公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

猪细小病毒NS1基因的克隆与序列分析被引量：2: 2008年; 目的：扩增猪细小病毒（Porcine Parvovims，PPV）LJL12株NS1基因的全长序列，并进行同源性分析。方法：参考GenBank上公布的PPV中国株NS1基因序列，设计一对特异性引物扩增LJL12株NS1基因，测定序列，使用分子生物学软件进行同源性分析。结果：LJL12株PPV NS1基因全长1989bp，编码662个氨基酸。与其他PPV中国株NS1的核苷酸同源性在98．6％-100％之间，氨基酸同源性在98．5％-100％之间。其中，与南京株的同源性最高。结论：PPV NS1蛋白具有高度保守性，适合用作诊断抗原。LJL12株PPV NS1基因的克隆，为进一步研究NS1的功能和作用奠定了基础。; 冉旭华闻晓波孟凡周恩民; 关键词：猪细小病毒 NS1基因

猪细小病毒NS1蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：4: 2009年; 通过分子生物学软件对GenBank中发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)中国株NS1蛋白的氨基酸序列进行分析,确定了主要抗原表位区域,针对此区域设计了1对特异性引物。通过PCR方法扩增出长度为843bp的基因片段,将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,构建了原核表达载体pET30a-NS1,实现了PPVNS1蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中的高效表达。重组蛋白相对分子质量约为43 000,与预期相符。Western-blot试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。以纯化的该蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为2 mg/L,一抗的最佳稀释倍数为1∶100,阳性标准为:待检血清D450≥0.36,且待检血清D450/阴性血清D450>2,作为阴阳性临界值,初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。用该方法对临床血清样本进行检测,间接ELISA判定为阳性的60份血清,经Western-blot试验只有45份为阳性。随机抽取100份猪血清样品与商品化试剂盒检测结果对比,符合率为96%,表明所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,为流行病学调查和疾病的鉴别诊断奠定了基础。; 冉旭华闻晓波孟凡周恩民; 关键词：猪细小病毒 NS1蛋白间接ELISA

猪细小病毒NS1基因的原核表达被引量：2: 2007年; 根据GenBank发表的猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)中国株基因序列设计引物,通过PCR方法扩增到了PPV LJL12株NS1全长基因,将其克隆到原核表达载pET30a(+)上,成功构建原核表达载体pET30a-NS1,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。SDS-PAGE电泳显示NS1在大肠杆菌中得到成功表达,重组蛋白大小约为86ku,与预期大小相符;Western blot分析表明,该蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有良好生物学活性。NS1在大肠杆菌中成功表达,具有免疫原性,可作为鉴别诊断抗原用于PPV的临床检测。; 冉旭华闻晓波孟凡周恩民; 关键词：猪细小病毒 NS1蛋白原核表达

猪细小病毒NS1蛋白主要抗原表位区的原核表达被引量：4: 2008年; 目的:用大肠杆菌表达猪细小病毒NS1基因的主要抗原表位区。方法:通过对GenBank发表的猪细小病毒(Porcine Par-vovirus,PPV)中国株非结构蛋白NS1的氨基酸序列分析,确定了其中抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,扩增出包含NS1主要抗原表位区的843bp的片段。酶切后连接到原核表达载体pET30a(+)上,构建的原核表达载体pET30a-NS1s转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达。结果:重组蛋白大小约为43kD,与预期大小相符。Westernblot分析表明,该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有生物学活性。结论:NS1蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中成功表达,具有免疫原性。可作为鉴别诊断抗原用于PPV的临床检测。; 冉旭华孟凡闻晓波单玉波周恩民; 关键词：猪细小病毒 NS1蛋白

猪细小病毒非结构蛋白（NS-1）的表达及鉴别诊断ELISA方法的建立: 猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)是引起猪繁殖障碍的主要病原之一。PPV在世界各地均有分布,给养猪业造成巨大的、持续的经济损失。目前PPV的免疫预防主要使用灭活疫苗,用现行的血清学诊断方法检疫灭活...; 孟凡; 关键词：PPV; 文献传递

全选清除导出

共1页<1>

孟凡