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GST-FHL2融合蛋白的表达及纯化被引量：2: 2008年; 目的高效表达和纯化可溶性GST-FHL2融合蛋白。方法(1)PCR法扩增FHL2 (Four and a half LIM domains 2)基因的编码片段,分别在5'端和3'端加上EcoR I和Xho l酶切位点,并克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;(2)利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-FHL2在大肠杆菌B121(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;(3)超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-FHL2融合蛋白;(4)通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-FHL2的表达。结果(1)成功构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,测序结果证明FHL2与载体的GST在同一读框;(2)0.1 mmol/L的IPTG在23℃的条件下能诱导可溶性GST-FHL2融合蛋白高效表达;(3)在Western blot分析中,GST-FHL2能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-FHL2的分子量相符。结论正确构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-FHL2融合蛋白,经谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性GST-FHL2融合蛋白。; 沈秀张林吉进武君黄瑞燕刘树楷李妍妍; 关键词：FHL2 谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白原核表达纯化

HERG基因与心律失常被引量：2: 2008年; 人类果蝇相关基因——HERG是从人类海马cDNA文库中鉴定出来,与果蝇EAG基因具有同源性。HERG基因编码延迟整流钾通道的α亚单位,这一类钾通道属电压依赖性通道。实验研究发现HERG基因突变引起其编码的通道结构及功能改变,从而引起心肌细胞动作电位时程改变,临床上表现为心律失常。HERG基因已被证实与心律失常发病有关,尤其是与长QT综合征LQT2的发生有密切关系。现就HERG基因的结构,HERG钾通道的结构、特性及其与心律失常的关系作一综述。; 沈秀张武君林吉进; 关键词：HERG 心律失常长QT综合征

心脏HERG钾通道相互作用蛋白的筛选及其对该通道调控功能的研究: 目的：筛选与心脏HERG钾通道存在相互作用的蛋白质，在哺乳细胞中验证所筛选出的蛋白质与HERG之间的相互作用，并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的调控作用。　　方法：⑴以带有编码人类心脏HERG 钾通道的cD...; 沈秀张; 关键词：心律失常 HERG钾通道蛋白调控化学药理学; 文献传递

蛋白质与蛋白质相互作用研究技术被引量：9: 2008年; 蛋白质-蛋白质相互作用的研究是蛋白质组学的重要内容,随着研究的深入,促进了研究技术的发展和完善。本文将对研究蛋白质相互作用的技术一酵母双杂交、化学能量共振能量转移、双分子荧光互补技术、荧光能量转移技术、生物分子相互作用分析技术、蛋白质芯片等技术的特点及应用做一综述。; 武君沈秀张林吉进; 关键词：蛋白质组学蛋白质-蛋白质相互作用酵母双杂交

Meox2与心血管疾病: 血管平滑肌细胞的增殖在动脉粥样硬化的发生发展及球囊血管成形术后再狭窄的发生中发挥非常关键的作用.相反,心肌梗死等心肌损害后,心肌细胞的增殖则往往不足以补偿损害所造成的心肌细胞丧失.因此,减少动脉粥样硬化时血管平滑肌细胞的...; 沈秀张刘树楷林吉进; 关键词：心血管疾病动脉粥样硬化心肌细胞同源盒基因; 文献传递

与HERG钾通道相互作用的FHL2蛋白对该通道功能的调控被引量：1: 2009年; 目的筛选与心脏人类果蝇相关基因(HERG)的编码蛋白钾通道存在相互作用的蛋白质,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的调控作用。方法①以带有编码人类心脏HERG钾通道的cDNA为模板,通过PCR方法得到编码人类心脏HERG钾通道氨基末端(404个氨基酸)的DNA片段。将该片段克隆入pGBKT7载体,构建"诱饵"质粒pGBKT7-HERG-NT。②应用酵母双杂交技术筛选人类心脏cDNA文库。③以PCR法扩增4个半LIM结构域(FHL2)基因的开放读框片段(ORF),并克隆入pcDNA3.0载体。④以pcDNA3.0-herg转染HEK293细胞,应用G418筛选得到HEK293/HERG细胞株。以pcDNA3.0-FHL2转染HEK293细胞,筛选得到HEK293/FHL2细胞株后,再将pcDNA3.0-herg转染入该细胞株。⑤应用膜片钳技术,研究FHL2对HERG通道功能的影响。结果①用酵母双杂交技术筛选得到37个阳性克隆,其中含有表达FHL2蛋白的克隆。②膜片钳检测发现,FHL2蛋白在增加HERG电流幅度的同时并调节其激活过程。结论FHL2蛋白能与HERG氨基末端相互作用而影响HERG钾通道的功能。; 沈秀张林吉进武君黄瑞燕; 关键词：酵母双杂交 HERG FHL2 膜片钳技术

Meox2与心血管疾病被引量：1: 2009年; 血管平滑肌细胞的增殖在动脉粥样硬化的发生发展及球囊血管成形术后再狭窄的发生中发挥非常关键的作用。相反,心肌梗死等心肌损害后,心肌细胞的增殖则往往不足以补偿损害所造成的心肌细胞丧失。因此,减少动脉粥样硬化时血管平滑肌细胞的增殖及促进缺血性心脏病时心肌细胞的增殖,将是治疗心血管疾病的理想方法。同源盒基因(homeobox gene)Mesoderm homeobox2(Meox2)对心脏的胚胎发育具有重要的调控功能,在成年期某些病理情况下Meox2对血管平滑肌细胞及心肌细胞仍有调控功能。现就Meox2对心血管系统的调控作一综述。; 沈秀张刘树楷林吉进; 关键词：同源盒基因心血管系统

冠状动脉内注射替罗非班治疗冠状动脉介入中无复流的疗效观察被引量：1: 2010年; 目的观察冠状动脉内注射替罗非班对冠状动脉介入(PCI)术中无复流的疗效。方法 21例PCI中出现无复流患者,冠脉内注入替罗非班注射液12μg/kg负荷量,0.15μg/(kg·min)静脉维持36h,比较给药前与冠脉内给药后10min冠状动脉造影的校正后的计帧数(CTFC)、TIMI血流分级。结果给药前与给药后校正后的计帧数(CTFC)由(62.42±11.60)帧降至(28.62±8.60)帧,前后比较差异有统计学意义(P<0.01);给药前后TIMI血流变化比较,显效13例(61.9%),有效7例(33.3%),总有效率达95.2%。结论冠状动脉内注射替罗非班治疗PCI术中无复流现象有效。; 李斌吴志峰李远鹏沈秀张廖建宁孙如鹏许圣威; 关键词：无复流冠状动脉介入治疗替罗非班疗效

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沈秀张