张飞云
- 作品数：28 被引量：80H指数：5
- 供职机构：首都师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市教委科技发展计划教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 鸭茅斑驳病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达被引量：1
- 2007年
- 通过RT-PCR技术从鸭茅斑驳病毒(CfMV)总RNA中获得了外被蛋白(CP)基因,并将其连接到含有编码GST基因的表达载体pGEX-4T-1后,得到重组质粒pGEXCfMV-JANCP,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLys后,用IPTG诱导其基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析后证明:CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,获得的融合蛋白分子质量约为56．0 ku．
- 董志张海龙张飞云
- 关键词：原核表达WESTERN印迹
- 侵染万寿菊的黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2007年
- 应用ELISA的方法检测到感染了黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的万寿菊。根据已报道的CMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计并合成引物,提取万寿菊叶片总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,得到约875bp的片断,与预期片断大小相符。序列分析显示:该分离物CMV-WSJ CP基因全长657bp,编码218个氨基酸,其核苷酸和氨基酸序列与CMV亚组Ⅱ的分离物有很高的同源率,分别达到98.33%～99.24%和98.63%～100%;与CMV亚组I分离物的同源率分别仅为74.43%～76.26%和77.17%～78.99%。因此,从万寿菊叶片上检测出的黄瓜花叶病毒分离物CMV-WSJ应归属于亚组Ⅱ。
- 李晶晶邓召花曾静张金方张飞云
- 关键词：万寿菊黄瓜花叶病毒外壳蛋白
- 四种广普性植物病毒高效mPCR检测方法的建立被引量：5
- 2007年
- 本研究建立了能同时检测出烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯Y病毒(PVY)的多重RT-PCR体系。TMV、CMV、PVX、PVY是四种广普性植物病毒,寄主范围广泛,并且常常发生复合侵染。本研究以上述四种病毒的CP基因部分序列设计引物,以反转录的cDNA为模板,建立多重RT-PCR反应体系,分别扩增出211～417bp的不同长度的基因片断,并通过序列测定来确认扩增序列的特异性。将反转录合成的cDNA进行浓度稀释,来对多重RT-PCR与单重RT-PCR的灵敏度进行比较,结果证明,多重RT-PCR体系能够同时快速检测这四种病毒,并且有很高的灵敏度。
- 曾静张飞云李晶晶于银霞王法军
- 关键词：多重RT-PCR烟草花叶病毒黄瓜花叶病毒马铃薯X病毒
- MNDA及MNDA-HIN200片段在大肠杆菌中克隆、表达及纯化被引量：1
- 2011年
- MNDA蛋白是与免疫反应相关的HIN-200家族成员之一,可作为模式识别受体来识别外源性双链DNA,它在人类免疫性疾病中发挥重要作用。通过PCR扩增获得的MNDA全长cDNA和MNDA-HIN200基因片段克隆到原核表达载体pET-28a中,使其N端带有一个His标签,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,经IPTG诱导后,分别经过亲和层析和分子筛层析对MNDA和MNDA-HIN200进行纯化。DNA测序表明,构建的重组质粒正确,筛选了蛋白最适表达菌株BL21(DE3);由于PYD(88 aa)结构域之间的相互作用影响MNDA的表达量及聚集状态,因此设计了PYD缺失的只含有HIN-200结构域的突变体MNDA-HIN200,最终获得了大量的、均一性好、高纯度的MNDA-HIN200蛋白,为MNDA的蛋白的晶体筛选和结构解析奠定基础。
- 李智刘勇郑晓峰张飞云
- 关键词：基因克隆原核表达纯化
- 多媒体教学方法在高校分子生物学教学中的运用被引量：4
- 2009年
- 运用多媒体教学方法与分子生物学教学实践相结合,探讨提高分子生物学的教学效果、促进学生对分子生物学的兴趣、扩大知识面、解决教学中的重点和难点、实现因材施教的个性化教学及善于归纳总结的几点体会。
- 张飞云李玉华
- 关键词：多媒体教学方法分子生物学教学改革
- 病毒学对分子生物学发展的贡献
- 2006年
- 本文通过回顾病毒学发展史上的重大事件,尝试从以下几个方面说明病毒学的新发现对分子生物学发展所做出的贡献:①噬菌体感染实验和植物病毒重建实验证明了核酸是遗传信息的载体;②逆转录病毒的发现使人们认识到遗传信息的流动不是单向的;③逆转录酶已经成为基因克隆中重要的工具酶;④朊病毒的发现使人们认识到蛋白质很有可能成为核酸之外遗传信息的载体,扩展了人们对中心法则的认识;⑤各种野生型病毒被改造成为基因工程载体,广泛应用于基因工程.
- 张海龙张飞云董志
- 关键词：病毒学逆转录病毒朊病毒病毒载体
- 植物病毒沉默抑制因子研究进展被引量：1
- 2009年
- RNA沉默是广泛存在于真菌﹑动物和植物中的一种特异序列降解机制。在植物中,RNA沉默是一种抵抗外界植物病毒入侵的自然机制。但是,植物病毒通常也会采取编码沉默抑制因子的相应机制来抵抗基因沉默,以便能够入侵植物。论述了主要沉默抑制因子的机制﹑特点和相关确认沉默抑制因子实验,并对沉默抑制因子的研究前景进行了展望。
- 王法军梁越张飞云
- 关键词：RNA沉默植物病毒
- 濒危植物翅果油树的研究进展及其开发前景被引量：14
- 2005年
- 翅果油树为我国特有的濒危植物,已列为国家二级重点保护树种.本文比较系统地综述了翅果油树的种质资源、生态学特性、植物生物学和生物化学以及资源开发和应用前景.同时对翅果油树濒危的可能原因进行了分析,并提出了保护措施.
- 董志张飞云闫桂琴
- 关键词：濒危植物翅果油树
- 多花黑麦草斑驳病毒基因组克隆与序列分析
- ＜正＞多花黑麦草斑驳病毒（Ryegrass Mottle Virus,简称RGMoV）是牧草病毒病的重要病原,是南方菜豆花叶病毒属的成员。利用反转录技术合成和扩增了 RGMoV RNA的cDNA。将cDNA克隆在载体pU...
- 张飞云鸟山重光
- 文献传递
- RNAi技术及在植物抗病毒研究中的应用
- 2006年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是一项基因沉默新技术,在抗病毒研究中,人为地将与病毒或宿主基因(宿主基因编码的蛋白质对病毒很重要而对宿主本身作用很小或不起作用)同源的双链RNA(double strand RNA,dsRNA)导入生物体内,引起与其同源的基因发生沉默,从而抑制病毒复制,达到抗病毒的目的。因此RNAi技术在抗病毒研究中倍受关注,并取得了显著成绩。主要对RNAi技术的相关知识以及在植物抗病毒中的应用进展作一综述。
- 张金方张飞云
- 关键词：RNAI技术DSRNASIRNA植物病毒
