戈凯
- 作品数：34 被引量：72H指数：5
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划美国中华医学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD自杀基因系统对胶质瘤细胞作用的实验研究被引量：3
- 1996年
- 将含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(EC-CD)基因的重组逆转录病毒感染大鼠神经胶质瘤细胞C6,获得稳定表达CD的克隆细胞C6/CD。CD可以将无毒性的原药5-氟胞嘧啶(5-FC)转化成高度细胞毒性物质5-氟尿嘧啶(5-FU)。生长抑制试验表明C6/CD细胞对5-FC高度敏感,IC_(50)为3μmol/L;5-FC对C6细胞基本无毒性,IC_(50)近6000μmol/L;而C6/CD和C 6细胞均对低浓度5-FU敏感,IC_(50)小于1μmol/L。混合细胞试验表明C6/CD细胞在5-FC存在下对C6细胞有旁杀伤效应。本工作在细胞水平建立了一个治疗神经胶质瘤的自杀基因系统,过去无人报道过。
- 徐舲飞戈凯郑仲承孙兰英刘新垣
- 关键词：神经胶质瘤胞嘧啶脱氨酶自杀基因
- 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肝癌基因治疗实验中的初步应用被引量：4
- 1996年
- 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肝癌基因治疗实验中的初步应用戈凯郑仲承冯学胜孙兰英汤钊猷刘新垣自１９９２年８月以来，美国利用逆转录病毒载体将ＨＳＶ－ＴＫ基因直接导入治疗恶性脑瘤，治疗了１０例患者，其中６例仍然存活［１］，显示ＨＳＶ－ＴＫ基因治疗肿瘤可能有临...
- 戈凯郑仲承冯学胜孙兰英孙兰英汤钊猷
- 关键词：肝肿瘤单纯疱疹病毒胸苷激酶基因疗法
- 甲胎蛋白基因表达的调控序列及其应用
- 本发明构建的1.7kb基因表达调控序列ATrAFP,它只在AFP阳性人肝癌细胞中具有较高活性,而在非肝正常细胞、正常肝细胞、AFP阴性肝癌细胞均无活性,可望用于这部分肝癌病人的基因治疗。
- 戈凯许德华郑仲承刘新垣
- 文献传递
- α肿瘤坏死因子（TNFα）基因的分离鉴定及在人肝癌细胞中的表达
- 1996年
- 应用不连续密度梯度法分离获得人肝癌浸润性单个核细胞（ＴＩＭ），ＲＮＡ斑点杂交提示ＴＩＭ中有明显的ＴＮＦαｍＲＮＡ转录。经ＲＴ－ＰＣＲ扩增反应分离得到一特异的７００ｂｐ左右的ＤＮＡ片段，ＤＮＡ序列分析证实这一ＤＮＡ片段中包含编码人ＴＮＦα成熟肽所需的的全部ｃＤＮＡ序列。将这一人ＴＮＦαｃＤＮＡ克隆到真核细胞表达质粒ｐＳＶＫ３，获得真核细胞表达重组ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ，用磷酸钙沉淀法将ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ导入人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１中的细胞培养上清中可检测到ＴＮＦα的一过性表达。结果提示ＴＩＭ可成为获取ＴＮＦα基因的来源，获得的ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ重组质粒为肝癌的基因治疗奠定了基础。
- 冯学胜郑仲承戈凯王立群汤钊猷刘新垣
- 关键词：肿瘤坏死因子肝肿瘤基因治疗
- 甲胎蛋白基因表达的调控序列及其应用
- 本发明构建的1.7kb基因表达调控序列ATrAFP，它只在AFP阳性人肝癌细胞中具有较高活性，而在非肝正常细胞、正常肝细胞、AFP阴性肝癌细胞均无活性，可望用于这部分肝癌病人的基因治疗。
- 戈凯许德华郑仲承刘新垣
- 文献传递
- HSV-tk/GCV系统对神经胶质瘤的自杀基因治疗研究被引量：1
- 1997年
- 目的在ｉｎｖｉｔｒｏ和ｉｎｖｉｖｏ水平建立致死神经胶质瘤的ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ自杀基因系统，并验证该系统的有效性。方法用携带单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ｔｋ）基因的重组逆转录病毒，感染大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６，筛选稳定表达ｔｋ的克隆细胞Ｃ６／ｔｋ；经生长抑制试验，比较Ｃ６／ｔｋ细胞对三种核苷类似物ＧＣＶ、ＢＶｄＵ和ＡＣＶ的敏感性；Ｃ６／ｔｋ细胞在裸鼠皮下成瘤，用ＧＣＶ进行治疗并观察疗效。结果ｔｋ基因整合入Ｃ６细胞并在Ｃ６／ｔｋ细胞中稳定表达；生长抑制试验表明，ＧＣＶ是最为有效的原药，Ｃ６／ｔｋ细胞对ＧＣＶ高度敏感，ＩＣ５０＜０．２μｍｏｌ／Ｌ，而野生型Ｃ６细胞和转染空载病毒载体的Ｃ６／０细胞对ＧＣＶ的ＩＣ５０≥１００μｍｏｌ／Ｌ，相差５００多倍。裸鼠ｉｎｖｉｖｏ实验得到相应结果，治疗组肿瘤受到明显抑制和杀伤。结论在ｉｎｖｉｔｒｏ和ｉｎｖｉｖｏ水平，表达ｔｋ基因的肿瘤细胞均被ＧＣＶ有效杀伤，这表明ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ自杀基因系统有可能成为基因治疗脑瘤的有效方法。
- 戈凯郑仲承孙兰英刘新垣
- 关键词：HSV-TK基因神经胶质瘤脑肿瘤基因治疗
- hGM-CSF基因克隆、病毒包转及转染人胃癌、肝癌细胞的研究
- 1995年
- hGM-CSF是一种细胞因子．具有对单核巨噬细胞趋化作用及提高它们对肿瘤的吞噬功能，并且能增加粒细胞粘附分子的表达，ADCC杀瘤作用。为了研究hGM-CSF修饰的肝癌细胞，胃癌细胞的方法．我们从人外周血淋巴细胞通过RT-PCR克隆了hGM-CSF基因．鉴定大小后，克隆人pBIuscript和LXSN中，
- 王立群钱关祥陈诗书戈凯郑仲承刘新垣
- 关键词：肝癌细胞人胃癌转染HGM-CSF人外周血淋巴细胞趋化作用
- 人原发性肝癌基因的实验研究───肿瘤坏死因子基因的初步应用被引量：12
- 1995年
- 将含人肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）ｃＤＮＡ的不同逆转录病毒载体（ＬＮＳ－ｔｎｆα、Ｌ－ｔｎｆαＳＮ及ＬＮＣ－ｔｎｆα）和质粒型真核细胞载体（ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα），分别用磷酸钙法导入肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１中，观察ＴＮＦ的表达水平。结果：重组质粒型表达载体ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα表达好，２４小时开始分泌ＴＮＦα（５０Ｕ／ｍｌ），４８～７２小时达最高值（９０Ｕ／ｍｌ），９６小时后下降（４０Ｕ／ｍｌ）。将ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα重组ＤＮＡ用磷酸钙包裹后直接进行瘤内注射，发现裸鼠外周血ＴＮＦα水平有一过性增高，３周后测量瘤体大小，发现实验组的肿瘤体积明显小于对照组（２．５±１．６ｃｍ比３．２±１．８ｃｍ，ｎ＝６，Ｐ＜０．０５），实验组荷瘤裸鼠的生存时间亦明显延长（４４．０±３．３ｄ比２８．２±２．０ｄ，ｎ＝６，Ｐ＜０．０１）。结果表明，应用ＴＮＦα基因转移进行肝癌的基因治疗是一条值得探索的途径。
- 冯学胜汤钊猷郑仲承王立群戈凯薛琼刘康达叶胜龙孙瑞霞刘新垣
- 关键词：肝肿瘤肿瘤坏死因子基因治疗
- 腺病毒介导的肿瘤血管靶向的体外自杀基因治疗研究被引量：9
- 1998年
- 本工作在血管内皮细胞中分别建立了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统,用于抑制实体肿瘤中血管生成的研究.构建含自杀基因的重组腺病毒AdCMVtk和AdCMVcd,滴度均1×10^(12)pfu/ml.病毒感染小鼠血管内皮细胞lGll(MOI=100),并鉴定自杀基因的表达,测定原药对它们的杀伤.生长抑制试验表明,GCV对lGll/Ad-tk细胞杀伤的IG_(50)为0.2μmol/ L,5-FC对lGll/Ad-cd细胞杀伤的IC_(50)为20μmol/L.电镜下显示被原药杀伤的血管内皮细胞有明显的细胞凋亡现象.同时混合细胞实验证明两系统均存在明显的旁杀伤效应.从而在体外水平证明了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统杀伤增生血管内皮细胞的有效性.
- 徐舲飞许德华戈凯郑仲承孙兰英刘新垣
- 关键词：血管内皮细胞腺病毒自杀基因肿瘤
- CEA启动子控制HSV-TK基因表达对人结直肠癌细胞的杀伤作用被引量：1
- 1998年
- 构建了以CEA启动子控制的HSV-TK基因表达质粒pCEA-TK。转染pCEA-TK的人结肠癌细胞LoVo对GCV的敏感性提高了1300倍。同样条件下,人宫颈癌细胞HeLa对GCV的敏感性仅提高8倍,且对低于血药浓度(20μmol/L)的GCV不敏感。以上结果显示在GCV存在时,CEA启动子控制下HSV-TK基因的表达使CEA阳性的人结直肠癌细胞获得专一性杀伤。此外,DNA片段分析和电镜观察表明GCV诱导转染pCEA-TK的LoVo细胞发生凋亡可能是这个系统杀死肿瘤细胞的机制之一。本工作还讨论了癌胚抗原(CEA)基因启动子用于人结直肠癌专一性自杀基因治疗的可能性。
- 戈凯蒋琼许德华郑仲承刘新垣
- 关键词：HSV-TK基因结直肠癌基因治疗
