张妮
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：兰州大学基础医学院病理生理学研究所更多>>
- 发文基金：甘肃省新药临床前研究重点实验室开放基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠β-防御素-2的重组表达及抗菌活性检测被引量：4
- 2010年
- 目的构建大鼠β-防御素-2(rBD2)基因的真核表达载体pCAGG-rBD2,并转染小鼠纤维母细胞(L929),为解决细菌耐药性问题提供进一步的实验基础。方法以大鼠肺组织总RNA为模板,采用RT-PCR的方法获得β-防御素-2基因cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy载体并构建含有目的片段的真核表达载体pCAGG-rBD2,经脂质体介导转染L929细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测目的基因表达情况。结果成功克隆并构建了含有目的基因rBD2的真核表达载体pCAGG-rBD2,转染pCAGG-rBD2的细胞中检测到了rBD2基因在转录水平和蛋白水平的表达,其细胞培养的上清液对金黄色葡萄球菌具有杀灭作用。结论防御素在真核表达系统的成功表达,为进一步开发高效能杀灭耐药性致病微生物的多肽类新药提供实验基础和理论依据。
- 李爱娟张妮陈新年
- 关键词：基因转染真核表达生物活性
- 新型非病毒载体O-CHCS携带HBD2转染L929细胞及表达产物活性检测
- 2011年
- 目的研究O-胆甾醇基壳聚糖(O-CHCS)作为基因载体进行人β防御素-2(HBD2)基因转染小鼠纤维母细胞L929的可行性及检测目的基因表达产物的生物活性。方法构建重组质粒pCMV-hBD2,通过O-CHCS介导转染于L929细胞,提取转染细胞总RNA,用RT-PCR检测HBD2基因转录水平;收集转染细胞培养上清液,用Westernblotting检测HBD2基因蛋白的表达;用Kirby-Bauer纸片法检测HBD2抗菌活性,同时以Lipofect脂质体转染试剂作为阳性对照。结果经过O-CHCS介导转染的L929细胞,目的基因HBD2在转录水平和蛋白水平均有表达,转染细胞上清液对金黄色葡萄球菌有抑菌圈形成,结果同Lipofect的转染效果基本一致。结论成功构建了真核表达载体pCMV-hBD2,证实了O-CHCS可以作为基因载体用于目的基因HBD2的转染,且目的基因表达产物具有生物活性,为基因工程合成HBD2提供一条经济便捷的途径。
- 崔南房晓楠张妮陈名懋李学敏陈新年
- 关键词：人Β-防御素-2非病毒载体
- LPS诱导L929细胞β防御素2和schlafen-2基因的表达及其信号转导被引量：2
- 2010年
- 目的:通过研究LPS对于小鼠成纤维细胞(L929)β防御素(defb)和schlafen(slfn)基因表达的影响及其信号转导通路,探讨纤维细胞对病原微生物的防御作用。方法:LPS(200ng/ml)处理L929细胞2、4、6小时,提取细胞总RNA,用RT-PCR和荧光定量PCR的方法检测defb1,2和slfn1,2,3基因表达;应用Westernblot的方法检测了defb2蛋白的表达。NF-κB和P38MAPK两种信号转导通路的化学抑制剂BMS345541和PD169316检测defb2和slfn2基因表达的信号转导通路。结果:LPS能诱导小鼠成纤维细胞defb2的表达,并增强slfn2的表达;P38MAPK和NF-κB信号转导通路调控小鼠成纤维细胞defb2和slfn2的表达。结论:在感染时,小鼠成纤维细胞可能通过诱导defb2的产生而发挥抵御病原微生物的作用。
- 张妮房晓楠崔南陈新年
- 关键词：信号转导
