目的:构建一个U251细胞血清饥饿特异抗原ScFv噬菌体抗体库。方法:将U251细胞进行48小时的血清饥饿培养,将其细胞裂解液免疫4周龄的BALB/c小鼠,提取被免疫小鼠脾脏细胞总RNA,反转录成cDNA,利用RT-PCR扩增免疫球蛋白IgG的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,用一个柔性片段(Linker)连接VL和VH基因片段,将连接产物重组到pCANTAB-5E载体,转入TG1菌株中,随后加入辅助噬菌体(Help phage)M13K07超感染,构建单链抗体片段(Single chainfragment of variation,ScFv)噬菌体抗体库。结果:经过富集筛选后,库容量达到3×106cfu/L,随机挑取8个克隆进行ELISA检测,获得了1个阳性克隆。结论:成功构建了一个具有一定库容的U251细胞血清饥饿特异抗原的单链抗噬菌体抗体库,为筛选血清应答蛋白抗体、进一步克隆血清应答蛋白的基因奠定基础。
