张云飞
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 激光捕获显微切割联合基因芯片在肿瘤差异表达基因研究中的应用
- 2007年
- 目的 为激光捕获显微切割(LCM)联合基因芯片在肿瘤差异表达基因研究中应用摸索可行的技术方法.方法 采用LCM 技术分别自原发性膀胱移行癌患者手术切除的癌组织和癌旁正常组织冻存标本获取细胞,提取RNA,用Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统进行RNA完整度(RIN)检测.取总RNA 100 ng 进行线性扩增和荧光标记,获得aRNA 探针.取等量的癌组织探针与癌旁正常组织探针,与Agilent 人全基因组寡核苷酸基因表达谱芯片杂交.通过自身比较实验分析芯片的假阳性基因数,计算假阳性率(FPR).通过数据分析寻找癌组织与癌旁正常组织差异表达基因.结果 LCM 所获微量RNA 的RIN 都在8.0 以上,表明LCM 后RNA 完整度较高.100 ng RNA 经过线性扩增与荧光标记,获aRNA 产量约16 μg,片段大小0.5 ～ 2.5 kb.芯片自身比较实验结果良好,FPR ＜ 1%,验证了实验系统的可靠性.相对于癌旁正常组织,癌组织发生表达上调的基因有286 条,下调的基因112 条.结论 以LCM 技术获得的细胞提取RNA 用于制备基因芯片探针,获得了可信的芯片杂交结果,为肿瘤基因差异表达研究提供了可行的技术方法.
- 张云飞张华张保群王海涛陈超
- 关键词：激光组织细胞学制备技术核酸扩增技术寡核苷酸序列分析膀胱肿瘤
