文剑
- 作品数：29 被引量：61H指数：4
- 供职机构：东南大学更多>>
- 发文基金：南京市医学科技发展项目江苏省自然科学基金南京市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- 肝细胞癌中抑制细胞凋亡相关基因的差异表达被引量：2
- 2009年
- 目的:研究肝癌细胞系的基因表达概况,筛选表达差异的抑制细胞凋亡相关基因,探索肝细胞癌发生发展机制及肝细胞癌治疗的新靶点。方法:通过基因芯片技术检测肝癌细胞系Bel-7402、Hep-3B与胎儿肝细胞的全基因组序列,筛选表达差异的抑制细胞凋亡相关基因,采用RT-PCR、免疫组化对部分差异表达基因进行了验证。结果:在检测的54614个探针组中,Bel-7402、Hep-3B两株肝癌细胞与胎儿肝脏细胞相比表达共同上调2倍及2倍以上的有1452个基因;表达下调2倍及2倍以上的有2054个基因。与抑制细胞凋亡相关表达上调的基因有12个,选取2个基因进行RT-PCR、免疫组化验证,结果与基因芯片结论基本一致。结论:肝细胞癌中有众多的抑制细胞凋亡基因表达增高,通过影响TNF通路、bcl-2蛋白等多种方式共同抑制细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖。对这些基因的研究有助于阐明肝细胞癌发生发展机制,为肝细胞癌的治疗提供新的靶点。
- 张永臣叶伟文剑赵伟
- 关键词：肝细胞癌基因芯片细胞凋亡SODDSURVIVIN
- GM-CSF分泌型肝癌疫苗对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响
- 2010年
- 目的研究粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌型肝癌疫苗对小鼠移植性肝癌H22的免疫调节效应。方法将构建完成的GM-CSF分泌型H22肝癌瘤苗免疫ICR小鼠(肝癌组),同时设立无GM-CSF基因修饰H22肝癌瘤苗组及PBs对照组;应用流式细胞术检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群,CCK-8法检测脾细胞细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果肝癌组免疫小鼠外周血中CD8+T的含量高于瘤苗组及对照组(P<0.01);肝癌组CTL杀伤活性亦远高于其他两组(P<0.01)。结论 GM-CSF分泌型肝癌细胞疫苗可抑制肿瘤细胞生长,并且诱导自体T细胞向CTL方向增殖分化;CTL的增殖是该瘤苗引起特异性抗瘤免疫的基础,而GM-CSF的分泌则极大的增强了该瘤苗的免疫效果,此免疫效果主要通过直接活化CD8+CTL细胞产生。
- 郭银燕赵伟文剑张永臣
- 关键词：肝癌粒细胞巨噬细胞集落刺激因子肿瘤疫苗
- 抗HIV-1 gp120单克隆抗体体外阻断CD4细胞HIV感染的研究
- 2010年
- 目的:抗HIV-1gp120单克隆抗体对细胞感染HIV的拮抗作用研究。方法:制备抗HIV-1gp120单克隆抗体,鉴定其特性;研究抗HIV-1gp120单克隆抗体对细胞感染HIV的拮抗作用。结果:构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1gp120抗原基因片段大小一致;高浓度时该单克隆抗体能够抑制HIV病毒的感染,随着抗体浓度的降低,中和实验的抑制率也随之下降;高浓度时该单克隆抗体能够显著抑制病毒的感染,随着抗体浓度的降低,HIVgp120RNA定量增高。结论:获得6株稳定分泌抗HIV-1gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该抗HIV-1gp120单克隆抗体具有一定的抗HIV作用。
- 赵磊赵伟张永成张亮文剑
- GM-CSF分泌型肝癌疫苗对荷瘤鼠脾血细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌型肝癌疫苗对移植性肝癌小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响。方法取小鼠肝癌细胞株H22细胞1×106/只注入小鼠腹腔内,接种7d形成腹水瘤后再在小鼠体内传3代。取生长旺盛且无血性的腹水,在无菌条件下制成2×107/ml的细胞悬液,以2×106细胞/0.1ml/只接种于小鼠右前肢皮下。将肝癌细胞移植瘤动物分成3组。4天后,在右侧背部皮下进行免疫治疗,即制备GM-CSF分泌型H22肝癌瘤苗并免疫ICR小鼠(H22-GM-CSF组,n=5),同时设立无GM-CSF基因修饰H22肝癌瘤苗组(H22组,n=5)和PBs对照组(PBS组,n=5),测量各组小鼠肿瘤体积;采用细胞增殖计数法检测小鼠脾血CTL杀伤活性。结果随着效/靶比增加,各组CTL杀伤活性均增强。在效/靶比为50∶1时,GM-CSF-H22组CTL杀伤活性为60±6.1%,明显高于H22组(17.4±0.9%)和PBS组(12.2±0.6%,P<0.01);GM-CSF分泌型肝癌细胞瘤苗明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长。在21天时,H22-GM-CSF组、H22组和PBS组小鼠肿瘤体积分别为0.63±0.05mm3、1.47±0.75mm3和1.79±0.34mm(3P<0.01)。结论 GM-CSF分泌型肝癌细胞瘤苗可抑制肿瘤细胞生长,增强CTL杀伤活性。
- 郭银燕文剑张永臣杨永峰
- 关键词：肝癌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子细胞毒性T淋巴细胞
- 肝病细胞疗法的系统观被引量：3
- 2005年
- 由肝炎病毒引起的以肝功能衰竭为主要特征的重型肝炎治疗已由传统的保肝解毒向生物人工肝和肝脏细胞移植这两大细胞疗法方向发展.肝功能衰竭涉及到多器官衰竭及其对全身各系统的影响,故应从系统论的观点来探讨肝功能衰竭中存在的主要矛盾及治疗策略、细胞疗法内存在问题及其解决时应采取的系统优化方案.
- 文剑赵伟蒋淑莲廖联明
- 关键词：肝病细胞疗法系统观肝功能衰竭重型肝炎
- 脂联素影响体外培养肝细胞乙醛氧化酶1表达的研究被引量：4
- 2012年
- 目的研究脂联素(APN)对饱和脂肪酸(SFA)孵育HepG2细胞及HL-7701肝细胞乙醛氧化酶1(AOX1)分泌的影响,探讨APN对非酒精性脂肪肝脏病变(NAFLD)的治疗效果及机制。方法用100μmol/LSFA孵育细胞得到脂肪性HepG2细胞及HL-7701细胞,同时设立细胞对照组(未经100μmol/L SFA孵育)。然后采用不同浓度APN(0.5、1.0、1.5、2.5μg/mL)孵育脂肪性HepG2细胞及HL-7701细胞,将未经APN孵育的细胞作为对照。运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测2种细胞AOX1基因表达,运用免疫印迹法检测2种细胞AOX1蛋白表达。结果与未经100μmol/L SFA孵育的对照组比较,经100μmol/L SFA孵育过的HepG2细胞及HL-7701细胞的AOX1基因及蛋白表达均明显增加(P<0.05),且HepG2细胞组明显高于HL-7701细胞组(P<0.05)。加入APN孵育细胞后,2种细胞AOX1基因及蛋白表达均明显低于未经APN孵育的对照组(P<0.05);并且随APN浓度升高,降幅增加。当APN浓度达到1.5μg/mL时,细胞AOX1表达的降低不再随APN浓度的增加而发生明显变化。在APN浓度相同的条件下,HepG2细胞组中AOX1基因及蛋白表达降低的幅度明显高于HL-7701细胞组。结论 APN能有效降低脂肪化肝脏细胞AOX1基因及蛋白表达,能很好的保护肝脏细胞,避免肝脏细胞发生NAFLD。
- 张亮陈志强文剑
- 关键词：脂联素
- DSA亲和色谱检测肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶的临床应用被引量：1
- 2006年
- 目的应用建立的凝集素亲和色谱技术,分离血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶(HS-GGT),并观察HS-GGT在正常人、良性肝病及原发性肝癌(PHC)患者中的变化,以期建立1种简便易行的PHC实验室诊断方法。方法PHC 64例、肝外肿瘤22例、良性肝病68例及正常对照血清21例,以神经胺酸酶(NMD)水解后直接用欧蔓陀罗凝集素(DSA)亲和色谱柱分离,首先用柱平衡液洗脱不结合组分,再用0.05 mol/L醋酸洗弱结合组分,最后用0.1 mol/L醋酸洗脱强结合组分,用连续监测法测定洗脱液的GGT活性,计算各组分所占比例,统计分析其临床应用价值。结果DSA强结合的GGTⅢ为PHC患者所特有,以其在总GGT所占比例大于2%为PHC诊断的Cutoff值,其诊断特异性为95.5%,灵敏度为85.8%,准确度为92.0%。结论该方法能较好地鉴别诊断PHC,较以往的其他检测方法更为简便,并有较高诊断灵敏度和特异性。
- 文剑王念跃吴引伟
- 关键词：Γ-谷氨酰转移酶甲胎蛋白
- 焦磷酸测序技术检测HBV基本核心启动子变异的研究被引量：1
- 2007年
- 目的建立HBV基本核心启动子(BCP)区变异的快速检测方法。方法采用焦磷酸测序(pyrose-quencing)技术,设计一对引物,其中一条经生物素标记,PCR扩增产物含HBVBCP A1762T/G1764A双突变的区域,借用生物素包被葡聚珠纯化单链PCR产物,设计一条测序引物,运用焦磷酸测序技术对A1762T/G1764A两个变异点进行变异分析。通过对已知变异类型的HBV分离株进行测定分析,评价所建立方法的检测敏感性和特异性。结果PCR扩增后,可在2 h内得到A1762T/G1764A两个变异点的突变情况。所建立方法的检测灵敏度达到HBV-DNA血清中的含量为103copies/ml;在所分析的HBV BCP区均可检测出变异株、非变异株及混合株,且所检测的结果与直接测序方法结果符合率为95%。结论Pyrosequencing技术用于检测病毒基因突变有高通量、自动化程度高和结果准确等特点,适用于对HBV BCP区突变进行快速高通量检测。
- 谈国蕾吴引伟文剑赵磊宋玉华张亮
- 关键词：焦磷酸测序肝炎病毒乙型基本核心启动子
- 肝样细胞的诱导分化及处理胆红素的能力
- 2009年
- 目的：利用肝细胞生长因子（HGF）、表皮生长因子（EGF）和成纤维细胞生长因子-4（FGF-4）诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向肝细胞分化,为肝组织工程提供新的细胞来源。方法：取志愿者骨髓,使用密度梯度离心法联合贴壁筛选法获取MSCs,用含有HGF、EGF、FGF的培养基进行培养。用流式细胞仪、免疫细胞化学法鉴定细胞表型,检测诱导后细胞胆红素处理能力。结果：骨髓MSCs生长良好,表型为CD29阳性,CD34阴性。诱导后细胞可在21～28 d时形成肝样细胞。诱导7 d后细胞检测到AFP的表达,第14天时CK18呈阳性表达,随着诱导时间的延长,阳性率增加,并能显著降低胆红素浓度。结论：HGF、EGF、FGF联合能诱导骨髓MSCs分化为具有处理胆红素能力的肝样细胞。
- 张永臣许晓珣赵伟张亮赵磊文剑
- 关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞生长因子表皮生长因子胆红素
- 抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。
- 张永臣文剑张亮赵磊
- 关键词：HIV-1原核表达单克隆抗体杂交瘤细胞
