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密闭气袋在牛卵母细胞体外成熟培养中的应用被引量：3: 2011年; 通过简易避光密闭气袋在人体呼出的气相环境下(CO2浓度约5%,O2浓度约15%),利用生化培养箱进行牛卵母细胞的体外成熟培养。结果显示,牛卵母细胞在密闭气袋中培养与对照组(正常培养)相比成熟率(74.79%比71.69%,P>0.05)、孤雌激活后卵裂率(83.07%比81.39%,P>0.05)和囊胚发育率上(26.75%比22.87%,P>0.05)均无显著差异,但是密闭气袋培养各项数据均略高于对照组。本试验验证了该技术的方便性和有效性,为此技术在生产实践中的推广应用提供依据。; 赵贵民吴苏君刘文强井勇杨文琳高志敏雷安民; 关键词：卵母细胞体外成熟低氧

一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法: 本发明公开了一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法，包括以下步骤：A1.卵母细胞的收集；A2.密闭气袋的制备及卵母细胞的体外成熟培养；A3.卵母细胞的孤雌激活及体外培养：在体外成熟培养22～24h挑选排出第一极体的成熟卵母细...; 雷安民赵贵民吴苏君刘文强井勇杨文琳高志敏; 文献传递

超表达Cdc20基因不影响牛卵母细胞第一极体排出被引量：1: 2012年; CDC20(cell division cycle 20)是后期促进复合物(anaphase-promoting complex,APC)的共激活剂之一,也是纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint,SAC)的靶点,在细胞周期调控中扮演重要角色.为探讨Cdc20在第一极体排出(first polar body extrusion,PBE I)中的作用,Cdc20基因被成功克隆并构建了真核表达载体pCdc20-Venus,随后用T7 Mmessage Mmachine Kit(Ambion)以线性化pCdc20-Venus为模板体外转录(in vitro transcription)获得带帽的Cdc20-Venus mRNA,将Ccdc20-Venus mRNA显微注射到体外培养的牛卵母细胞胞质中进行超量表达.结果表明,真核表达载体pCdc20-Venus转染HeLa细胞后能够正常表达,绿色荧光在细胞核周围呈弥散状分布;将Cdc20-Venus mRNA注射到牛卵母细胞胞质后,胞质内有绿色荧光出现.Cdc20-Venus mRNA注射组卵母细胞的PBE I率(48.9%)与Venus mRNA注射组卵母细胞的PBE I率(50.9%)和未注射组卵母细胞的PBE I率相比均没有显著差异(P>0.05).通过Cdc20在牛卵母细胞内的超量表达,结果显示,超量表达Cdc20基因对牛卵母细胞PBE I没有显著影响(P>0.05).; 杨文琳安鹏李伟赵贵民赵贵民史芸安; 关键词：卵母细胞超表达减数分裂

CDC20对体外培养的牛卵母细胞第一极体排出和卵裂影响的研究: CDC20(cell division cycle20)，也叫IPl、FZY、p55CDC，是E3泛素连接酶APC/C的一个激活剂，能够泛素化标记securin和cyclinB1。CDC20也是纺锤体检查点的靶点，在保证...; 杨文琳; 关键词：MORPHOLINO 卵母细胞卵裂; 文献传递

牛孤雌胚胎发育过程中泛素定位与线粒体分布的相关性被引量：2: 2013年; 【目的】研究泛素(Ub)在牛孤雌胚胎发育过程中的表达定位及与荧光标记线粒体分布的关联性。【方法】将人工合成Ub基因插入真核表达载体pVenus的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒pVenus-Ub,采用脂质体2000介导重组质粒pVenus-Ub转染Hela细胞,经荧光显微镜观察和PCR检测,探讨重组质粒pVenus-Ub在Hela细胞中的表达情况;用体外转录试剂盒将pVenus-Ub转录为cRNA并注射牛卵母细胞,选择成熟卵母细胞并将其经离子霉素孤雌激活后,在荧光显微镜下观察Ub的表达和定位情况;同时,用JC-1荧光染料对牛卵母细胞线粒体进行染色,观察线粒体的分布,探讨Ub定位与线粒体分布的相关性。【结果】重组载体pVenus-Ub能在Hela细胞中表达;Ub蛋白在牛体外成熟卵母细胞及孤雌发育过程中均有表达,分布于整个胞质中,并在皮质及核区分布较集中;成熟卵母细胞及早期孤雌胚胎中Ub蛋白与线粒体共定位。【结论】成功建立了Ub基因的真核表达体系及孤雌胚胎表达体系,且在牛孤雌胚胎发育过程中Ub的定位及与线粒体的分布相互关联。; 马苗苗李伟井勇杨文琳雷安民; 关键词：泛素体外转录显微注射牛卵母细胞孤雌激活

p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核表达载体构建被引量：3: 2011年; 本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达,并构建其真核表达载体。首先利用RT-PCR和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mRNA和蛋白表达进行检测。然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pVenus-P21真核表达载体。经脂质体2000介导重组质粒pVenus-P21转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察、RT-PCR检测,确认重组质粒在Hela细胞内的表达及定位。最后应用体外转录试剂盒将p21-venus体外转录为cRNA,并注射牛卵母细胞,荧光显微镜下观察其表达及定位。结果显示,在牛卵体外成熟过程中,各时期均存在p21基因mRNA及蛋白的表达。构建的真核表达载体pVenus-P21能够在Hela细胞中正确表达及定位。p21-venus cRNA显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位,为研究P21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础。; 赵贵民杨文琳吴苏君云彦雷安民; 关键词：牛卵母细胞 P21基因体外转录显微注射

p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核表达载体构建: P21 Cip1/Wafl又名细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(CDKN1A)，是最早被发现具有细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKIs)作用的Cip/Kip家族成员。P21具有广泛的CDK抑制活性，通过负调控细胞周期...; 赵贵民杨文琳吴苏君云彦雷安民; 关键词：牛卵母细胞 P21基因免疫荧光染色体外转录显微注射真核表达; 文献传递

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杨文琳