织内PKR mRNA表达量明显降低。说明经过免疫组织化学法鉴定流感病毒感染后,PKR蛋白较正常组织蛋白表达水平低。
- 张君慧李登云孙岩沈文正
- 关键词：甲型流感荧光定量PCR免疫组织化学
- β-防御素在天然免疫中的作用被引量：12
- 2011年
- 天然免疫系统是宿主抵抗外界病原微生物入侵的重要组织系统。β-防御素是一类富含半胱氨酸和精氨酸的内源性阳离子低分子抗微生物短肽,主要分布于牛的骨髓以及人和多种动物的胃肠道、呼吸道、舌、牙龈、肾、皮肤的的上皮中,是先天性免疫的重要组成部分。β-防御素具有十分广泛的生物活性,对细菌、真菌、病毒、寄生虫等多种病原体都具有杀伤作用,还对免疫细胞有趋化功能,并参与免疫调节,在天然免疫中发挥着重要的作用。
- 孙岩王路温俊歌薄联锋徐志坤张德礼
- 关键词：天然免疫Β-防御素病原体趋化功能
