李云玖
- 作品数：5 被引量：31H指数：3
- 供职机构：北京协和医院更多>>
- 发文基金：卫生部临床学科重点项目北京市联合攻关项目基金卫生部部属（管）医疗机构临床学科重点项目建设专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 实时定量PCR检测血中大肠杆菌的方法学及在外科的初步应用
- 本研究目的是建立RQ-PCR/(real-time quantitative PCR/)检测大肠杆菌/(Escherichia coli．E．coli/)DNA的方法并初步用于临床血标本检测。以大肠杆菌β-右旋半乳糖苷酶...
- 李云玖
- 关键词：实时定量PCR体液大肠杆菌肠屏障
- 文献传递
- 实时定量PCR在细菌移位研究中的潜力被引量：6
- 2006年
- 实时定量PCR(RQPCR)是一种新型核酸定量技术,具有实时监测、快速、灵敏、精确、特异等特点。与原有PCR技术相比,其最主要的优势是能对待测样本起始PCR反应模板进行准确定量,扩大了PCR的应用范围。目前在细菌移位研究中,对肠黏膜屏障损伤的早期诊断一直没有很理想的方法。RQPCR能准确定量外周血中细菌DNA,有利于对肠黏膜屏障损伤的早期诊断和损伤程度评估。
- 李云玖马恩陵张立阳
- 关键词：实时定量PCR细菌移位肠屏障
- 实时定量PCR检测外科发热患者静脉血中大肠杆菌DNA的方法被引量：22
- 2006年
- 目的建立实时定量PCR(RQPCR)检测大肠杆菌DNA的方法,评估临床标本检测效果。方法选择大肠杆菌β右旋半乳糖苷酶基因作为检测靶基因设计引物和探针,采用HighPurePCRTemplatePreparationKit提取基因组DNA,建立20μlTaqMan探针RQPCR反应体系。对26份外科发热患者标本(血标本20份,腹腔引流液3份,胸水2份,胆汁1份)进行荧光RQPCR检测。结果引物和探针特异性好,标准曲线相关系数在0.991～0.999之间。在最低检测限(102拷贝/反应体系)以上,仪器对不同含量大肠杆菌样本检测的平均准确性为(112.19±7.48)%;批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(16.33±4.80)%和(16.03±7.80)%。血标本中大肠杆菌DNA平均提取效率为(38.40±14.05)%,提取效率平均CV为(20.57±16.92)%。含有同等量大肠杆菌模拟标本存放在-20℃或-70℃6个月内,大肠杆菌DNA拷贝数差异无显著性(P=0.130)。外科发热患者血中大肠杆菌阳性率高达30%,最高含量约为1.24×106个/ml;另外在胆汁及腹腔引流液标本中检测出的大肠杆菌DNA含量明显高于相同患者血中含量。结论RQPCR是一种快速、灵敏、特异、重复性好、能定量起始模板拷贝数的检测大肠杆菌DNA方法,可用于定量检测全血及其他体液标本中大肠杆菌含量。
- 李云玖马恩陵廉东波张立阳王秀荣何桂珍蒋朱明
- 关键词：实时定量PCR肠黏膜屏障发热体液
- 实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB培养基和血中对抗生素的药物敏感性被引量：3
- 2006年
- 目的 建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法。方法 临床血培养获得大肠埃希菌株，以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性。分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃希菌至终浓度为0．5麦氏单位，采用不加抗生素的标本作为生长对照组，加入耐受或敏感的抗生素的标本作为耐受药物组或敏感药物组，37℃震荡培养，分别提取0、1、2、3、4小时的基因组DNA，以大肠埃希菌特异β-右旋半乳糖苷酶基因的引物和TaqMan探针，对标本进行实时定量PCR检测。结果 实时定量PCR方法有较好的重复性（CT值变异系数0．26％～1．56％）和精确度（大肠埃希菌DNA提取效率在LB培养基中为43．6％，在血中为26．7％），标准曲线线性关系好（R^2≥0．998）。培养1～3小时后，耐受药物组与生长对照组的大肠埃希菌DNA拷贝数均呈对数增长，在LB液体培养基中增至约19～120倍，在新鲜全血中增至约6～11倍；敏感药物组大肠埃希菌DNA拷贝数呈减少趋势，在LB液体培养基中减至0．22～0．12倍，在新鲜全血中为1．29～0．14倍。上述药敏结果与常规纸片法一致。结论 采用实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性，结果与常规纸片法一致，但更快速。
- 马恩陵廉东波李云玖张立阳谢秀丽徐英春蒋朱明
- 关键词：实时定量PCR大肠埃希菌
- 外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA实时定量PCR检测与体征及血细胞计数的相关性被引量：2
- 2006年
- 目的 定量检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA含量，研究其与体征及皿细胞计数之间的相关性，并比较不同检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异。方法 以实时定量PCR（RQ-PCR）定量检测40份健康人静脉血标本，确定临床阳性检测限。31例发热患者共72份血标本同时进行常规细菌培养及大肠埃希菌DNA定量检测，比较两种检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异，两个取血时间点间大肠埃希菌DNA含量的变化，并计算大肠埃希菌DNA含量与体温、心率、白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间的相关性。结果 RQ-PCR定量检测大肠埃希菌DNA阳性率为52．78％（38／72），显著高于细菌培养阳性率2．78％（2／72）（P=0．000）。同一患者两个时间点血标本检测结果显示，静脉血中大肠埃希菌DNA在2～6小时内的升降变化达10～20倍。血中大肠埃希菌DNA含量与体温和心率之间均显著相关（P=0．000），相关程度中度密切（，值分别为0．565和0．546），与白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间无显著相关关系。结论 RQ-PCR检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌阳性率远高于血培养。血中大肠埃希菌DNA拷贝数变化速度较快。血细胞计数不能很好反映血中大肠埃希菌的含量，而体温心率的影响因素较多，因此RQ-PCR能更及时准确反映大肠埃希菌血症的严重程度，有助于对肠屏障损伤导致肠道细菌移位的动态程度或后果进行评估。
- 马恩陵李云玖廉东波张立阳康军仁王秀荣蒋朱明
- 关键词：大肠埃希菌DNA肠黏膜屏障发热
