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核黄素联合紫外线A照射对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果被引量：5: 2007年; 目的考察核黄素联合紫外线A对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果。方法以伪狂犬病毒为模拟病毒,以Vero细胞为培养细胞,用病毒感染细胞,制备病毒增殖液;分别采用5、10、15及20J/cm2联合核黄素处理血浆,观察处理前后血浆病毒灭活的效果,筛选灭活病毒合适的紫外线剂量;将含有伪狂犬病毒血浆的样本分为实验组:采用上述筛选的紫外线强度照射联合核黄素处理;对照组1:单独采用紫外线A照射;对照组2:单独采用核黄素处理;阴性对照组:未采用紫外线照射和核黄素处理;分别在实验前后采用96孔细胞病变法,对照细胞病变效应,根据Reed-Muench公式计算病毒滴度。结果采用不同强度的紫外线联合核黄素处理血浆,紫外线强度为15及20J/cm2的灭活血浆病毒的效果明显,处理后病毒滴度分别下降4.55和4.39logs;实验组和对照组1病毒滴度分别下降4.55和4.28logs,有统计学意义(P<0.05);对照组2病毒滴度降低1.93logs,没有病毒灭活效果。结论核黄素联合紫外线可灭活血浆中伪狂犬病毒,单独紫外线照射也具有灭活血浆伪狂犬病毒的效果;而仅单独采用核黄素处理而未联合紫外线照射,对血浆中伪狂犬病毒灭活效果不明显。; 聂咏梅张晓敏周豪杰付涌水江朝富汪传喜陶黎阳张甜曹开源田小东; 关键词：血浆核黄素紫外线A 伪狂犬病毒 VERO细胞

前列腺特异性膜抗原新型剪接变异体PSM-E对前列腺癌细胞骨转移的作用被引量：3: 2012年; 目的探讨前列腺特异性膜抗原（PSMA）新型剪接变异体PSM—E对前列腺癌细胞（RM-1）骨转移的作用及其机制。方法脂质体将PSM—E、PSMA基因转染RM-1，构建细胞模型（RM-1-PSM-E、RM-1-PSMA），检测羧肽酶活性；黏附及迁移实验测定不同细胞在骨基质胶模型上的黏附及迁移能力；Westernblot检测不同细胞中粘着斑激酶（FAK）的表达及磷酸化水平。结果与转染空质粒的RM-1比较，RM-1-PSM—E、RM-1-PSMA的羧肽酶活性分别升高1．96倍和2．13倍，而黏附能力分别升高12倍和14倍，加入羧肽酶活性抑制剂后，RM-1-PSM—E、RM-1-PSMA的黏附能力分别降低2．6倍和3．5倍；与转染空质粒的RM-1比较，RM-1-PSM—E、RM-1-PSMA的迁移能力降低，且FAK的磷酸化水平分别升高1．47倍和1．66倍。结论PSM—E对前列癌细胞骨转移具有调控作用，这与PSM—E的酶活性及FAK磷酸化水平有关。; 毛晓鹏赵良运王道虎曹开源丘少鹏; 关键词：前列腺癌骨转移前列腺特异性膜抗原

人Flt3配体基因的克隆及其在CHO细胞中的表达被引量：1: 2008年; 目的克隆人Flt3配体(Flt3 LIg and,FL),并在CHO细胞中进行表达。方法从健康人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR技术,扩增Flt3配体胞外区cDNA功能性片段,经DNA测序证实后,将得到的片段基因插入pcDNA3.0表达载体,构建了pcDNA3.0-FL真核表达载体;将重组质粒pcDNA3.0-FL转染CHO细胞,经G418筛选出阳性细胞克隆,扩大培养,提取细胞总蛋白,用SDS-PAGE分离并Western blotting检测到在相对分子质量约24 000处有一显色条带。结果FL胞外区cDNA被正确克隆到真核表达载体pcDNA3.0中并在CHO细胞中成功表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.0-FL并在CHO细胞中成功表达,为FL的相关研究和应用开发奠定了基础。; 梁蔚阳蒋玉辉曹开源; 关键词：FLT3配体 CHO细胞基因克隆

Endophilin B1基因及蛋白的生物信息学分析被引量：1: 2012年; 目的:利用生物信息学方法分析人Endophilin B1基因以及蛋白的结构,为进一步研究其功能和参与的调控机制提供一定的理论依据。方法:通过GenBank搜索Endophilin B1基因及蛋白序列,采用生物信息学方法分析该基因在不同物种中的差异,分析该蛋白的亚细胞定位,二级结构,功能域以及抗原表位。结果:该基因编码一个长度为365个氨基酸的蛋白,具有两个BAR和SH3两个功能域。Endophilin B1蛋白理论分子量为40796.3,理论等电点为5.78。二级结构中α螺旋(H)占56.44%,β折叠(E)占5.48%,无规卷曲占38.08%。Endophilin B1蛋白含有4个可能的N连接糖基化位点,5个潜在的酪蛋白激酶II磷酸化位点,7个豆蔻酰基化位点,3个PKC磷酸化位点以及2个酪氨酸激酶磷酸化位点。并进一步利用DNAstar软件分析了了该蛋白的抗原表位。结论:利用生物信息学预测出的结构和功能信息,能为Endophin B1蛋白的相关研究提供一定的信息基础。; 王铸何霞冯发深关琳琳徐霖张定梅汪杨罗燕芬曹开源; 关键词：B1 BAR DOMAIN DOMAIN

鉴定发热伴出疹症候群传染病相关病毒病原体的多重实时定量PCR的引物、探针及检测方法: 本发明公开了鉴定发热伴出疹症候群传染病相关病毒病原体的多重实时定量PCR的引物、探针及检测方法。包括对水痘-带状疱疹病毒、人类小DNA病毒B19、肠道病毒（肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型）、登革热病毒、风疹病毒和麻疹...; 黎孟枫朱勋吴珏珩曹开源何振健袁洁李隽张定梅徐霖杨纨张赫男; 文献传递

小鼠FasL基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达: 2012年; 目的构建含有小鼠Fas Ligand(FasL)基因的重组真核表达载体,并检测FasL蛋白在其稳定转染的HEK293细胞中的表达情况,为构建表达小鼠Fas L的树突状细胞(DC)模型,深入研究DC联合T细胞防治移植物抗宿主病(GVHD)的新方法奠定基础。方法从小鼠脾脏中提取RNA并逆转录为cDNA,以该cDNA为模板扩增FasL基因,插入pcDNA3.1(+)载体中构建pcDNA3.1(+)-FasL重组质粒,利用脂质体将其转染HEK293细胞,用G418筛选稳定表达细胞系,Western blot确定重组蛋白的表达。结果通过酶切及测序证实FasL序列正确插入表达载体pcDNA3.1(+),Western blot检测证实转染重组质粒的细胞能正确表达FasL蛋白,G418筛选后能够得到稳定表达FasL的抗性细胞株即FasL-HEK293。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-FasL和稳定表达FasL的HEK 293细胞成功构建,为后续FasL-DC细胞的研究打下了坚实基础。; 何霞汪杨何善阳王铸冯发深关琳琳罗燕芬潘金成曹开源徐霖; 关键词：FAS LIGAND 基因转染 HEK293细胞

ADA、ACE、LDH、CEA的联合检测在结核性和恶性胸腔积液中的鉴别诊断价值被引量：17: 2007年; 目的测定血清和胸水中腺苷脱氨酶(ADA)、血管紧张素转化酶(ACE)、乳酸脱氢酶(LDH)与癌胚抗原(CEA)的水平,探讨其指标联合检测对结核性和恶性胸水的鉴别诊断意义。方法对临床已确诊的72例胸腔积液患者(结核性40例,恶性32例)的胸水和血清分别采用酶免疫法和化学发光法进行ADA、ACE、LDH和CEA含量测定。结果结核性胸水中ADA的含量为(60.2±20.10)U/L,ACE的含量为(35±9.6)U/L,LDH的含量为(338±41)U/L,CEA的含量为(12.8±5.82)μg/L;在恶性胸水中,ADA为(11.02±5.23)U/L,ACE为(16±11.0)U/L,LDH为(379±69.0)U/L,CEA为(39.9±19.7)μg/L。结核性胸水ADA和ACE含量较恶性胸水组明显增高(P<0.01),CEA在恶性胸水中含量较结核性胸水组明显增高(P<0.01)。胸水中ADA和ACE的检测对结性性胸膜积液诊断的敏感性分别为84.3%、87.5%,特异性分别为87.5%、80.0%;而胸水中LDH和CEA的检测对恶性胸膜积液诊断的敏感性分别为84.3%、75.0%,特异性分别为80.0%、93.0%。四项指标联合检测敏感性为78.1%,特异性为97.5%,较单一指标的特异性高。结论胸水中ADA、ACE、LDH和CEA的联合检测对结核性和恶性胸水的鉴别诊断具有一定价值,有助于临床胸水性质的诊断。; 梁剑平温冬梅曹开源; 关键词：腺苷脱氨酶血管紧张素转化酶结核性胸水恶性胸水

广东地区GBV-C/HGV5′NCR区序列变异的研究: 2000年; 目的　了解广东地区GBV -C/HGV 5′NCR区的序列变异情况。方法　以GBV -C和HGV的 5′NCR区完全同源的序列设计合成引物用于套式RT -PCR。从广东地区的 10例GBV -C/HGV感染者血中扩增了 10个序列 ,分别克隆至pUC19或pT -Adv载体。以 3 5S标记的双脱氧链末端终止法对这 10个序列分别进行正反两个方向的序列测定。结果　 10株序列相互间同源性最大为 10 0 % ,最小为 84 4%。与Genbank所载 3个标准株的相应序列比较 ,其同源性最大为89 4% ,最小为 83 9%。与国内周育森报道的相应序列比较 ,两者之间的同源性最大为 96 1% ,最小为 85 0 %。比较还发现 ,这 10株序列的起始处有一段 3 8nt的区域与上述标准序列相比变异比较大 ,其与标准序列的同源性最高只有 79 0 % ,最低为 60 5 %。其中 9株相互间的这一 3 8nt序列的同源性则高达 92 %～ 10 0 %。结论　广东地区流行的庚型肝炎病毒大多带有HGV的特殊点。少数为GBV; 付涌水曹开源吕凌; 关键词：克隆 DNA 庚型肝炎

2012-2013年广州地区散发性腹泻诺如病毒流行病学调查被引量：6: 2014年; 目的调查2012—2013年广州市散发性腹泻诺如病毒（NoV）流行状况和流行特点。方法收集2012—2013年广州地区门急诊散发性腹泻患者粪便标本2236份，采用荧光定量RT—PCR对采集的标本进行NoV核酸检测并初步分型，收集并分析病人的临床基本信息，分析NoV阳性检出率在不同年龄段、性别、月份季节差异，同时对NoV阳性的标本进行A组轮状病毒、B组轮状病毒、C组轮状病毒、腺病毒、札如病毒、星状病毒检测，研究其混合感染情况。结果NoV阳性检出率为10．60％（237／2236），以GⅡ型为主。NoV在18～40岁的青年人中检出率最高（16．47％），7～17岁少年最低（3．67％），男女检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。NoV全年都可检测到，夏季为高发季节，其中7-8月份检出率最高。NoV与其他肠道病毒共感染率为14．35％（34／237），其中与A组轮状病毒共感染率最高。结论广州地区NoV夏季为高发季节。在18-40岁的青年人中检出率最高，以GⅡ型感染为主，混合感染最常见为A组轮状病毒。; 汪杨徐霖罗燕芬钟慧玲张素粉张定梅朱勋曾谷城曹开源; 关键词：诺如病毒 RT-PCR

单克隆抗-D细胞株的建立及抗-D抗体Fab段的基因序列分析被引量：6: 2002年; 目的 :建立分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞株 ,分析编码一株人单克隆抗 -D抗体Fab段的基因序列。方法 :以EB病毒 (EBV)转化分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞 ,建立分泌抗 -D抗体的淋巴细胞株。设计扩增人lgM重链Fd段及κ轻链的引物 ,以聚合酶链反应进行扩增 ,对扩增产物进行分子克隆及测序。结果 :分别用轻链引物和重链引物从一分泌lgM抗 -D的单克隆细胞株扩增出一约 650bp和 70 0bp的特异带。序列分析表明 ,其核苷酸及其所推导的氨基酸 (AA)序列符合人lgFab段的序列特征。结论 :获得了抗 -D抗体Fab段基因 ,为基因工程抗; 付涌水曹开源李树浓张春艳; 关键词：聚合酶链反应抗-D抗体 FAB段新生儿溶血病

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曹开源

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