- 反向膜杂交技术检测结核分枝杆菌耐药株的临床价值研究
- 2009年
- 目的评价反向膜杂交技术对于肺结核病患者的结核分枝杆菌耐药基因检测的临床应用价值。方法利用反向膜杂交技术检测了40株耐药结核分枝杆菌培养分离株、10株非结核分枝杆菌培养分离株、240例肺结核患者痰标本的rpoB、katG,、inhA突变基因。240例痰标本同时进行结核菌培养。106株膜芯片检测阳性样本测序验证。结果特异性方面:膜芯片检测40株结核分枝杆菌培养分离株,均为阳性;10株非结核分枝杆菌培养分离株,均为阴性。灵敏度方面:膜芯片检测240例临床痰标本中,66例结核分枝杆菌阳性,占27.5%。耐药基因准确性方面:106例膜芯片检测阳性的样本进行测序验证,两者结果完全一致。结论反向膜杂交技术可快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变基因,与常规结核分枝杆菌培养、测序检测耐药基因的结果相符,可应用于临床。
- 李兵吴驰刘厚明詹能勇李晓鹤罗瑞玲余卫业单万水
- 关键词：结核分枝杆菌耐药基因
- 三种PCR方法在HBV基因整合位点确定中的应用比较被引量：1
- 2010年
- 目的 比较反向PCR（Inverse-PCR,IPCR）、Alu-PCR、接头PCR（Cassette-ligationmediated-PCR,CLM-PCR）三种PCR（Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应）方法在乙型肝炎病毒基因组（HBV DNA）整合位点筛选中的应用效果.方法 手术获取1例乙肝表面抗原（HBsAg）阳性的肝癌患者的肝癌组织,提取基因组DNA,设计相应引物,分别采用三种PCR方法进行扩增,将PCR产物回收,克隆至PMD18-T载体进行基因测序,利用BLAST工具进行序列比对,分析三种方法在乙型肝炎病毒（HBV）DNA整合位点确定中的效果.结果 采用Inverse PCR方法检测PCR产物后得到7个特异性电泳条带,克隆后得到测序结果22个,经序列比对发现3个整合位点;采用Alu-PCR方法,产物电泳得到13个特异性条带,得到测序结果32个,序列比对未发现整合位点;采用CLM-PCR方法,得到12个特异性电泳条带,得到测序结果4个,未发现整合位点.结论 在查找HBV整合位点的研究中,IPCR方法具有较稳定的扩增能力及较高的位点检测率.
- 王兰天祝葆华周伯平刘威龙廖明凤李晓鹤陈心春李涛
- 关键词：聚合酶链反应病毒整合
- HBV拉米夫定耐药株及BCP、Pre—C突变株芯片检测方法的应用研究
- 2009年
- 目的构建针对HBV拉米夫定耐药株及c区启动子（basal core promoter，BCP）、前C区（Pre-C）突变株，多位点突变的基因芯片检测方法。并与DNA测序法比较，以了解该芯片的灵敏度、特异性、稳定性等性能并初步应用于临床实践。方法该基因芯片能对HBVDNA及P区（DNA多聚酶区）：180、204、207三个拉米夫定耐药突变位点；C区启动子（basal core promoter，BCP）及前C区（Pre—c）：nt1896、nt1899、nt1862、nt1764、nt17625个突变热点，共8个HBV突变位点进行检测，并用测序法对该基因芯片进行验证。结果①检测HBVDNA方面，两种方法检测结果100％相符。②检测突变位点方面：总体统计32份阳性血清共有256（32×8）个突变位点。两种方法检测结果有251个突变位点完全相符；5个突变位点不完全相符，基因芯片法检测为混合型，测序法检测为野生型或突变型之一。结论结果提示该基因芯片和DNA测序法检测结果阳性率无差异，特异性与DNA测序法相当，检测混合株有更大优势。
- 李兵周伯平彭劲甫陈立炎张文唐蔚王召钦尹忠华徐六妹罗瑞玲李晓鹤刘赛云
- 关键词：寡核苷酸探针突变
- 结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6kDa蛋白原核载体的构建及在E.coli中的高效表达
- 2010年
- 目的获得高效表达的结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6kDa蛋白(ESAT-6)。方法利用PCR方法扩增出ESAT-6基因片段,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-21b(+),酶切分析和序列测定鉴定出ESAT-6基因的阳性重组子,将其转化入E.coliBL21(DE3),阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;重组蛋白经Ni-NTAHis.BindResins纯化。结果成功扩增出ESAT-6基因片段,构建了重组表达质粒pET-ESAT-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6kD,经亲和纯化后的ESAT-6重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别。结论利用pET原核表达系统成功的对结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白进行高效表达和纯化,重组蛋白具有良好的免疫活性。
- 李兵刘威龙张晶张明霞邓群益李晓鹤罗瑞玲余卫业陈心春周伯平
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
