狄旭
- 作品数：18 被引量：52H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：中国医学科学院基金“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的可溶性高效表达被引量：11
- 1999年
- 用PCR的方法从含有鲑鱼降钙素基因的质粒中扩增出目的基因，并将其插入硫氧还原蛋白融合表达质粒pTrxFus中，转入大肠杆菌GI724，以色氨酸诱导，使之与硫氧还原蛋白融合表达，融合蛋白可占菌体总蛋白的50％左右。用超声破碎菌体后，上清直接上CM－SepharoseFF柱进行分离纯化，得到融合蛋白的纯度达90％以上。动物体内活力分析表明，融合蛋白有明显的降低血钙的作用，此工作为重组鲑鱼降钙素的开发应用和功能研究打下了基础。
- 刘深基陈松森张松狄旭
- 关键词：鲑鱼降钙素降钙素基因可溶性
- 重组生产甲状旁腺激素衍生物的方法及所用表达载体
- 本发明涉及一种高效重组生产甲状旁腺激素衍生物的方法及所用表达载体。更具体地，本发明涉及通过将人甲状旁腺激素(PTH)(1－34)与缩短型配体蛋白的融合基因进行表达而高效生产人PTH(1－34)的方法及所得产物，本发明还涉...
- 陈松森狄旭刘长征张艳丽邓艳春
- 文献传递
- 人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响被引量：4
- 1998年
- 用凝胶迁移率改变实验 (EMSA)研究了人δ珠蛋白基因启动子区 - 6 4C→T点突变对DNA结合蛋白的影响 .人工合成两条 36bp该基因启动子区 - 83～ - 4 8bp之间的片段WOG和MOG ,WOG含有野生型“CAAT样盒”(CCAAC) ,MOG含有变异型“CAAT样盒”(CCAAT ,- 6 4C→T) .结果表明 :(1)在红系细胞MEL ,k56 2以及经Hemin诱导的k56 2细胞中 ,MOG对CCAAT结合蛋白 (CFB)和GATA 1的亲和力显著增加 ;(2 )经Hemin诱导的k56 2细胞中除上述两种因子外 ,还存在两种新的特异DNA结合蛋白C和D ,前者与WOG和MOG结合 ,可能与k56 2细胞受诱导后基因表达提高有关 ;后者只与MOG结合 ,可能与 - 6 4C→T的点突变有关 ;(3)人胚胎发育不同阶段胎肝细胞核抽提物EMSA结果提示人胚胎发育不同阶段δ基因表达被抑制的机制可能不同 .结果证明δ基因启动子缺陷的CAAT样盒是引起δ基因低水平表达的重要因素 ,缺陷的顺式作用元件CAAT样盒通过影响反式因子CBF及GATA
- 寇海萍陈松森陈卫东张劲秋狄旭梁植权
- 关键词：启动子结合蛋白DNAEMSA
- 人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性被引量：4
- 2005年
- 为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .
- 狄旭刘长征陈松森张艳丽邓艳春孙兰杨京
- 关键词：纯化生物学活性
- 人δ珠蛋白基因启动子区CAAT盒C→T突变对其转录的影响被引量：4
- 2002年
- 目的研究人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对其转录调控的影响。方法将人δ基因启动子区-64位C突变为T后,克隆于去除强启动子CMV的真核基因表达载体pcDNA3.1穴-雪/Myc-HisA中,分别将含野生型CAAT盒和突变型CAAT盒的人δ基因转染鼠红白血病(MEL)细胞,经DMSO诱导细胞分化,利用半定量RT-PCR技术检测人δ基因转录的变化。结果δ基因启动子区CAAT盒C→T点突变后,含突变型CAAT盒的人δ基因的转录水平是含野生型CAAT盒的2.2倍。结论在mRNA水平直接证实δ基因启动子区CAAT盒的缺陷是影响其转录的重要原因。
- 姚杰陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿
- 关键词：转录调节
- 人干细胞因子cDNA克隆及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：4
- 1997年
- 以超速离心法提取的HepG2细胞总RNA为模板，应用RT-PCR技术扩增得到编码人干细胞因子（SCF）全长CDNA（约0.8kb）。克隆、序列分析确证编码人SCF膜外活性区的CDNA（约0.5kb）结构正确，构建了含有该基因的表达质粒（PBV-mhSCF）并在大肠杆菌中获得高效表达。
- 陈卫东狄旭李江宋飞陈松森梁植权
- 关键词：人干细胞因子CDNA聚合酶链反应基因重组
- 重组人SCF-GM-CSF融合蛋白的克隆、表达及生物学活性研究
- 造血细胞因子单独地或协同的刺激和调节造血过程各个阶段细胞的生存、增殖、分化和成熟。大量研究结果表明,两种或多种细胞因子联合应用对加速多种造血细胞生长有明显作用。细胞因子之间的协同性使人们有可能创造出具有更高生物学活性的新...
- 毛华陈松森狄旭贾佩臣梁植权
- 文献传递
- 重组鲑鱼降钙素前体多肽的制备及其性质研究被引量：5
- 2000年
- 硫氧还原蛋白的第 38位 Met突变为 Ala的 Trx- s CT- Gly基因在 E.coli BL2 1 ( DE3)中得到高效表达 .用 Thio Bind亲和树脂纯化表达的融合蛋白 .结果说明 38位的 Met突变为 Ala不影响融合蛋白与树脂的特异性结合 ,融合蛋白的纯度达 90 %以上 .在含有 3mol/L尿素的 70 %甲酸中 ,室温 48h,至少 80 %融合蛋白被溴化氰裂解开 .采用 CM-纤维素吸附 ,用稀盐酸解吸附 ,得到纯度为92 %的降钙素前体多肽 s CT- Gly.氨基酸的序列分析结构表明 ,重组 s CT- Gly的 N端 1 0个氨基酸与预期一致 .在强酸性条件下 ,没有发生氨基酸的脱酰胺反应 ,氨基酸组成分析与预期基本一致 .质谱法测定的分子量为 3492 ,毛细管电泳测定的等电点 p I为 6.46,大鼠降钙素比活性为 1 90 IU/mg左右 ,与天然的人降钙素相当 .
- 刘深基陈松森狄旭熊安琪张友鸿
- 关键词：基因工程药物
- 一种新型人源化鲑鱼降钙素突变体的构建与表达
- 降钙素(Calcitonin,CT)是调节钙磷代谢的主要激素之一。不同种属的天然CT都是由32个氨基酸组成的多肽。天然CT中,鲑鱼降钙素(sCT)、鳗鱼降钙素(eCT)和鸡降钙素(cCT)的活性最强,而人降钙素(hCT)...
- 刘深基陈松森狄旭熊安琪张友鸿
- 文献传递
- 人干细胞因子在大肠杆菌中的表达研究
- 1998年
- 目的 经过改造重组人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF),提高其表达量。方法 应用人工合成寡核苷酸引物及PCR技术,改变人干细胞因子hSCF cDNA起始密码子ATG与SD序列之间的距离及在翻译起始区(即N端氨基酸)部分采用大肠杆菌(E.coli)喜用型密码子的策略,使重组表达质粒pBV220-hSCF在E.coli中获得高效稳定表达。结果 DNA序列测定证明基因的阅读框架完全正确。重组人干细胞因子的表达量从改造前占E.coli总蛋白的12%提高到40%左右。纯化的重组hSCF N端17个氨基酸测序结果表明,除第一个氨基酸为甲硫氨酸外,其余与天然hSCF序列完全一致。纯化的重组hSCF经Western blot证明,与标准hSCF一致。结论 提示hSCF cDNA的5′侧翼区结构对其基因表达有显著的影响。
- 毛华赵峻张劲秋狄旭陈卫东陈松森梁植权
- 关键词：SD序列干细胞因子
