安国顺
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 供职机构：北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金首都医学发展科研基金北京市教委人才强教项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 八氯腺苷诱导SH-SY5Y和SK-N-SH细胞G_2/M期阻滞的分子机制不同被引量：4
- 2006年
- 为探索八氯腺苷的抗肿瘤作用机制,以神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-SH细胞为对象,采用四唑盐比色实验（MTT法）证明,八氯腺苷具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性.流式细胞分析显示,10 μmol/L八氯腺苷作用48 h后可导致靶细胞生长停滞于G2/M期;SH-SY5Y细胞发生明显细胞凋亡,但SK-N-SH细胞却未见凋亡.Hoechst 33342染色显示,SK-N-SH细胞发生了核分裂异常.蛋白质免疫印迹分析证明,10μmol/L八氯腺苷处理SH-SY5Y 48～72 h后,G2检验点调节蛋白ATM、Chk1、Cdc25C和Cdc2磷酸化形式明显上调,同时伴有caspase-3的激活,提示SH-SY5Y细胞发生了G3检验点通路和细胞凋亡途径的激活.与SH-SY5Y细胞不同,在SK-N-SH细胞中,八氯腺苷处理24～96 h时,磷酸化ATM、磷酸化Chk1/Chk2、磷酸化Cdc25C以及磷酸化Cdc2的水平呈现逐渐降低的趋势.结果提示,SK-N-SH细胞在八氯腺苷处理后发生了G2检验点失败.蛋白质免疫印迹分析还显示,八氯腺苷可诱导p53在SH-SY5Y细胞的表达,但却不能影响SK-N-SH细胞的p53组成性表达水平.p21在SK-N-SH的组成性表达随八氯腺苷处理时间延长而逐渐减少,但在处理前后的SH-SY5Y细胞均未检测到p21蛋白的表达.上述实验结果提示,八氯腺苷抑制两种细胞增殖的机制不同：在SH-SY5Y细胞,八氯腺苷可激活ATM-Chk-Cdc25C-Cdc2/cyclin途径和凋亡通路,使细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡;在SK-N-SH细胞,八氯腺苷诱导G2检验点失败,导致细胞阻滞在有丝分裂期,并发生有丝分裂异常.2种不同的细胞命运可能还与p53和p21表达不同有关.
- 朱玄安国顺李淑艳潘颖倪菊华贾弘禔
- 关键词：G2/M期阻滞凋亡
- 八氯腺苷对A549和H1299细胞周期的影响及机制探讨
- 2014年
- 目的八氯腺苷对肺癌细胞株A549和H1299细胞增殖及细胞周期的影响及其机制探讨。方法 A549和H1299经10.0μmol/L八氯腺苷处理后,MTT法检测细胞生长和增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测DNA-PKcs、γ-H2AX、Ku80、Ku70及TopoⅠ的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,用10.0μmol/L八氯腺苷分别处理A549、H1299细胞24、48、72h后,A549、H1299细胞生长被抑制;流式细胞分析则显示,A549、H1299细胞G2/M期细胞数增多;Western blot结果表明,γ-H2AX的表达均增加,DNA-PKcs蛋白的表达均下降,而Ku80、Ku70的表达未见明显变化;经八氯腺苷处理后TopoⅠ蛋白在A549细胞中的表达逐渐增加,而在H1299细胞中的表达却逐渐下降。结论八氯腺苷可抑制A549和H1299细胞生长,诱导细胞发生G2/M期阻滞,其机制可能与DNA-PKcs表达下调有关。在A549细胞中TopoⅠ可能通过p53依赖途径介导DNA损伤修复,从而引发对细胞的毒性作用;而在p53缺失的H1299细胞中可能是通过其它途径调控细胞周期。
- 范芳安国顺李淑艳倪菊华贾弘禔
- 关键词：细胞周期拓扑异构酶I
- 8-氯腺苷诱导的组蛋白H3K79双甲基化促进NBS1和p21的基因转录激活被引量：1
- 2009年
- 组蛋白H3第79位赖氨酸甲基化(H3K79me)修饰有单甲基、双甲基及三甲基3种形式,是常染色质的标志.然而,对于组蛋白H3K79三种甲基化各自在基因转录、DNA损伤修复中所起的作用尚不十分清楚.本研究以8-氯腺苷(8-Cl-Ado)为DNA双链断裂(DNAdouble-stranded breaks,DSB)诱导剂,采用Western印迹,在人肺癌细胞H1299检测出了DNA修复分子NBS1、细胞周期检验点相关分子p21,并发现H3K79me1、H3K79me2和H3K79me3三种甲基化修饰的组蛋白明显增加;染色质免疫共沉淀结合实时定量PCR实验显示,只有H3K79me2与DNA损伤检验点分子p21、DNA修复分子NBS1的启动子区域相结合,说明H3K79双甲基化修饰与这些基因的转录激活有关.结果提示,在8-氯腺苷引起DSB时,是H3K79me2、而不是H3K79me1和H3K79me3参与NBS1和p21基因转录激活时的染色质重塑.8-氯腺苷诱导H3K79双甲基化增强、促进H3K79me2所在染色质区域的NBS1和p21基因转录激活可能是8-Cl-Ado抑制肿瘤细胞生长作用机制之一.
- 刘畅李文娟陈瑜丁卫安国顺李淑艳倪菊华贾弘禔
- 关键词：8-氯腺苷DNA双链断裂P21表观遗传调控
- 低剂量顺铂通过p38MAPK介导的DNMT1下调降低p21与p16启动子甲基化上调p21与p16表达被引量：4
- 2016年
- 低剂量顺铂可通过诱导p21与p16表达而诱导肿瘤细胞早衰,但其机制不明。本研究探讨了低剂量顺铂诱导的He La细胞衰老过程中p21与p16的上调机制。低剂量顺铂(4μmol/L)处理He La细胞后,DNA甲基转移酶DNMT1蛋白水平降低;p21与p16启动子甲基化水平降低,二者mRNA及蛋白质水平升高;顺铂对DNMT1蛋白水平的降低作用与其激活p38MAPK有关,用SB203580抑制p38MAPK可部分逆转顺铂对DNMT1蛋白水平以及p21与p16启动子甲基化的降低作用,从而部分逆转顺铂对p21与p16表达的诱导;抑制p38MAPK也可部分逆转低剂量顺铂诱导的He La细胞早衰。上述结果表明,低剂量顺铂可通过p38MAPK信号通路下调p21与p16启动子甲基化水平,进而上调二者的表达。这些结果为解析低剂量顺铂诱导肿瘤细胞早衰的信号转导机制提供了实验依据。
- 刘玲李孟森李淑艳安国顺贾弘禔倪菊华
- 关键词：顺铂P21P16
- MLP参与心肌肥大发生过程与Calcineurin/NFAT信号通路有关被引量：1
- 2007年
- 心肌肥大是心肌细胞面对多种病理刺激时的共同反应,以心肌细胞体积增大和胚胎期基因的重新表达为标志.心肌发育调控基因肌肉LIM蛋白(muscle LIM protein,MLP)的表达异常与心肌肥大有关.为研究MLP参与心肌肥大发生的分子机制,采用去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激大鼠原代培养心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,采用RNAi技术敲减MLP的表达,分析MLP与肥大信号通路钙调神经磷酸酶(calcineurin)/活化T细胞核因子(nuclearfactor of activated T-cells,NFAT)的关系.结果显示,原代培养的心肌细胞经一定浓度的PE刺激后细胞表面积增加,肥大标志蛋白ANP、BNP表达增高,并伴有MLP表达上调.RNAi方法敲减MLP的表达则明显抑制PE诱导的心肌细胞表面积增加和BNP表达增高,并且直接影响NFAT的转录激活活性,提示MLP与心肌肥大的发生密切相关,并且可能是通过calcineurin/NFAT信号通路而参与心肌肥大的发生.
- 桂有静安国顺倪菊华贾弘禔
- 关键词：心肌肥大
- 大鼠谷氨酸受体2抗体制备及其与Caspase 3相互作用分析
- 2008年
- 目的克隆大鼠谷氨酸受体2(GluR2)基因片段,构建重组表达质粒,在原核系统诱导表达,制备多克隆抗体,分析GluR2与caspase3的相互作用。方法从大鼠脑组织提取总RNA,实时聚合酶链反应(RT-PCR)扩增GluR2基因抗原性较强的一段,定向克隆入表达载体pGEX-4T1,构建GST-GluR2融合蛋白表达质粒,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达GluR2蛋白。用SDS-PAGE方法分离目的蛋白,免疫家兔,制备抗血清。用Western Blot方法鉴定抗体的特异性,用Co-IP实验分析GluR2和caspase3的相互作用。结果SDS-PAGE显示GST-GluR2融合蛋白诱导表达成功;Western Blot显示制备的多克隆抗体具有较高的特异性;Co-IP显示大鼠脑组织中GluR2和caspase3存在相互作用。结论成功获得兔抗鼠GluR2特异性抗血清;脑组织中GluR2和caspase3存在相互作用,为进一步研究神经毒作用导致GluR2下调的分子机制奠定基础。
- 安国顺李淑艳闫琦周允贾弘褆倪菊华
- 关键词：受体谷氨酸半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 胡椒碱对C57BL/6小鼠胆囊结石形成的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察胡椒碱对实验性C57BL/6小鼠胆囊结石形成的影响。方法C57BL/6小鼠30只,对照组10只,普通饮食;结石组10只,喂含1%的胆固醇饮食;用药组10只,喂含1%的胆固醇饮食和胡椒碱(30mg/kg体重)。4周后分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及化学方法检测肝组织Scp2mRNA水平和胆脂的变化,胆固醇饱和指数(CSI)用Carey表计算。结果结石组9只出现胆囊结石,10只出现胆固醇结晶,胡椒碱组和对照组无结石和结晶形成,与结石组相比,胡椒碱组肝Scp2mRNA水平和胆囊胆汁CSI明显降低。结论胡椒碱在明显抑制实验性C57BL/6小鼠胆囊结石形成的同时,显著降低肝Scp2mRNA水平和胆汁CSI,这是否与胡椒碱的防止结石形成有关有待进一步的研究。
- 王海梅巴图乌拉吴京涛刘绍辉安国顺倪菊华李月廷祝学光
- 关键词：胡椒碱胆囊结石小鼠
- 氨肽酶N的表达及其与结石形成的关系(英文)被引量：6
- 2001年
- 为研究大鼠高胆固醇饮食时 ,肝脏氨肽酶N(APN)在实验结石形成中可能的结石发生作用 ,采用 1.2 %胆固醇饮食 4周 ,诱发新西兰兔胆囊结石形成 .根据兔APN基因cDNA序列设计引物 ,提取肝脏总RNA .利用RT PCR检测肝脏APNmRNA水平的变化 ,用组织化学方法观察肝脏毛细胆管膜上APN的表达 .观察新西兰兔胆囊结石形成过程中肝脏APN的mRNA水平的变化、APN表达及胆汁中APN活性、胆脂、总蛋白含量的变化 ,探讨APN在胆石形成中可能的作用 .经成石饲料饲养后 ,随着胆汁饱和度增加和APN活性加强 ,胆囊结石组肝脏APNmRNA水平较对照组明显增高 ,胆囊结石组胆汁中总胆固醇、CSI、总蛋白浓度及APN活性均明显高于对照组 ,且胆汁中APN活性与肝脏APN的表达及胆汁CSI增高呈正相关 .结果提示 ,当存在胆汁过饱和的情况下 。
- 李月廷祝学光赵昕亮安国顺贾弘禔
- 关键词：氨肽酶NRT-PCR生物活性结石形成
- G6976转变8-氯-腺苷引起的G_2/M期阻滞为S期阻滞并促进K562细胞凋亡被引量：4
- 2008年
- 8-氯-腺苷可抑制多种人类肿瘤细胞生长.8-氯-腺苷可引起细胞有丝分裂异常、G2/M期阻滞和晚期凋亡.为探索增强8-氯-腺苷的抗肿瘤作用,本研究以人慢性髓性白血病细胞株K562为靶细胞,联合使用Chk1抑制剂G6976与8-氯-腺苷,观察G6976处理后肿瘤细胞对8-氯-腺苷的增敏效果,探索其作用机制.流式细胞分析发现,G6976可消除8-氯-腺苷引起的K562细胞G2/M期阻滞,使转换为S期阻滞.蛋白质印迹及免疫共沉淀实验显示,G6976可灭活Chk1,激活Chk2,使Chk1-Cdc25C-CDK1级联反应转换为Chk2-Cdc25A-CDK2级联反应,从而引起细胞周期阻滞发生改变.蛋白质印迹实验证明,G6976可明显增强8-氯-腺苷作用引起的凋亡相关分子procasepase-3和PARP的激活;流式细胞分析显示,G6976促进8-氯腺苷引起的细胞凋亡.研究结果提示,G6976增强了靶细胞对8-氯-腺苷的敏感性,通过转换8-氯-腺苷引起的G2/M期阻滞为S期阻滞,促进细胞凋亡.
- 周静贾秀珍安国顺李淑艳倪菊华贾弘禔
- 关键词：G2/M期阻滞凋亡
- 荜拔油不皂化物抑制C57BL/6小鼠胆囊结石的形成被引量：3
- 2008年
- 目的:观察荜拔油不皂化物对实验性C57BL/6小鼠胆囊结石形成的抑制作用。方法:C57BL/6鼠30只,每组10只,模型周期4周,对照组喂饲普通饮食;模型组喂含1%的胆固醇饮食;用药组喂含1%的胆固醇饮食和荜拔油不皂化物(30mg/kg体重)灌胃。结果:模型组9只出现胆囊结石,10只出现胆固醇结晶;荜拔油不皂化物组1只出现胆囊结石和结晶;对照组无结石和结晶形成。与模型组相比,荜拔油不皂化物组和对照组的肝氨肽酶N(APN)mRNA及胆囊胆汁胆固醇饱和指数(CSI)明显降低。结论:荜拔油不皂化物明显抑制高胆固醇饮食诱发的小鼠胆囊结石的形成,可能通过降低肝脏APN mRNA水平及胆囊胆汁胆固醇饱和指数发挥作用。
- 安国顺王海梅巴图乌拉吴京涛刘绍辉倪菊华李月廷
- 关键词：C57BL/6小鼠胆囊结石形成氨肽酶N
