庞实锋
- 作品数：42 被引量：73H指数：5
- 供职机构：广东医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划高等学校科技创新工程重大项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- aFGF荧光分子探针基因的合成及其表达被引量：1
- 2005年
- 通过PCR技术和体外DNA重组技术将绿色荧光蛋白cDNA和酸性成纤维细胞生长因子cDNA构建成融合基因,克隆到表达载体pET3c中,构建成表达菌株BL21(DE3)/pET3c-GAF。经IPTG诱导表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25%;DNA测序结果表明设计合成的融合基因与预期相符。Westernblot结果表明重组蛋白具有aFGF的免疫原性。经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到强烈的绿色荧光。融合基因在大肠杆菌中实现了表达,用MTT法测得纯化融合蛋白与野生型aFGF促Blab/c3T3细胞增殖活性相当,为利用绿色荧光分子探针研究aFGF的在活体内的作用机制建立了新的方法。
- 庞实锋郑青黄亚东周汝滨李校堃
- 关键词：基因合成基因表达PCR技术绿色荧光蛋白酸性成纤维细胞生长因子
- 利用植物油体表达人金属硫蛋白的方法
- 本法明提供了一种利用植物油体表达人金属硫蛋白(MT)的方法。本发明方法按照植物密码子的偏好性设计合成了人金属硫蛋白基因，将所述人金属硫蛋白基因与油体蛋白基因融合，构建了含有该融合基因的表达载体，将该表达载体进一步转化受体...
- 李校堃张驰肖业臣柯实庞实锋
- 文献传递
- 红色荧光蛋白核迁移蛋白shRNA干扰载体的构建被引量：3
- 2011年
- 目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法。方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆至上述同一真核载体中,构建成一系列针对NUDC不同干扰位点的RNA干扰载体,通过采用酶切及DNA序列鉴定,然后转染293T细胞,通过荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数。结果:酶切及测序结果证实质粒为所需的序列;荧光显微镜观察结果显示,shNUDC-A的干扰效果最好。结论:成功构建了含RFP的NUDC真核shRNA干扰载体。
- 廖霞庞实锋张强杨芳郑克勤周汝滨曹定国邹宇光
- 关键词：融合基因RNA干扰SHRNA
- 番茄不同基因型对植株再生能力的影响
- 2016年
- 以浙粉202、GBS-傲兰六号、中域·胜宝、中杂九号、中蔬6号5个市售番茄品种为研究对象,设计正交试验对不同品种的植株再生情况进行比较,为后期提供优良的基因工程番茄材料奠定基础。笔者以不同品种番茄的7日龄子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织,继而将其诱导分化成再生植株,对不同番茄品种在种子发芽率、愈伤组织形成率、分化率及生根率方面进行比较。综合发芽率、愈伤诱导及器官再生这三方面因素,中蔬6号番茄的再生效率较高,并将其初步确定为遗传转化受体用于后期药用蛋白的表达。
- 薛萍肖艳双徐岩史俊卿庞实锋杜金霞
- 关键词：番茄基因型再生植株
- 利用植物油体表达人金属硫蛋白的方法
- 本发明提供了一种利用植物油体表达人金属硫蛋白(MT)的方法。本发明方法按照植物密码子的偏好性设计合成了人金属硫蛋白基因，将所述人金属硫蛋白基因与油体蛋白基因融合，构建了含有该融合基因的表达载体，将该表达载体进一步转化受体...
- 李校堃张驰肖业臣柯实庞实锋
- 文献传递
- 植物油体表达载体及利用植物油体表达人酸性成纤维细胞生长因子的方法
- 本发明采用体外基因重组方法，将人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factors haFGF)与油体蛋白基因融合合成，构建成一种植物油体表达载体，建立一种油体蛋白遗传转...
- 李校堃李海燕庞实锋杨晶刘秀明田海山薛萍王晓杰
- 文献传递
- 植物油体表达载体及利用植物油体表达人酸性成纤维细胞生长因子的方法
- 本发明采用体外基因重组方法，将人酸性成纤维细胞生长因子(Human acidic fibroblast growth factors haFGF)与油体蛋白基因融合合成，构建成一种植物油体表达载体，建立一种油体蛋白遗传转...
- 李校堃庞实锋肖业臣柯实张驰
- 文献传递
- 马铃薯X病毒载体介导的人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)在烟草中的表达被引量：4
- 2013年
- 【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的hFGF21-smGFP融合基因和hFGF21基因克隆进PVX表达载体,构建重组表达质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。采用冻融法将质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP、pgR107-smGFP和pgR107-His-hFGF21转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟的叶片,采用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA检测hFGF21-smGFP和hFGF21蛋白的表达情况。烟草叶片表达的融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,再用重组牛肠激酶(rbEK)裂解,获得纯度较高的重组hFGF21活性蛋白。hFGF21调节葡萄糖吸收活性用微量化的GOD-POD法检测。【结果】成功构建了植物病毒双元表达载体pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。表型观察发现,侵染第7天,烟草外源蛋白积累最高,smGFP和hFGF21-smGFP蛋白的积累主要在细胞质中。SDS-PAGE、Western blotting和ELISA分析表明,hFGF21重组蛋白可在烟草中有效表达,表达量高达500μg/g(鲜叶质量)。生物活性检测结果表明,纯化的hFGF21蛋白可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的吸收。【结论】利用PVX病毒载体,在本氏烟草中表达的重组hFGF21蛋白具备生物活性。
- 付宏岐薛萍杨莉芳庞实锋
- 关键词：融合蛋白烟草马铃薯X病毒
- 农杆菌介导油菜油体基因与碱性成纤维细胞生长因子融合基因转化油菜研究被引量：7
- 2009年
- [目的]利用植物转基因技术,生产药用蛋白。[方法]以带柄子叶作为转化受体,利用根癌农杆菌介导法将油菜油体基因与bFGF的融合基因转入油菜中,在获得潮霉素(Hyg)抗性植株的同时,对油菜的再生条件进行优化,并对获得的抗性苗进行PCR和Southern检测。[结果]油菜最佳转化再生条件为外植体预培养2 d,共培养3 d,菌液浓度OD值为0.3,侵染时间5 min。[结论]该研究中,融合基因已成功整合到油菜基因组中,为以后转基因植物种子的蛋白提取、分离和纯化奠定了基础。
- 徐岩肖艳双杜金霞汪洪郑伟李营庞实锋
- 关键词：植物生物反应器根癌农杆菌油菜
- 植物油体表达载体和利用植物油体表达人表皮生长因子的方法
- 本发明采用体外基因重组方法，将人表皮生长因子(humanEpidermal growth factor，hEGF)与油体蛋白基因融合，构建成一种植物油体表达载体，用根瘤农杆菌转化了拟南芥、红花、大豆、黑豆、油菜，建立了一...
- 李校堃李海燕杨晶庞实锋刘秀明田海山王晓杰王艳芳官丽莉
- 文献传递
