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王一新: 作品数：28 被引量：49H指数：4; 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项山东省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生化学工程更多>>

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鸡源SAMHD1蛋白多克隆抗体的制备与鉴定: 2024年; 为制备鸡源宿主限制因子SAMHD1(chSAMHD1)的多克隆抗体,本试验根据chSAMHD1基因序列设计引物,扩增部分chSAMHD1片段,构建p ET-chSAMHD1原核表达质粒,并将其转化至BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导和镍柱亲和层析纯化获得重组chSAMHD1蛋白。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗chSAMHD1多克隆抗体,通过Westernblot和IFA测定多克隆抗体的反应性。结果显示,chSAMHD1重组蛋白的相对分子质量约为75.0 k Da,与预期大小一致;重组蛋白以包涵体形式表达;所制备的chSAMHD1多克隆抗体效价达到1:512000;IFA结果证实,本试验所制备多克隆抗体能够特异性识别DF-1细胞中过表达的chSAMHD1蛋白。以上结果表明,该研究成功制备了chSAMHD1蛋白多克隆抗体,从而为鸡源SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础。; 王一新张真研曹凤阳李阳徐瑞雪谢之景崔言顺李建亮; 关键词：多克隆抗体

猪流行性腹泻病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1: 2022年; 为快速、准确、灵敏检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),以PEDV N基因为靶标设计引物,建立了一种PEDV SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。该方法最低可以检测到10个拷贝的病毒核酸,与猪传染性胃肠炎病毒、猪δ冠状病毒和猪轮状病毒等胃肠道病毒均无交叉反应,批内、批间重复试验的变异系数均在2%以内,表明该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。运用该方法对2018—2019年采集自山东省不同地区猪场的161份临床样品进行检测,检测结果与RT-PCR方法完全一致。以上结果说明,本试验所建立的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测方法为PEDV的快速检测提供了良好工具和技术支持。; 陈浩鞠永政王文文尹明荣李阳王一新; 关键词：猪流行性腹泻病毒染料法荧光定量RT-PCR

病毒REV与ALV-J经鸡胚垂直传播共感染对雏鸡的协同致病性: 2023年; 【目的】J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)和禽网状内皮组织增殖病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)均可通过鸡胚垂直传播,且两者在鸡胚中的自然共感染已有报道,但两者经鸡胚共感染的致病性未有研究。建立ALV-J与REV垂直传播共感染的实验动物模型,研究ALV-J与REV垂直传播共感染的致病作用及其对禽白血病净化检测的影响,以期为推动多病原协同净化提供参考。【方法】通过鸡胚接种方式构建分别携带ALV-J、REV及两者共感染的雏鸡感染模型,通过孵化率、死亡率、体重、胎粪ALV-p27抗原检出率、病毒血症阳性率等指标分析REV与ALV-J在垂直传播中共感染的致病性。【结果】ALV-J+REV共感染组鸡胚孵化率为65.71%,低于单感染组和空白组(CK);共感染组死亡率高于单感染组和CK。7日龄时CK、ALV-J组、REV组、ALV-J+REV组雏鸡平均体重分别为59.25、50.83、49.67、43.78 g,共感染加重了对雏鸡生长的抑制。ALV血浆病毒分离结果显示,ALV-J组、ALV-J+REV组阳性率在各日龄均为100%,CK均为0%。采集肛拭子检测ALV-p27抗原结果显示,ALV-J+REV组雏鸡阳性率在1、3、7、14日龄分别为91.30%、94.12%、90.90%和100%,肛拭子的ALV-J p27阳性检出率低于血浆病毒分离。比较免疫器官发育指数结果显示,ALV-J和REV单感染均导致雏鸡免疫器官萎缩,共感染加重免疫器官萎缩程度。免疫器官病毒载量显示,REV与ALV-J共感染促进了ALV-J在免疫器官中的增殖,同时ALV-J也促进了REV在免疫器官中的增殖。【结论】相对于ALV-J和REV单感染,两者共感染降低了鸡胚孵化率、增加了雏鸡死亡率、增强了对雏鸡生长的抑制作用,对诱导胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官萎缩的影响更加显著,且两者在共感染过程中对彼此复制均有促进作用。; 马凌遥王一新赵鹏常爽蔡曼珊; 关键词：共感染

CIAV和REV荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用: 为了快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中CIAV和REV的污染,根据CIAV和REV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针,通过优化反应条件分别建立了快速检测CIAV、REV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,建立C...; 任志浩栾怀彪房立春王一新李阳吕艳艳崔治中常爽赵鹏; 关键词：鸡传染性贫血病毒禽网状内皮组织增生病病毒弱毒疫苗污染

禽网状内皮组织增生症病毒LN1201株的全基因组序列分析及其U3区的独特性被引量：2: 2016年; 为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示,LN1201株前病毒基因组全长8 438 bp,具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构。与参考株相比,LN1201与国内分离株HLJR0901和疫苗污染病毒株MD-2同源性较高,但其U3区与不同病毒株的同源性相对较低,并且在U3区出现了罕见的14 bp碱基插入,显示该病毒株可能为LTR发生重组的病毒。本研究有助于了解我国鸡群中REV的基因组特性,提示有必要继续关注REV诱发的肿瘤及其基因变异。; 王一新栾怀彪许书珍李阳常爽崔治中赵鹏; 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒全基因组

弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒低剂量污染对SPF鸡体重和疫苗免疫抗体的影响被引量：4: 2016年; 为了观察使用污染有低剂量鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)弱毒疫苗后对鸡免疫和体重的影响,本研究通过人工模拟试验观察了CIAV低剂量污染对SPF鸡体重以及对NDV疫苗抗体产生的影响。结果显示使用每羽份污染10个EID50CIAV和5个EID50CIAV两种剂量的NDV疫苗后均造成了SPF鸡体重的下降,与使用未污染疫苗组相比差异显著;并且使用污染两种剂量CIAV的疫苗后NDV抗体水平与使用无污染组相比也降低了,差异显著。使用污染两种剂量CIAV的NDV疫苗后第2周开始均检测到一定比例的CIAV抗体阳性,而通过核酸检测在使用污染疫苗后第1周就检测到很高比例的CIAV核酸阳性。研究结果不仅展示了弱毒疫苗中CIAV污染对SPF鸡生产性能和免疫机能的影响,也提示我们在通过SPF鸡检查法检测外源病毒污染时增加对病毒核酸检测有助于节省检测时间和提高检出率。; 房立春李晓晗任志浩李阳王一新崔治中常爽赵鹏; 关键词：鸡传染性贫血病毒弱毒疫苗

敲除Meq基因的重组鸡马立克氏病毒与CVI988/Rispens疫苗株免疫保护效力的比较被引量：1: 2014年; 【目的】比较敲除meq基因的马立克氏病毒(MDV)与标准疫苗株CVI988/Rispens对MDV超强毒GX0101攻毒的免疫保护作用。【方法】本实验将1日龄SPF鸡120只随机分成4组,每组30只,分别饲养在正压过滤空气的SPF动物饲养隔离罩内。1日龄时,第1组鸡以2000PFU/只的剂量颈部皮下接种SC9-1;第2组鸡以2000PFU/只的剂量颈部皮下接种CVI988/Rispens;第3、4组为不免疫攻毒对照组。免疫接种后5 d后,第1、2、3组分别以2000PFU/只的剂量腹腔接种MDV GX0101。饲养至90日龄,记录死亡情况,对死亡鸡只剖检,并取疑似马立克特有病变脏器做病理切片。期间,检测不同免疫状态下病毒GX0101的增殖动态以及禽流感、新城疫灭活苗在鸡体诱导产生抗体的水平。对含有MDV母源抗体的海蓝褐鸡的试验方案与SPF鸡一致。【结果】SC9-1株免疫对感染MDV GX0101攻击SPF鸡、海兰褐鸡均提供100%的免疫保护作用;CVI988/Rispens对SPF鸡、海兰褐鸡分别提供86.7%、93%的免疫保护作用。未免疫SPF鸡攻毒组死亡率为53.3%,肿瘤率为16.7%;未免疫海兰褐鸡攻毒组死亡率为36.7%,肿瘤率为6.67%;相比,空白对照组鸡只没有任何病变及死亡。荧光定量结果显示,淋巴细胞和羽毛囊DNA中,SC9-1免疫组鸡体内GX0101的病毒拷贝数显著低于CVI988/Rispens免疫组。血凝抑制试验结果显示,SC9-1免疫攻毒组鸡的产生的AIV、NDV抗体水平高于CVI988/Rispens免疫攻毒组。【结论】SC9-1株免疫无论在SPF鸡还是含有MDV母源抗体的海兰褐鸡均能提供比CVI988/Rispens更好的免疫保护效果。; 段伦涛苏帅王一新李思菲孙鹏陈文青崔治中; 关键词：马立克氏病毒免疫保护作用

通过公鸡血液和精液禽白血病病毒分离净化禽白血病的研究: 2021年; 在对种鸡群实施禽白血病净化过程中,检测并淘汰感染公鸡对推进净化极其重要,然而对于以血液病毒分离为准还是以精液病毒分离为准还缺乏准确的参考数据。为此,本研究对中国正在实施禽白血病净化的4个不同品系的种公鸡群同时采集血液和精液分别实施病毒分离,并对其中某蛋鸡场公鸡通过这两种方式分离的病毒进行了gp85基因扩增并分析其同源性与遗传进化关系。病毒分离结果显示,4个鸡群采用血液分离禽白血病病毒(ALV)的阳性率分别为15.51%(188/1212)、3.25%(13/400)、4%(4/100)和2.5%(5/200);采用精液分离ALV的阳性率分别为3.71%(45/1212)、2.75%(11/400)、2%(2/100)和1.5%(3/200);而两种病毒分离结果同时为阳性的公鸡分别有16只、8只、1只和2只。结果表明,血液病毒分离和精液病毒分离结果不完全一致,后者较前者ALV分离的阳性率总体要低。序列同源性分析结果显示,该蛋鸡场阳性公鸡经血液和精液两种方式分离ALV的gp85基因序列(分别为11与9条基因序列)的同源性高达99.0%-100%,所有分离株均与ALV-A亚群参考株同源性为88.6%-99.2%,而与其他各亚群参考株的同源性仅为50.0%-89.6%。遗传进化分析也表明分离株均属于A亚群,表明该蛋鸡场主要以ALV-A亚群感染为主。上述结果提示在禽白血病净化过程中,应对公鸡分别采用血液和精液两种病毒分离方法,任何一种病毒分离结果为阳性的公鸡均应被淘汰。本研究为完善现有禽白血病净化技术方案提供了数据支持,有助于加速种公鸡禽白血病的净化进程。; 张亚文崔帅赵颖洁孟凡峰李阳王一新赵鹏常爽; 关键词：禽白血病病毒公鸡精液血液

简述禽网状内皮增生组织病毒危害及其P30蛋白免疫抑制功能: 2019年; 禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis Virus,REV)是由禽网状内皮组织增生病毒(Reticuloendotheliosis,RE)引起的一类免疫抑制性疾病和肿瘤性疾病,感染对象包括鸭、火鸡、鸡和野禽,可引起免疫抑制、致命性网状细胞瘤、生长抑制综合征(短综合征)和慢性肿瘤.REV不仅可以诱导肿瘤病变,还可以引起患病鸡生长迟缓,并且与马立克氏病毒(Marek's disease virus,MDV)、禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)等多种免疫抑制性病毒发生混合感染.最为重要的是,REV感染可使感染鸡产生严重的免疫抑制,降低或消除对其他疫苗的免疫应答,极易引起其它病原体的二次感染,导致清除率和死亡率的增加,给养鸡业带来巨大的经济损失.目前,尚无有效防治措施.; 相英杰陈宇桐王一新; 关键词：免疫抑制

弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒低剂量污染对SPF鸡体重和疫苗免疫抗体的影响: 为了观察使用污染有低剂量鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)弱毒疫苗后对鸡免疫和体重的影响,本研究通过人工模拟试验观察了CIAV低剂量污染对SPF鸡体重以及对NDV...; 房立春李晓晗任志浩李阳王一新崔治中常爽赵鹏; 关键词：鸡传染性贫血病毒弱毒疫苗

王一新

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