柯涛
- 作品数：3 被引量：16H指数：3
- 供职机构：河南农业大学食品科学技术学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 基因体外诱变的一种新方法被引量：3
- 2004年
- 在PCR的过程中 ,采用 5 溴脱氧尿苷三磷酸 (BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸 (dTTP)的方法 ,对克隆的野油菜黄单胞菌的α 淀粉酶基因进行了体外诱变。结果表明 ,BrdUTP浓度越高 ,诱变越强 ;浓度越低 ,诱变越弱。当BrdUTP浓度为dTTP的 0 1 %时 ,可以得到最多的正诱变结果。用LBSP鉴别培养基初筛 ,然后用Yoo改良法测定酶活 ,仅一轮诱变就获得了其表达产物α 淀粉酶的酶活分别降低了 5倍和提高了 2 0倍的两个突变基因。再以后者为PCR模板进行第二轮诱变 ,从而筛选到了α 淀粉酶的酶活提高 4 0倍的突变体。此诱变方法克服了用碱基类似物在体内诱变由于核酸复制酶等的校正作用而造成诱变无效的难题 。
- 马向东柯涛黄春华周俊初
- 关键词：PCR体外诱变Α-淀粉酶基因
- 温度对大肠杆菌感受态细胞的影响被引量：9
- 2003年
- 在不同的培养温度下制备一系列大肠杆菌感受态细胞,并选取其中一组感受态细胞在4种不同的温度下保存,对培养温度与大肠杆菌感受态形成的关系以及感受细胞在不同保存温度下的保持情况进行了研究.结果表明,不同培养温度下大肠杆菌生长出现高峰期不同.其中,18℃和25℃,出现于对数期早期,而30℃和37℃则出现于对数期中后期.在25℃条件下转化效率最高.感受态细胞在4种不同温度条件下保存,受活菌数和感受态2种因素的影响程度都不同.转化效率在前期都有不同程度的提高,液氮条件下保存感受态细胞时间最长.
- 柯涛张勇法潘园园马向东
- 关键词：温度感受态细胞
- α-淀粉酶基因体外定向进化的研究
- 引导蛋白质功能进化常用的方法是模拟和加速蛋白质基因自然重组的进程,即在蛋白质的基因中引进随机突变.因此,蛋白质基因体外随机突变的方法影响着引导蛋白质功能进化的效果.该研究采用5-溴脱氧尿苷三磷酸(5-BdU)部分取代脱氧...
- 柯涛
- 关键词：定向进化易错PCR体外诱变Α-淀粉酶基因
- 文献传递
