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高GC含量DNA模板的PCR扩增被引量：6: 2013年; 目的：探索高GC含量DNA的PCR扩增条件，为扩增达托霉素生物合成基因簇及拼接奠定基础。方法：在PCR扩增体系中，使用高保真的聚合酶及添加不同浓度的DMSO、7-deaza-dGTP等增强剂，并选择合适的PCR循环程序，优化富含GC的DNA的PCR扩增条件。结果：向反应体系中额外添加1%~4%的DMSO可以显著提高富含GC的DNA的PCR扩增产物量，但会降低其特异性；7-deaza-dGTP可以提高扩增产物的特异性及保真度，但产量会有所下降。应用touch down PCR并在体系中添加7-deaza-dGTP能够提高扩增产物的特异性和产率，增加扩增的保真度。结论：应用优化的PCR扩增条件将所有达托霉素生物合成基因簇分段扩增出来，并可扩增出长达6 kb的片段，且序列完全正确，可以进行后续拼接。; 邢玉华戴素琴刘体颜王微谭俊杰曲国龙刘刚陈惠鹏; 关键词：PCR

大肠杆菌-链霉菌穿梭型BAC载体及其构建方法: 本发明涉及一种大肠杆菌-链霉菌穿梭型BAC载体及其构建方法，该BAC载体含有多克隆位点MCS，Am抗性基因，整合酶基因int，整合位点attp，接合转移片段oriT，BAC载体的复制区oriS、repA基因、sopA基因...; 刘刚戴素琴陈惠鹏邢玉华张部昌; 文献传递

大肠杆菌-链霉菌穿梭型BAC载体的构建及功能验证: 2013年; 目的构建可由大肠杆菌接合转移至链霉菌并整合至其基因组的穿梭型BAC载体,以实现大片段基因簇在大肠杆菌中完成遗传操作后,转移至链霉菌中进行异源表达。方法从原始B载体pBeloBAC11出发,利用pKD46介导的Red同源重组技术,将一段包含接合转移元件oriT、定点整合元件attp-int和安普霉素抗性基因Am的DNA片段替换其上的氯霉素抗性基因,该DNA片段通过PCR扩增得到,两端为待替换氯霉素抗性基因上下游55 bp的同源臂,替换后的载体通过酶切连入链霉菌组成型启动子ermEP1P2和绿色荧光蛋白(GFP)基因以验证其接合和整合功能。结果原载体pBeloBAC11的氯霉素抗性基因被成功替换,得到载体pBTIBAC1,利用该载体可在变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)TK24和1326中表达GFP,在pBTIBAC1上插入新的多克隆位点(MCS)后得到载体pBTIBAC11。结论 pBTIB AC11载体可通过接合转移携带外源基因片段进入链霉菌并整合至其基因组中,同时保留了原有BAC载体的功能元件,为大片段在链霉菌中的异源表达奠定了基础。; 戴素琴周围邢玉华刘体颜谭俊杰曲国龙王微刘刚陈惠鹏张部昌; 关键词：大肠杆菌链霉菌属 RED同源重组

达托霉素生产菌(ATCC31568)的紫外诱变和抗生素抗性筛选被引量：8: 2013年; 目的建立一种提高达托霉素生产水平的方法。方法以玫瑰孢链霉菌(ATCC31568)为出发菌株,利用紫外诱变结合抗生素抗性筛选以提升达托霉素生产水平。结果通过对致死率和正突变率的考察,确定紫外诱变时间为45s,利福平和庆大霉素的合适筛选浓度分别为1.4μg/mL、1.0μg/mL,得到的突变株经摇瓶发酵后,采用高效液相色谱仪(HPLC)对最终发酵液进行检测。筛选到的突变株Ge-27最高产量达到79.44 mg/L,比原始菌株提高了42.2%。结论采用紫外诱变结合抗生素抗性筛选得到了达托霉素合成水平提高的菌株。; 刘体颜邢玉华戴素琴张部昌刘刚陈惠鹏; 关键词：达托霉素紫外诱变抗性筛选

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戴素琴