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粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性被引量：22: 2006年; 粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化,用Westernblot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。; 朱健琦刘志刚高波吉坤美邢苗; 关键词：粉尘螨变应原纯化

真核表达与原核表达的德国小蠊变应原Bla g 2蛋白结构的光谱学研究被引量：12: 2006年; 在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白是以包涵体的形式存在,在细胞内聚集成无生物活性的不溶性颗粒,而采用真核表达系统收获的蛋白已经是经过正确的体内折叠的活性蛋白。文章分别用真核与原核表达系统表达重组变应原,通过对不同来源目的蛋白的荧光光谱和CD谱的比较和分析,对真核系统与原核系统表达出的Bla g2蛋白的高级构象进行研究,阐明了Bla g2在溶液中的二级结构,并推断出其三级结构组成类型。; 刘志刚朱健琦黄海珍徐宏; 关键词：德国小蠊 BLA 真核表达原核表达

粉尘螨主要变应原的克隆、表达、纯化及重组蛋白变复性的光谱学研究: 变态反应性疾病(过敏性疾病)被世界卫生组织(WHO)列为21世纪重点防治的三大疾病之一，是当前世界性的重大卫生学问题，世界各国变态反应性疾病的总发病率高达10％～30％，此类疾病包括过敏性哮喘(外源性哮喘)、过敏性鼻炎等...; 朱健琦; 关键词：粉尘螨变应原重组蛋白变态反应性疾病; 文献传递

屋尘螨变应原Der p 1基因原核表达产物的纯化及特性鉴定被引量：9: 2006年; 目的建立屋尘螨主要变应原Derp1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性。方法大量诱导表达含pET24a-Derp1质粒的BL21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Derp1纯化蛋白的抗原活性。结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Derp1蛋白。Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Derp1蛋白呈强阳性反应,最佳血清稀释度为1∶64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应。结论纯化后的融合蛋白Derp1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子。; 刘志刚杨慧付颖媛高波朱健琦吉坤美; 关键词：屋尘螨变应原 P 复性纯化

德国小蠊变应原Bla g 2蛋白变复性的荧光光谱研究被引量：2: 2006年; 包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Blag 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2在不同pH下的荧光光谱分析,推断出Bla g 2蛋白分子在不同环境下构象的变化及其光谱学特征,初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。; 朱健琦刘志刚黄海珍朱永烽徐宏; 关键词：德国小蠊变应原 BLA 复性荧光光谱

蟑螂过敏原诊断试剂的研制及临床应用研究: 刘志刚冉丕鑫雷均平赖荷吴海强吉坤美于陆包莹李盟李国平高波王勤邹泽红许卓谦喻海琼周珍文胡川何毅华马慧朱健琦韩庆国李湘辉; “蟑螂过敏原诊断试剂的研制及临床应用研究”项目在国家自然科学基金、广东省科技计划等项目的连续资助下，历经九年，极大的丰富了中国变态反应学过敏原的基础研究领域的内容，大大促进了临床上蟑螂过敏的免疫诊断水平和脱敏治疗水平的提...; 关键词：; 关键词：免疫诊断

粉尘螨Ⅱ类变应原的克隆表达、纯化及其免疫学特性被引量：6: 2006年; 目的获得大量具有良好的IgE结合活性的Der fⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET-24a表达载体上,得到重组质粒pET-Der f2,工程菌经IPTG诱导培养,明显表达出Der fⅡ蛋白,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用Western blot检测免疫学活性。结果成功提取粉尘螨的总RNA,扩增出编码129个氨基酸的长度为387个碱基对的核苷酸片段。序列分析结果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6个碱基不同。使用高效表达的原核载体pET,所得产物的5′端含有抗原性极小的6个组氨酸标签。表达质粒在E.coliBL21 star中得到高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,目的蛋白具有良好的变应原性。结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达载体,并纯化了具有免疫特性的重组蛋白,为进一步开展Der fⅡ蛋白和重组疫苗研究奠定了基础。; 朱健琦刘志刚高波吉坤美邢苗; 关键词：粉尘螨变应原纯化

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朱健琦