王玺
- 作品数：12 被引量：28H指数：3
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术化学工程更多>>
- 利用CRISPR/Cas9n系统构建Asxl2基因敲除的NIH3T3稳定细胞系被引量：3
- 2015年
- 目的利用CRISPR/Cas9n系统在NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞系中敲除Asxl2基因。方法设计一对靶向小鼠Asxl2基因第5个外显子的小向导RNA(sg RNA),分别克隆进p X462载体。将测序鉴定正确的重组质粒转染至NIH3T3细胞中,利用有限稀释法得到单细胞,通过培养获得单克隆细胞系。提取单克隆细胞系基因组DNA,ge-notyping PCR扩增出靶位点附近的DNA片段并测序。利用Western blot方法检测细胞株中Asxl2的敲除效果。结果成功构建靶向Asxl2的CRISPR/Cas9n重组质粒。将2个重组质粒共转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选后得到亚克隆细胞系,并且经genotyping PCR测序验证得到一株正确的单克隆细胞系。Western blot证实敲除Asxl2后,该NIH3T3细胞系中Asxl2蛋白表达缺失。结论通过这个系统得到了靶向Asxl2的CRISPR/Cas9n重组质粒及稳定敲除Asxl2的NIH3T3细胞系。
- 方佳萍赵秀娟齐艳王玺吴旭东娄建石
- 关键词：表观遗传
- EZH2基因RNAi慢病毒载体的包装及鉴定
- 2014年
- 目的 外周T细胞淋巴瘤（PTCL）源于成熟的胸腺后淋巴细胞,是一类少见的生物学行为及临床表现均高度异质性的疾病,且预后差.包装zeste基因增强子同源物2（EZH2）RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,可为今后相关实验研究奠定基础.方法 靶向EZH2基因的短发夹RNA（EZH2-shRNA）质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,进行慢病毒包装.病毒载体感染Hut78细胞后,观察感染效率,并用反转录定量PCR（RT-qPCR）和Western Blot检测EZH2mRNA和蛋白表达水平.结果 成功包装了慢病毒表达载体,对Hut78细胞的感染效率在95％以上.RT-qPCR和Western Blot检测结果显示,EZH2基因在靶细胞中的表达水平降低.结论 成功包装并鉴定了EZH2基因RNAi慢病毒表达载体.
- 陈青青杨冰赵秀娟马芹刘超梁绍平闵琦吴少华孟歆怿王玺王华庆张会来
- 关键词：外周T细胞淋巴瘤慢病毒载体RNA干扰
- 肿瘤发生的表观遗传学:进展与临床意义被引量：13
- 2012年
- 表观遗传（epigenetics）指所有不通过DNA序列改变就能影响基因表达（从而决定细胞乃至个体表型）的、可遗传的（即可伴随细胞分裂传递下去）调控方式,包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、miRNA、朊病毒等。表观遗传调控在干细胞自我更新、定向分化、器官发育等生命过程中起着至关重要的作用：
- 王先火赵秀娟邱立华王华庆王玺
- 关键词：表观遗传肿瘤DNA甲基化组蛋白修饰
- 应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因被引量：1
- 2016年
- 目的运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR(RT-q PCR)及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达,针对p21基因作用的功能域,设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA(sg RNA),克隆入lenti CRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白,利用RT-q PCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lenti CRISPRv2-sg RNA重组慢病毒质粒。与对照组相比,筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞,应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株,为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。
- 赵秀娟陈万标张沛涛张娜楚晓文白向阳杨冰吴旭东王玺
- 关键词：横纹肌瘤P21基因敲除慢病毒
- miR-17~92持续性激活关键癌基因信号传导通路调节侵袭性恶性淋巴瘤的生物学功能研究
- 目的：miR-17～92参与了B细胞淋巴瘤的发生与发展,可通过作用于多个靶基因或多条信号传导通路调节细胞增殖、转化、周期与凋亡.NF-kB信号传导通路是ABC亚型弥漫大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)中关键癌基因信号传...
- 王先火王华庆王玺孔令喆傅凯张会来
- 组蛋白H3K4甲基转移酶KMT2D研究进展被引量：6
- 2018年
- 组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D(KMT2D),属于哺乳动物H3K4甲基转移酶家族成员,在成人组织中广泛表达,对于早期胚胎发育有重要作用。C-末端的SET区域负责组蛋白H3K4甲基化,维持KMT2D蛋白的稳定性。KMT2D与WRAD、NCOA6、PTIP、PA1和H3K27去甲基化酶UTX组成复合物,在其中起到支架蛋白的作用,维持UTX的稳定性。KMT2D主要催化哺乳动物H3K4单甲基化,与转录因子共同作用于增强子区域,从而调控基因表达。KMT2D在调节细胞发育、分化、新陈代谢和肿瘤抑制方面具有重要作用,其突变导致多种疾病发生。进一步研究KMT2D有助于揭示其异常所引发多种疾病的病因,并且对开发临床药物提供有力的帮助。
- 阎晗于明航尹洁王玺
- 关键词：增强子表观遗传调控
- 人脐带血造血干细胞体外分化为NK细胞的效率及功能检测被引量：3
- 2015年
- 目的检测人脐带血造血干细胞(HSCs)体外分化为自然杀伤(NK)细胞的效率及功能。方法从人脐带血中分离CD34+HSCs,接种于含20μg/L FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)、干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素(IL)-7、IL-15及IL-21的SCGM培养基中,定向诱导CD34+HSCs分化为NK细胞。观察细胞生长状态,在分化的第7、14、21及28天,采用流式细胞术检测各阶段CD56、NKG2D、NKp46、CD3、CD19及CD34等细胞免疫表型的表达变化;分化的第21、28天,以分化得到细胞为效应细胞,K562细胞作为靶细胞,设置8∶1、4∶1、2∶1和1∶1 4组效靶细胞比,分别采用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法和7AAD/CFSE标记法,检测分化得到的细胞杀伤功能。结果脐带血来源的CD34+HSCs在体外适宜的条件下可大量增殖;整个分化进程的不同阶段中,CD3和CD19表达量差异无统计学意义,CD56、NKG2D及NKp46的表达量逐渐增加,最高达(72.57±1.60)%、(32.83±1.29)%和(29.53±2.40)%,CD34的表达量逐渐降低,最低为(12.13±2.01)%。LDH毒性检测法和7AAD/CFSE标记法测得最大杀伤效率可达(49.91±2.76)%和(40.87±1.12)%,8∶1、4∶1、2∶1和1∶1组NK细胞杀伤能力均依次降低(P<0.05),诱导分化28 d的NK细胞杀伤能力与21 d差异无统计学意义。结论人脐带血HSCs在体外适宜的培养条件下,可定向分化为NK细胞,诱导分化得到的NK细胞具有杀伤功能。
- 罗琦尹洁李杨黄珊王玺何景华
- 关键词：造血干细胞免疫表型分型免疫CD34^+HSCS体外分化
- 基础医学模式生物酿酒酵母接合型的鉴定——PCR法
- 2016年
- 目的:利用PCR法鉴定酿酒酵母a、α单倍体或a/α双倍体三种接合型。方法:根据酿酒酵母a、α或a/α三种接合型MAT基因座及附近序列信息,分别设计特异的寡核苷酸引物。提取酿酒酵母DNA作为模版和利用单菌落PCR法,进行特异性PCR扩增。结果:MATa基因座特异性引物能在a和a/α接合型中扩增出特异性条带;MATα基因座特异性引物则能在α和a/α接合型中扩增出特异性条带。结论:利用PCR鉴定酿酒酵母接合型是一种操作简单、准确灵敏的方法,为基础医学单细胞真核模式生物的研究提供方便。
- 刘超韩雅婷杨冰孙琰王玺
- 关键词：酿酒酵母PCR鉴定
- ERT2-Cre诱导的Rosa26R-YFP报告基因系统标记小鼠造血干祖细胞的条件和效率检测
- 2014年
- 目的 探索ERT2-Cre诱导的黄色荧光蛋白（YFP）报告基因系统标记小鼠造血干祖细胞的条件和效率.方法 通过基因型分型的方法,从Rosa26R-YFP小鼠与ERT2-Cre小鼠杂交得到的后代中,筛选出YFP及ERT2-Cre双阳性转基因杂交小鼠;采用免疫磁珠法从双阳性转基因小鼠骨髓细胞中富集c-kit＋造血干祖细胞群进行体外培养,并用不同浓度4-羟基它莫西芬（OHT）作用不同时间以诱导YFP表达;流式细胞术检测c-kit＋造血干祖细胞中YFP的表达量.结果 Rosa26R-YFP小鼠与ERT2-Cre小鼠的杂交后代共9只,采用基因型分型方法筛选出双阳性转基因小鼠5只;体外培养的c-kit＋细胞部分形态发生变化,提示存在细胞分化;流式细胞术检测到c-kit＋细胞中YFP表达量可达13.7％.结论 YFP报告基因系统在OHT诱导的ERT2-Cre作用下,能有效标记小鼠造血干祖细胞.
- 罗琦尹洁孟歆怿杨冰雷蕾孙琰李丹丹王瑾王玺何景华
- 关键词：造血系统造血干祖细胞
- Epigenetics in lymphoma: exploring novel diagnosis biomarkers and therapeutic approaches
- There has been growing appreciation of the essential role of epigenetic alterations in cancer formation.Howeve...
- 王玺
