王云
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南京医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一个新的RNF6剪切子spg2的克隆和鉴定
- 2008年
- 环指蛋白是一类含有环指基序的锌指蛋白,它们主要作为E3泛素连接酶,与E2泛素结合酶相结合,促进靶蛋白的降解.应用cDNAarray技术,通过对成人和胚胎睾丸进行基因表达谱分析,获得一在成人睾丸中高表达,胚胎睾丸中低表达的环指结构基因RNF6的不同剪切子spg2.它的全长cDNA的可读框为2055个碱基,编码685个氨基酸残基,其羧基端含有一环指结构.NCBIBLAST显示该基因定位于人13号染色体,含有5个外显子.多组织mRNA表达水平研究显示,它在成人睾丸中高表达,胚胎睾丸中低表达.本研究推测spg2可能通过它的环指结构参与人类睾丸的发育.
- 朱丽童国庆陈洁王云王赛群赵沐子李建民马建华
- 关键词：精子发生
- 新的LIM同源基因Lims E的克隆和初步分析
- 2009年
- 目的:克隆与分析大鼠不同剪切的Lims基因。方法:应用巢式RT-PCR,以大鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定。结果:测序表明克隆了一种新的Lims基因变异剪切体Lims E,编码区为1164bp,编码387个氨基酸。结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一个新的大鼠Lims基因剪切子Lims E,为进一步研究Lims基因在细胞发育中的功能打下了基础。
- 王云赵沐子付鹤玲李建民
- NYD-SP15基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2008年
- 目的:克隆NYD-SP15基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体。方法:PCR技术扩增NYD-SP15全长开放阅读框,克隆入原核表达载体PET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行SDS-PAGE电泳。将此融合蛋白Ni柱纯化后免疫BALB/C小鼠,Western blotting鉴定。结果:成功地构建了PET28a-NYD-SP15原核表达质粒,并获得了高效表达NYD-SP15的BL21菌株,表达的His标签融合蛋白,分子量为58kDa左右,经免疫小鼠获得了抗NYD-SP15抗体。经Western blotting法分析,抗体为NYD-SP15特异性抗体。结论:构建的NYD-SP15基因的原核表达载体,体外高效表达蛋白,免疫小鼠获得抗NYD-SP15抗体,将为眼部增殖性视网膜病变(PVR)的研究及治疗奠定坚实的基础。
- 王珍刘庆淮陈洁王云李建民
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 人、鼠原肠形成蛋白基因的克隆和初步分析
- 2008年
- 目的:分析原肠形成蛋白(TSG)在几个发育阶段的人和小鼠睾丸中的差异表达。方法:应用cDNA微阵列技术对成人和胚胎睾丸进行基因表达图谱分析,获得在成人高表达、胚胎低表达的人TSG的全长基因;利用RT-PCR,从4周龄小鼠睾丸中克隆出小鼠TSG基因,用地高辛标记的探针进行原位杂交,检测小鼠TSG在睾丸中的表达。结果:人TSG在成人睾丸中高表达,在胚胎中低表达;小鼠TSG仅在小鼠睾丸生殖细胞中表达,在间质细胞中不表达。结论:小鼠睾丸TSG与骨形态发生蛋白(BMP)可能同步表达,提示在小鼠精子发生中也可能存在一条由TSG信号激活BMP的传导途径。
- 高娟玉刘庆淮陈洁王云李建民
- 关键词：精子发生骨形成蛋白基因克隆
- HRB2慢病毒表达质粒的构建核蛋白细胞内定位的研究被引量：2
- 2009年
- 目的:构建重组HIV-1相关结合蛋白2(HIV-1rev binding protein2)基因的真核融合表达质粒plenti-GFP-HRB2,用慢病毒表达系统感染HEKTER细胞。对过表达GFP-HRB2基因的细胞在激光共聚焦显微镜下观察,研究HRB2蛋白在细胞中的分布规律。方法:Trizol法提取人睾丸组织总RNA进行RT-PCR,将纯化的扩增产物HRB2与克隆载体plp-GFP-C1连接、转化感受态细菌E.coliXLblue。测序正确后将质粒plp-GFP-HRB2与真核表达质粒plenti-C1分别进行双酶切,连接后转化。将构建正确的plenti-GFP-HRB2重组质粒、△8.91、pvsvg瞬时共转染293T细胞后,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。收集包装病毒后感染HEKTER细胞。细胞生长一周后,将细胞铺玻片上用激光共聚焦显微镜观察。结果:构建的plenti-GFP-HRB2真核表达质粒经PCR鉴定及测序均说明人源HRB2基因已与plenti-GFP载体正确重组。瞬时转染293T细胞后能观察到绿色荧光。稳定感染后的HEKTER细胞经激光共聚焦显微镜观察后发现,HRB2蛋白在核仁处富集,在细胞核的其它部位少量分布,在胞浆中几乎没有分布。结论:人源HRB2基因表达的相关蛋白具有一个KH结构域,属于KH结构域家族的成员。稳定表达GFP-HRB2融合蛋白的细胞系的成功构建,为深入研究HRB2的入核机制、HRB2蛋白的在细胞分裂、RNA剪切等生物活动中的作用奠定了重要的实验基础。
- 王赛群赵沐子王云李建民王强
- 关键词：融合蛋白稳定转染亚细胞定位
