孙建军
- 作品数：12 被引量：59H指数：4
- 供职机构：苏州大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人OX40L在BL-21大肠杆菌中的表达和生物学功能研究
- 2005年
- 目的克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsOX40L,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响。结果构建了GSTsOX40L原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性促进T细胞生长、增殖以及IL2的分泌。结论成功地研制了具有生物学活性的sOX40L,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础。
- 施勤陈永井孙建军马泓冰姜智毛一香张学光
- 关键词：OX40L生物学功能
- 转染人OX40L细胞株的构建及其对T细胞共刺激作用的研究被引量：13
- 2004年
- 为了构建稳定表达人OX4 0L基因的L92 9细胞株 ,初步研究OX4 0L信号通路对T细胞的共刺激效应。TRIzol一步法抽提人成熟DC总RNA ,RT PCR扩增出OX4 0L基因 ,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ Term ,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,用其培养上清感染L92 9细胞 72h后 ,经Zeocin筛选出稳定表达OX4 0L分子的L92 9细胞株 ;采用3 H TdR掺入实验、细胞凋亡、细胞周期等方法研究OX4 0L信号对T细胞体外培养的共刺激作用。结果显示 ,成功地构建了含OX4 0L基因的重组逆转录病毒载体 ;经转染包装细胞 2 93T后 ,筛选获得能稳定高表达人OX4 0L蛋白的L92 9转基因细胞 ;OX4 0L转基因细胞对体外培养的T细胞具有促增殖、活化和抗凋亡的作用 ;同时 ,OX4 0 /OX4 0L信号与CD2
- 王勤孙建军施勤陈永井戴俊陈洁束永前张学光
- 关键词：T细胞脂质体免疫应答基因转染
- 人可溶性OX40L在毕氏酵母中的表达
- 人OX40配体(OX40L/CD134L)含183个氨基酸,分子量约34～40kD,为Ⅱ型跨膜糖蛋白;属TNF家族成员,主要表达于成熟DC、活化的B细胞、
- 孙建军施勤杨明峰马泓冰周璇张学光
- 关键词：毕氏酵母
- 文献传递
- OX40/OX40L的生物学特征及功能被引量：24
- 2003年
- OX4 0 /OX4 0L是机体免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子 ,参与了T细胞的活化、增殖和迁移 ,以及生发中心的形成和DC的分化成熟 ,在介导肿瘤免疫应答和自身免疫性疾病的发生发展中具有重要作用。文章就OX4 0 /OX4
- 孙建军施勤张学光
- 关键词：OX40OX40L生物学特性生物学功能
- 两种不同的转基因细胞构建体系的比较被引量：1
- 2004年
- 目的:比较目的基因在两种不同表达体系构建的转基因细胞上的表达,选择更好的构建体系。方法:脂质体法将重组真核细胞表达载体pcDNA3/FD-L1导入L929细胞,G418(600μg/ml)筛选抗性细胞株,同时将重组逆转录病毒载体pGEZ-Term/PD-L1与辅助载体共转染293T细胞,包装病毒颗粒,其上清感染L929细胞后,经Zeocin(500μg/ml)筛选抗性细胞。流式细胞仪(FCM)检测目的蛋白在两种细胞膜上的表达。结果:两种体系对目的基因的瞬时表达无明显差别;用pcDNA3构建的转基因细胞膜上目的分子表达稳定性差,表达率低,而用pGEZ-Term构建的则目的蛋白稳定高表达,表达率近100％。结论:两种构建体系均能瞬时表达目的分子,pGEZ-Term表达体系更适于构建长期稳定表达目的基因的转基因细胞。
- 葛彦陈永井施勤孙建军王勤张学光
- 关键词：真核表达转基因细胞
- 鼠抗人OX40功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定
- 2005年
- 目的:研制功能性鼠抗人OX40单克隆抗体。方法:以转人OX40的转基因细胞L929-OX40为免疫原,常规免疫6-8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与SP2/0融合,以L929-OX40转基因细胞及PHA活化的T细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析了该单抗的亚类及抗原识别位点;采用MTT法分析单抗在体外对T细胞的促增殖效应以及ELISA分析活化T细胞分泌的细胞因子。结果:获得1株持续、稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为7E11),该单抗能特异性地识别人OX40分子和介导有效的共刺激信号,体外促进活化的T细胞增殖和细胞因子的分泌。结论:成功研制成一株能分泌功能性鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤,该抗体特异性地识别人OX40分子并具有在体外协同刺激T细胞的作用。
- 孙建军王勤陈永井居颂文邱玉华施勤于葛华时文彪张学光
- 关键词：OX40杂交瘤单克隆抗体T细胞
- OX40转基因细胞的构建及鼠抗人OX40激发型单克隆抗体的研制
- OX40(CD134)是分子量为50kD的I型跨膜糖蛋白,属TNFR超家族成员,主要表达于活化的CD4<'+>T细胞表面,CD8<'+>T表面也有少量表达.人OX40L主要表达于成熟的树突状细胞(DC)、活化的B细胞、血...
- 孙建军
- 关键词：OX40OX40L单克隆抗体逆向信号
- 文献传递
- 人OX40转基因细胞株的建立及其对树突状细胞的促分化作用被引量：7
- 2003年
- 应用RT PCR方法 ,从PHA活化的扁桃体T细胞的mRNA中 ,扩增获得编码人OX4 0分子的cDNA ,并将其克隆到pMD18 T载体 ,经PCR、酶切和测序鉴定确证。进而构建pcDNA3 1 OX4 0重组真核表达载体 ,脂质体法转染L92 9细胞 ,经G4 18筛选 ,获得能稳定高表达OX4 0分子的细胞株。经OX4 0 FITC单抗标记和FCM检测 ,阳性表达率为 89 1%。转基因细胞在可溶性CD4 0L共存条件下 ,与未成熟DC共育 ,能促进DC的进一步分化成熟 ,使DC膜分子CD4 0、CD86和CD83呈上调性表达。
- 孙建军施勤王勤朱一蓓陈洁陈永井张学光
- 关键词：基因转染共刺激分子树突状细胞
- 人乳腺癌OX40L转基因细胞株的构建及其对T细胞的共刺激作用被引量：2
- 2006年
- 背景与目的:共刺激分子OX40(CD134)和OX40配体(OX40L、CD134L)分属TNFR、TNF家族,OX40-OX40L信号能促进细胞因子的产生及提高抗原特异性记忆T细胞的数量,发挥重要的免疫调节作用。本实验旨在构建稳定表达OX40配体(OX40L)的人乳腺癌转基因细胞株,进而研究OX40-OX40L信号对T细胞体外活化和功能的调节作用。方法:运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人成熟树突细胞(dendriticcell,DC)获得全长人OX40L基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-OX40L转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435;经过G418抗性筛选和亚克隆,获得稳定表达OX40L的转基因细胞,并经RT-PCR和免疫荧光标记确证靶分子的表达;采用MTT、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光标记等方法分析转基因细胞对T细胞的增殖、IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌和T细胞上Fas分子表达的影响。结果:成功地获得稳定表达人OX40L分子的人乳腺癌MDA-MB-435转基因细胞株,该细胞株可有效地促进T细胞增殖,促进T细胞分泌IL-2和IFN-γ,在第7天,T细胞、T细胞+M435、T细胞+M435-mock、T细胞+M435-OX40L各组IL-2的浓度依次为:315ng/ml、322ng/ml、586ng/ml、973.4ng/ml;IFN-γ浓度依次为:(2518±117.6)pg/ml、(2490±124.2)pg/ml、(2695±134.5)pg/ml、(3755±187.75)pg/ml,该基因转染细胞同时还能下调T细胞上Fas分子的表达[(68.3±5.6)%,P<0.05]。结论:稳定表达人OX40L的乳腺癌转基因细胞在体外能有效地活化T细胞,介导其增殖、分泌细胞因子及抑制T细胞活化诱导的细胞死亡。
- 施勤王勤陈永井孙建军葛彦张学光
- 关键词：T细胞
- 人OX40-Ig融合蛋白的真核表达及其生物学活性的初步研究
- 目的::构建并表达具有生物学活性的人OX40-Ig融合蛋白。方法:通过PCR法从已构建的pMD18T／OX40和pMD18T／Fc载体中分别扩增出OX40胞外区和人 IgG1Fc恒定区基因,两者经TP-PCR拼接后插入逆...
- 吴鸿雅陈永井王勤孙建军张璐毛一香谢芳张学光
- 关键词：OX40真核表达共刺激分子
- 文献传递
