孙梦宁
- 作品数：30 被引量：33H指数：3
- 供职机构：第四军医大学基础医学部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HCV NS3蛋白单克隆抗体的制备及其识别区域的分析
- 核表达的HCV非结构区NS3全长蛋白作为免疫原，采用小鼠腹股沟皮下NC膜包埋法免疫小鼠，按常规杂交瘤细胞的制备方法，经细胞融合、克隆化制备抗NS3蛋白的MAb。用间接免疫荧光法和Western-blot鉴定其特异性.分别...
- 尹文杨敬薛小平雷迎峰吕欣韦三华胡兴斌孙梦宁徐志凯
- 关键词：丙型肝炎病毒单克隆抗体丝氨酸蛋白酶
- 乙肝病毒preS1基因与截短C基因真核表达载体构建及表达被引量：2
- 2005年
- 目的建立乙型肝炎病毒(HCV)preS1基因与截短C基因真核表达载体,并在CHO细胞中瞬时表达。方法PCR方法扩增HBV核心区羧基端部分缺失的基因片段和preS1全基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)后测序鉴定,并通过脂质体瞬时转染CHO细胞。结果构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-Ct-preS1,成功转染CHO细胞,间接免疫荧光和RT-PCR证实pcDNA3.1(-)-Ct-preS1在CHO中表达截短的核心基因和preS1基因融合蛋白。结论成功构建preS1基因与截短C基因真核表达载体,可在CHO细胞中瞬时表达,为深入研究HBV基因免疫奠定了基础。
- 胡兴斌尹文韦三华雷迎峰吕欣杨敬孙梦宁徐志凯
- 关键词：基因免疫转染真核表达
- HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体的构建及其体外转录制备感染性RNA的研究
- 丙型肝炎是世界范围内的重要血源性传染病之一。据世界卫生组织统计，目前全世界约有1亿7千万HCV感染者，其中80％发展成慢性丙型肝炎，其中又有20％～30％进展成肝硬化，1％～2％发展成肝细胞肝癌，所以丙型肝炎为一全球性严...
- 孙梦宁
- 关键词：丙型肝炎病毒重叠延伸PCR体外转录细胞培养
- 文献传递
- HCV NS3蛋白单克隆抗体的制备及其识别区域的分析被引量：3
- 2006年
- 目的制备针对丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3全长蛋白的单克隆抗体(MAb),并分析获得的单抗识别表位所在区域,为建立以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究提供抗体工具。方法用原核表达的HCV非结构区NS3全长蛋白作为免疫原,采用小鼠腹股沟皮下NC膜包埋法免疫小鼠,按常规杂交瘤细胞的制备方法,经细胞融合、克隆化制备抗NS3蛋白的MAb。用间接免疫荧光法和Westernblot鉴定其特异性。分别构建NS3丝氨酸蛋白酶(NS3蛋白的N末端13)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1()ns3p、NS3解旋酶(NS3蛋白的C末端23)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1()ns3h,将其瞬时转染COS7细胞后,以获得的单克隆抗体作为一抗,通过免疫荧光分析获得单抗识别表位所在的区域。结果获得了2株抗NS3蛋白的单克隆抗体,这2株MAbs均特异识别NS3蛋白,并确定了它们的结合区域。结论获得了针对NS3蛋白的单克隆抗体,并对其单抗识别表位所在的区域进行了分析,为下一步进行以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究奠定了良好的基础。
- 杨敬薛小平尹文雷迎峰吕欣韦三华胡兴斌孙梦宁徐志凯
- 关键词：丙型肝炎病毒单克隆抗体丝氨酸蛋白酶解旋酶
- 人源性抗丙型肝炎病毒核糖体展示单链抗体库的构建被引量：2
- 2010年
- 汪桦田江红薛小平雷迎峰陈任安吕欣杨敬孙梦宁姚敏
- 关键词：核糖体展示单链抗体库肝炎病毒
- 调控型表达丙型肝炎病毒NS3／4A蛋白酶转基因小鼠的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠。方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A。该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠。首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代。选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(BLI)检测肝脏稳定表达荧光素酶(Luc)报告基因的经盐酸强力霉素(Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群。结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功。经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠。BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础。
- 孙梦宁兰海云马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰姚敏康健招明高汪爱勤尹文
- 关键词：肝炎病毒属动物小鼠转基因
- Tet-on和Cre／loxP双调控肝靶向表达Cre重组酶转基因小鼠的制备和功能评价被引量：2
- 2011年
- 目的制备Tet-on和Cre/loxP系统双重调控下肝靶向性表达Cre重组酶的转基因小鼠rtTALAP-1/LC-1并评价其功能,为最终建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HCV转基因小鼠模型奠定基础。方法选取适龄rtTALAP-1转基因小鼠与LC-1转基因小鼠交配,PCR法检测子代rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠基因组中是否插入了rtTA元件和Cre基因片段。双阳性rtTALAP-1/LC-1小鼠dox诱导1周后,以小动物活体成像系统检测小鼠肝脏的Luc萤光素酶信号,免疫组化检测Cre重组酶在小鼠肝脏等组织中的表达状况。结果 rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠在dox诱导后,仅在其肝脏检测到清晰的Luc萤光素酶信号,而其他脏器均未检测到萤光信号;免疫组化法也仅在小鼠肝细胞核中检测到Cre重组酶的表达,心脏、肾脏和骨骼肌等其他组织均未检测到Cre重组酶的表达。结论成功制备了rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠,其靶基因表达的诱导反应性和肝靶向性均良好,为最终制备双调控型丙型肝炎病毒(HCV)转基因小鼠模型奠定了良好的基础。
- 赵亚马玉黄豫晓兰海云孙梦宁吕欣杨敬雷迎峰张建敏康健招明高汪爱勤尹文
- 关键词：肝炎病毒属
- Tet-on和Cre/loxP系统双重调控HCV NS5B真核表达载体的设计与构建
- 2010年
- 目的:构建可受Tet-on和Cre/loxP系统双调控的HCV NS5B真核表达载体,为建立可严格调控HCVNS5B蛋白表达的转基因小鼠奠定基础。方法:以真核表达载体pBI-3为载体构建骨架,在其启动子下游依次插入luc报告基因、BGHpA和NS5B基因片段,并分别在luc报告基因上游和BGHpA尾下游引入一个loxP位点。结果:成功构建了可受Tet-on和Cre/loxP系统双调控的HCV NS5B真核表达载体pBI-3/luc-BGHpA-NS5B。结论:pBI-3/luc-BGHpA-NS5B真核表达载体的成功构建为可严格调控HCV NS5B蛋白表达转基因小鼠的建立打下了良好的基础。
- 马玉赵亚孙梦宁兰海云吕欣杨敬雷迎峰姚敏尹文汪爱勤
- 关键词：HCVNS5B转基因小鼠TET-ON
- 丙型肝炎病毒核心区截短型基因真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达
- 2005年
- 目的:建立截短的丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中瞬时表达。方法:应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),并通过脂质体转染至CHO细胞。结果:构建了真核表达载体pcDNA3.1-C t,成功转染CHO细胞,间接免疫荧光和RT-PCR证实pcDNA3.1-C t在CHO细胞中表达截短型的C蛋白。结论:成功构建羧基端部分缺失的HCV C区基因的真核表达载体,瞬时转染CHO细胞,为进一步基因免疫和构建多表位卡介苗(BCG)活载体疫苗奠定基础。
- 韦三华尹文雷迎风胡兴斌吕欣杨敬孙梦宁徐志凯
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白
- 嵌合型HCV全长cDNA的构建及体外转录制备感染性RNA的研究
- 2005年
- 构建HCVla/1b嵌合型全长cDNA克隆,进行体外转录,脂质体法转染HepG2细胞,以RT-PCR法检测HCV正、负链RNA,Western印迹检测HCV蛋白表达。结果表明,细胞在转染后8代(约35d)内,能间断检测到HCV正、负链RNA以及相对分子质量约70000的HCVNS3蛋白,证明该HCV嵌合体可以在细胞中复制和表达。本研究表明含有该嵌合型全长cDNA的质粒可以为后续HCV的研究提供大量可重复的性质均一的病毒模板,有助于深入了解HCV的复制机制。
- 吕欣徐志凯薛小平尹文雷迎峰杨敬孙梦宁
- 关键词：嵌合体体外转录脂质体转染
