张俊波
- 作品数：104 被引量：95H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>
- 一种能杀灭寄生菌的同时能滤羊毛身上泥沙的药浴设备
- 本实用新型公开了一种能杀灭寄生菌的同时能滤羊毛身上泥沙的药浴设备,包括药池、升降池和钢丝绳，药池的上端设有平台，平台中部为方形漏口结构，且平台中部为方形漏口与药池的上端开口对应设置，平台的方形漏口面积与药池的上端开口大小...
- 张俊波印双红
- 文献传递
- 抑制剂LY294002调控胞内布鲁氏菌的存活
- 2015年
- [目的]检测PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002(LY)对巨噬细胞和小鼠体内羊种布鲁氏菌16M(16M)存活的影响。[方法]将抑制剂LY(20μmol/L)与细胞共同孵育1 h,并将其腹腔注射小鼠(20 mg/kg/day),然后16M感染巨噬细胞和小鼠,细菌菌落计数法计算细胞内和小鼠体内的细菌数量,MTT法检测抑制剂LY对细胞活性的影响,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抑制剂LY对TNF-α分泌的影响。[结果]抑制剂LY在20μmol/L浓度时不影响细胞活性,抑制剂LY显著抑制了布鲁氏菌在巨噬细胞和小鼠体内的存活(P<0.05),抑制剂LY显著提高了布鲁氏菌介导的TNF-α水平(P<0.01)。[结论]研究表明,PI3K/Akt信号通路抑制剂LY可调控巨噬细胞和小鼠体内羊种布鲁氏菌16M的存活,为布鲁氏菌致病机制提供科学依据。
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- NF-κB信号通路调控布鲁氏菌胞内存活分子机制的初步研究被引量：4
- 2016年
- 本试验用布鲁氏菌强、弱毒株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,旨在探讨NF-κB信号通路与布鲁氏菌强、弱毒株在胞内生存的关系。采用光滑型牛布鲁氏菌2308、粗糙型牛布鲁氏菌RB51在不同感染复数下侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,侵染0、4、8、24h后,裂解细胞收集蛋白,Western blotting检测布鲁氏菌对激活NF-κB信号通路的影响。利用不同浓度的NF-κB信号通路抑制剂处理小鼠巨噬细胞RAW264.7,然后用布鲁氏菌在不同感染复数下侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,ELISA试剂盒检测细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达量;同时对胞内菌CFU进行计数。结果显示粗糙型牛布鲁氏菌RB51可以强烈激活NF-κB信号通路,光滑型牛布鲁氏菌2308对其激活作用较弱;同时对NF-κB信号通路的激活具有浓度依赖性,在感染复数为80∶1、侵染时间为8h时光滑型牛布鲁氏菌2308和粗糙型牛布鲁氏菌RB51对NF-κB激活程度最强,且该通路参与产生TNF-α、IL-1β和IL-6;NF-κB信号通路抑制剂BAY11-7082影响布鲁氏菌在胞内的生存。因此,粗糙型牛布鲁氏菌RB51胞内存活与NF-κB信号通路密切相关,为进一步研究布鲁氏菌的胞内致病机制奠定基础,也为布鲁氏菌新型药物的研发、家畜布鲁氏菌病预防和治疗提供科学依据。
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- 关键词：巨噬细胞NF-ΚB信号通路
- 布鲁氏菌WbpL蛋白的生物信息学分析及其促细胞凋亡作用研究
- 2023年
- 目的 本研究旨在对布鲁氏菌WbpL蛋白进行生物信息学分析;分析WbpL蛋白对细胞凋亡的影响。方法 从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌WbpL蛋白的氨基酸序列,利用在线软件分析WbpL蛋白的理化性质,二、三级结构,亲、疏水性,信号肽,跨膜区及亚细胞定位,抗原决定簇及结构域。构建wbpL基因的重组表达质粒pMAL-c5x-wbpL,表达WbpL的融合蛋白并进行纯化,采用流式细胞术检测WbpL融合蛋白对RAW264.7细胞凋亡的影响。结果 WbpL蛋白由335个氨基酸组成,不稳定系数为28.70,为稳定蛋白;二级结构以α-螺旋为主,占64.18%。WbpL蛋白具有11个抗原决定簇,存在11个跨膜区域但无信号肽。WbpL蛋白位于细胞质膜,其相互作用蛋白包括MurC、MurD、MurE、MurF、MurG和FtsW。成功构建pMAL-c5x-wbpL重组质粒,并表达、纯化获得60 ku的WbpL融合蛋白。流式细胞术检测显示,随着WbpL蛋白浓度的增加以及作用时间的延长,WbpL对细胞凋亡的促进作用也随之增强。结论 WbpL蛋白具有较好的反应原性,重组表达的WbpL对RAW264.7细胞的凋亡有促进作用。以上结果为进一步研究WbpL蛋白的功能提供科学依据。
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- 关键词：布鲁氏菌生物信息学分析原核表达细胞凋亡
- 德江天麻蛋白对金黄色葡萄球菌的抑制作用研究被引量：2
- 2021年
- 为了探讨天麻蛋白对金黄色葡萄球菌(金葡菌)的抑制作用,本研究以德江天麻为原料,提取天麻蛋白,检测天麻蛋白在不同浓度和不同时间条件下对金葡菌抑菌率的影响.利用实时荧光定量PCR检测金葡菌的毒力基因的表达变化,用试剂盒检测天麻蛋白对金葡菌细胞外碱性磷酸酶含量的影响和总肠毒素表达量的影响,用细菌计数法检测天麻蛋白对感染金葡菌小鼠死亡保护率和肺部细菌数量的影响.结果显示,天麻蛋白分子量分布于25~35 kDa,其对金葡菌的抑菌率呈现出剂量依赖性,天麻蛋白的抑菌率随着与金葡菌作用时间的延长而增加;天麻蛋白可抑制金葡菌毒力基因sea,agrA,hla及总肠毒素的表达,又可增加金葡菌细胞外碱性磷酸酶含量,并且均具有浓度依赖性;天麻蛋白降低了金葡菌肺炎小鼠死亡率,减少了小鼠肺脏中金葡菌的定植数量.以上结果说明,天麻蛋白在宿主体内外均可抑制金葡菌的生长.
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- 关键词：金葡菌毒力基因小鼠
- 二氢杨梅素对杂交鲟幼鱼的生长性能、肌肉品质及血清指标的影响被引量：1
- 2022年
- 本实验旨在研究饲料中不同水平的二氢杨梅素对杂交鲟(Acipenser schrenckii♀×Acipenser baerii♂)幼鱼生长性能、血清生化及免疫指标、肌肉常规及氨基酸组成、肠道形态、消化酶活性及微生物多样性的影响。实验将平均体重为(33.02±1.39)g/尾的180尾杂交鲟,随机分为4组,每组3个重复,每个重复15尾鱼,分别投喂二氢杨梅素添加水平分别为0(对照组),0.15%、0.3%、0.6%的实验饲料60 d。结果显示:0.6%组杂交鲟的增重率和特定生长率显著低于对照组;0.15%组血清中总胆固醇、白蛋白和葡萄糖水平均显著高于对照组,0.3%组血清中谷草转氨酶水平显著低于对照组,0.3%组血清中白蛋白和葡萄糖水平显著高于对照组,0.6%组血清中谷草转氨酶、白蛋白和甘油三酯水平显著高于对照组;各实验组血清中碱性磷酸酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和总抗氧化能力均显著高于对照组。0.15%和0.3%组肠道中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均显著高于对照组。各实验组肌肉中常规组分、总氨基酸含量、必需氨基酸含量和鲜味氨基酸含量与对照组无显著性差异。综上所述,饲料中添加二氢杨梅素可提高杂交鲟幼鱼的免疫力,建议添加量为0.3%。
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- 关键词：二氢杨梅素血清指标
- 德江天麻提取物的抑菌活性研究被引量：3
- 2021年
- 利用无水乙醇对德江天麻进行提取,以牛津杯扩散法检测天麻乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌、布鲁氏菌和大肠杆菌的抑菌活性,筛选出对天麻乙醇提取物敏感的细菌后,再用稀释法分析天麻乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌、布鲁氏菌的生长的影响,并探究最低抑菌质量浓度(MIC)和最低杀菌质量浓度(MBC),检测温度、pH、紫外照射时间对天麻乙醇提取物抑菌活性的影响,运用系统预试验分析天麻乙醇提物的化学成分。结果表明:天麻乙醇的提取率为2.34%。天麻乙醇提取物对乙型副伤寒沙门氏菌抑制最强,另外也可对金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌和布鲁氏菌产生明显的抑制作用。天麻乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门氏菌、单增李斯特氏菌和布鲁氏菌的MIC分别为50、25、100和50 mg·mL^(-1),MBC分别为50、50、100和100 mg·mL^(-1)。天麻乙醇提物对温度、pH、紫外光具有良好的稳定性。预试验表明天麻乙醇提取物的主要成分包括有机酸类、还原糖、氨基酸及油脂类。
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- 关键词：乙醇提取物抑菌活性稳定性
- 泛素结合酶UBE2T基因在布鲁氏菌感染过程中的作用被引量：1
- 2021年
- [目的]探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)在布鲁氏菌感染过程中的功能。[方法]构建UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,对其进行PCR和EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切验证,并将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UBE2T基因过表达效果。设计并合成3条UBE2T基因沉默表达的siRNA(UBE2T-379-siRNA、UBE2T-599-siRNA和UBE2T-661-siRNA),将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用qRT-PCR检测UBE2T基因沉默表达效果。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验,检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性的影响。利用qRT-PCR,检测M5-90感染对RAW264.7细胞UBE2T基因相对表达量的影响,以及对过表达或沉默表达UBE2T基因的RAW264.7细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)基因相对表达量的影响。用布鲁氏菌M5-90菌株感染过表达和沉默UBE2T基因的RAW264.7细胞,用活菌计数法检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞内布鲁氏菌增殖的影响,利用相应的试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)水平、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性及白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和γ-干扰素(IFN-γ)等细胞因子的水平。[结果]成功构建了UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,过表达效果良好。3条siRNA中,UBE2T-661-siRNA的干扰效果最佳,其对UBE2T基因的沉默效率为84%。UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性无影响。M5-90感染可提高RAW264.7细胞UBE2T的表达量;沉默UBE2T可提高M5-90介导的NLRP3和Caspase-1的表达,而过表达UBE2T会抑制M5-90介导的NLRP3表达,提高M5-90介导的Caspase-1表达。沉默表达UBE2T可抑制胞内M5-90的增殖,而过表达UBE2T可促进胞内M5-90的增殖。沉默表达UBE2T可抑制M5-90介导的LDH水平,提高Caspase-3活性及IFN-γ、IL-6和IL-1β水平;而过表达UBE2T可提高M5-90介导的LDH水平,抑制Caspase-3的活性及IFN-γ、IL-1β水平。[结论]泛素结合酶UBE2T对胞内布鲁�
- 印双红张俊波易萌蔡春连张红王丽蓉陆安法陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌RNA干扰真核表达
- 布鲁氏菌DnaJ蛋白的表达及功能分析
- 2022年
- 本试验旨在运用分子生物学与生物信息学方法对布鲁氏菌DnaJ蛋白进行分析;将该蛋白进行原核表达,并检验纯化蛋白在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应的能力。以布鲁氏菌M5-90为模板成功扩增目的基因DnaJ,构建重组表达载体pET-30a-DnaJ;利用SDS-PAGE检测DnaJ重组蛋白在大肠杆菌中的表达,并对其进行纯化;用DnaJ蛋白刺激RAW 264.7细胞和小鼠脾细胞,并用DnaJ蛋白免疫小鼠;利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-4及小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体水平的变化。结果显示,DnaJ蛋白二级结构以无规则卷曲结构为主,该蛋白有11个抗原决定簇;SDS-PAGE结果显示,重组菌在37.7 kDa大小的位置有特异表达条带,获得了DnaJ纯化蛋白;DnaJ蛋白可诱导宿主细胞和小鼠产生高水平IFN-γ、IL-4、IgG1和IgG2a抗体。鉴于DnaJ蛋白可在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应,有望成为布鲁氏菌病的候选亚单位疫苗。
- 印双红张俊波张俊波张孟琴毛宏易萌蔡春连张红李志强陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌原核表达免疫反应
- PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡基因表达的影响
- 2016年
- [目的]研究阻断PI3K/Akt信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响。[方法]用抑制剂LY294002(LY)作用于细胞1 h,然后将布鲁氏菌16 M侵染细胞,应用实时定量PCR检测16 M对巨噬细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性和Bax mRNA表达的影响。[结果]阻断PI3K/Akt信号通路可显著提高16 M介导的caspase-3活性和Bax mRNA水平。[结论]PI3K/Akt信号通路可调控布鲁氏菌介导的细胞凋亡。
- 印双红张俊波罗静冉辉李建新陆安法郭飞陈创夫
- 关键词：PI3K/AKT信号通路布鲁氏菌细胞凋亡
