曹华雯
- 作品数：8 被引量：41H指数：5
- 供职机构：北京林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 甘菊BADH基因cDNA的克隆及在盐胁迫下的表达被引量：18
- 2009年
- 利用PCR、RT-PCR和PCR-RACE技术,从菊科植物甘菊(Dendranthema lavandulifolium)中克隆到2个甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)基因的同源基因,分别命名为D lBADH1和D lBADH2,GenBank登录号分别为DQ011151和DQ011152。D lBADH1的cDNA全长1821 bp,其开放阅读框编码503个氨基酸的蛋白质;D lBADH2全长1918 bp,编码506个氨基酸的蛋白质。两个基因核苷酸序列的同源性为97%,推导的氨基酸序列的同源性为98%。与已发表的其它植物BADH基因氨基酸序列的同源性在64%以上。在推导的氨基酸序列中,均含有醛脱氢酶所具有的高度保守的十肽(VTLELGGKSP)以及与酶功能有关的半胱氨酸残基(C)。在推导的氨基酸序列的系统关系中,甘菊位于其它双子叶植物和单子叶植物之间,与其植物分类的系统关系相吻合。RT-PCR-Southern半定量表达分析表明,甘菊BADH基因家族中存在表达受盐诱导的成员。
- 刘振林曹华雯夏新莉尹伟伦戴思兰
- 关键词：甜菜碱醛脱氢酶基因甘菊CDNA克隆
- 甘菊cDNA-AFLP反应体系的优化被引量：5
- 2009年
- 以甘菊为试验材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜甘菊的cDNA-AFLP分析体系,并得到了清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明:适用于甘菊叶片总RNA提取的方法为改进的Trizol法;酶切连接采用一步法,dscDNA酶切用量为300ng,酶切连接时间为8h;PCR选择性扩增反应时,反应体系中最佳组合为:引物浓度0.4mM、Mg2+浓度1.25mM、Taq酶浓度0.9U、dNTP浓度0.3mM。
- 黄河王顺利曹华雯戴思兰
- 关键词：甘菊CDNA-AFLP反应体系优化
- 甘菊DlBADH1基因启动子DBP12表达特性研究被引量：5
- 2007年
- 用pCAMBIA1305.2做载体,构建含有甘菊(Dendranthema lavandulifolium)DlBADH1基因(登录号:DQ011151)启动子DBP12(登录号:DQ497621)的质粒pCHW-2。利用叶盘转化法,通过农杆菌EHA105菌株介导,将重组质粒导入烟草叶片。采用GUS组织活性检测法鉴定烟草转基因植株,结果表明:DPB12启动子驱动的GUS基因表达无组织特异性。对转基因植株进行NaCl、ABA、SA处理,GUS荧光测定发现:100μmol/L ABA胁迫处理24 h和400 mmol/L NaCl胁迫处理48 h,转pCHW-2烟草植株叶片中GUS酶活性均有大幅度提高。该结果表明:DlBADH1基因启动子DBPl2是一个诱导型启动子。这一研究结果为进一步研究甘菊中BADH基因调控表达机理提供了参考。
- 曹华雯刘振林夏新莉尹伟伦戴思兰
- 关键词：转基因烟草SANACLGUS活性
- 盐胁迫下甘菊叶片中BADH基因表达及甜菜碱含量的变化被引量：4
- 2010年
- 利用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和雷氏盐紫外分光光度计法分别测定了400mmol/L NaCl胁迫处理0,0.5h,2h,12h,1d,2d,4d,6d,8d,10d和12d,甘菊叶片中BADH基因表达和甜菜碱含量的变化,并讨论了二者间的相互作用关系。试验结果表明,在高盐胁迫下甘菊叶片中BADH基因和甜菜碱含量均呈现先上升后下降的趋势。在处理初期(0.5h和2h)BADH基因的表达量与对照相比略有下降,此后随处理时间的增加BADH基因表达持续增大,在胁迫处理6d时BADH基因表达量最大为对照的4.6倍,6d之后BADH基因表达量逐渐降低。甜菜碱含量在NaCl处理0.5h突然增大以应对胁迫反应,此后其含量出现了小幅的震荡上升,在胁迫处理4d时达到了最大值,此后随胁迫处理时间的增加甜菜碱含量逐渐降低。二者之间的变化并不是同步的,而是存在滞后性,分析认为甘菊叶片中BADH基因表达与甜菜碱积累间存在相互抑制的作用。
- 曹华雯牛雅静黄河戴思兰
- 关键词：甘菊盐胁迫BADH基因REAL-TIME甜菜碱
- 甘菊BADH基因启动子功能鉴定及诱导型启动子的分离
- 菊花(Chrysanthemum×morifolium Ramat.)是我国传统十大名花和世界四大鲜切花之一,近年来利用植物基因工程技术培育菊花新品种已经成为研究热点,并取得了初步成果。目前在菊花转基因研究中主要使用花椰...
- 曹华雯
- 关键词：甘菊BADH基因转基因烟草GUS活性
- 甘菊BADH基因启动子的克隆与瞬时表达分析被引量：8
- 2008年
- 为了给菊花[Dendronthema×grandiflora (Ramat.) Kitam.]的转基因育种提供诱导型启动子,借鉴5′RACE策略,利用锚定PCR步移的方法克隆了甘菊[Dendranthema lavandulifolium(Fisch.ex Trautv.)Makino]甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)基因的4个启动子序列,分别命名为DBP11、DBP12、DBP21和DBP22(GenBank登录号:DQ497620～DQ497623),序列长度分别为1230、1249、1273和574bp。4个启动子序列对应区域的同源性在89%以上。其中DBP12和DBP21分別是甘菊BADH基因DlBADH1和DlBADH2(GenBank登录号:DQ011151和DQ011152)的启动子序列,DBP11和DBP22为甘菊BADH基因家族中其它成员的启动子序列。序列分析表明,上述启动子序列中均含有多处与水分胁迫和脱落酸诱导相关的顺式作用元件。在表达载体pCAMBIA1305.2的基础上,用所克隆的4个甘菊BADH基因启动子序列分别置换驱动其报告基因表达的35S启动子,建立了新的植物表达载体。用其转化农杆菌,并用叶盘法侵染甘菊,瞬时表达的结果表明这些启动子序列均具备驱动报告基因表达的功能。
- 刘振林曹华雯夏新莉尹伟伦戴思兰
- 关键词：甘菊甜菜碱醛脱氢酶基因启动子克隆
- NaCl胁迫对4种菊科植物叶片中甜菜碱含量的影响
- 甜菜碱是一种重要的无毒渗透保护剂,普遍存在于高等植物中.本文以甘菊、黄花蒿、高山蓍、紫菀4种菊科植物叶片为实验材料,采用蒸馏水浸提24h,与雷氏盐反应后经紫外分光光度比色测定其甜菜碱含量,各样品的平行测定变异系数均在5﹪...
- 王淑慧曹华雯戴思兰
- 关键词：菊科植物盐胁迫紫外分光光度测定
- 文献传递
