王斌
- 作品数：35 被引量：82H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项上海市基础研究重大（重点）项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 通用型猪流感疫苗基础研究
- 引言/目的猪是流感病毒重要的中间宿主和流感病毒的基因"混合器"。对于猪流感的防控不但具有兽医学意义,更具有重要的公共卫生学意义。现行商品化的以某一特定毒株表面蛋白作为主要免疫原所制备的疫苗常因流行毒株的"抗原漂移"或"抗...
- 王斌于海杨馥如黄梦马继红亓文宝周艳君廖明童光志
- 疱疹病毒与内质网应激被引量：4
- 2021年
- 内质网是分泌型蛋白和膜蛋白折叠及翻译后修饰的主要场所。病毒感染所引起的宿主细胞内环境的改变可使细胞或病毒的未折叠和/或错误折叠蛋白在内质网中大量聚集,使内质网处于生理功能紊乱的应激状态。为了缓解这种应激压力,细胞会启动未折叠蛋白反应(UPR),并通过一系列分子的信号转导维持内质网稳态;同时病毒也会通过对UPR的精密调控营造有利于其复制与增殖的细胞内环境。疱疹病毒是一类有囊膜的DNA病毒,在病毒复制过程中,其表面大量的糖基化囊膜蛋白的合成及成熟依赖于内质网,并由此诱发内质网应激。现将对疱疹病毒感染与内质网应激的最新研究进展做一总结归纳。
- 刘宇婷李国新王斌
- 关键词：内质网应激未折叠蛋白反应疱疹病毒
- H1亚型猪流感病毒HA基因密码子优化的DNA疫苗免疫保护效力研究
- 引言H1亚型猪流感(swine influenza,SI)是由隶属于正粘病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)引起的猪呼吸道疾病,是目前危害全世界养猪业的重要呼吸道疾病之一...
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红周艳君童光志
- 文献传递
- H1亚型猪流感病毒HA基因密码子优化的DNA疫苗免疫保护效力研究被引量：2
- 2011年
- DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。为了提高猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）HA基因DNA疫苗的表达量，增强其免疫效果，本研究通过人工合成的方法将H1亚型猪流感病毒A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）的HA基因密码子优化为猪体内偏嗜性密码子optiHA，同野生型A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）的HA基因分别与真核表达载体PCAGGS连接构成重组质粒PCAGGS—optiHA和PCAGGS—HA，然后分别转染293T细胞，48h后采用间接免疫荧光的方法检测Ⅲ基因的瞬时表达蛋白情况。将质粒PCAGGS—HA、PCAGGS—optiHA以100μg／只的剂量，采用后腿肌肉多点注射的方式，免疫6-8周龄雌性BALB／c小鼠，同时设立空载体PCAGGS对照。共免疫3次，每次间隔2周，三免2周后对每组以10^3.87 EID50的A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）进行攻毒。采用ELISA、血凝抑制试验、细胞因子检测和肺组织病毒含量测定等实验评价这两种DNA疫苗的免疫效果。结果表明，HA基因密码子优化的DNA疫苗可显著提高体液免疫和细胞免疫的应答水平，攻毒后免疫组PCAGGS—optiHA的保护效力明显高于免疫组PCAGGS—HA。这一结果为进一步研究和设计有效的SIVDNA疫苗奠定了基础。
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红周艳君童光志
- 关键词：猪流感病毒HA基因密码子优化
- 中国大陆猪流感病毒流行特征及未来值得关注的几个问题被引量：3
- 2012年
- 控制猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行具有重要的兽医学和公共卫生学意义。中国被认为是国际流感病毒的流行中心,对流感病毒的流行生态有着重要影响。本文将对中国大陆SIV流行特征做一归纳,并简要分析未来值得关注的几个问题。
- 王斌童光志
- 关键词：猪流感病毒
- 通用型猪流感疫苗基础研究
- 目的：研制具有广谱交叉保护能力的通用型猪流感疫苗。方法：将H3亚型SIV HA共有序列进行优化并选取M2e和NP147-155，三者构建DNA疫苗，基因枪免疫小鼠。结果：其中一组只含有HA及M2e的DNA疫苗只能保护动物...
- 王斌于海杨馥如黄梦马继红亓文宝周艳君廖明童光志
- 关键词：免疫保护流感病毒免疫应答
- 宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究被引量：1
- 2016年
- ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p Cas9-EGFP共转染至人肺腺癌细胞A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单细胞克隆株,通过靶基因组测序及western blot检测,筛选获得了erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。此外,将H1N1亚型流感病毒分别感染野生型和erp57基因敲除细胞系以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果显示流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了相关的实验依据。
- 胡丹王斌冷有龙王玉杰于群郑永辉范春玲
- 关键词：基因敲除流感病毒
- 肠炎沙门菌鞭毛蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2016年
- 利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)-fliC。将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导表达9h。表达的重组蛋白通过镍离子亲和层析和分子筛的方法进行纯化,获得的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析。对纯化的重组蛋白进行定量和内毒素测定后,用其免疫SPF鸡,制备超免疫血清。纯化的FliC蛋白与其受体之间的相互作用通过流式细胞仪进行分析。结果显示,成功扩增到了长度为1518bp的全长fliC基因,该基因编码的蛋白在30℃下以可溶性形式表达,经过镍离子亲和层析与分子筛的方法获得的FliC蛋白的纯度高,其内毒素的含量低于0.5EU/mL,并能够结合该蛋白在细胞上的受体。用纯化的重组蛋白免疫鸡获得的阳性血清的效价为1∶12 800。上述结果为进一步研究FliC蛋白的免疫学功能奠定了基础。
- 史冰田王高玲郭杰司微李涛王斌刘恒贵
- 关键词：肠炎沙门菌鞭毛蛋白原核表达阳性血清
- 抗乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：6
- 2009年
- 本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2株非结构蛋白NS1作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,共获得4株特异性针对JEV NS1的杂交瘤细胞,分别命名为1H6、2C3、3A7、4C8,经测定1H6单抗亚类属于IgG2b,其他3株为IgG1,轻链均为κ链。4株杂交瘤细胞诱生小鼠腹水效价分别达1∶20480、1∶2560、1∶20480、1∶10240,western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体均可与JEV NS1蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验表明1H6、3A7、4C83株单抗能够识别天然的JEV NS1蛋白。本研究为进一步探究JEV NS1蛋白结构及其功能奠定了基础。
- 王斌华荣虹赵付荣刘天强于海杜鹃童光志
- 关键词：乙型脑炎病毒非结构蛋白单克隆抗体
- H1亚型猪流感病毒HA基因密码子优化的DNA疫苗免疫保护效力研究
- 目的：采取对免疫原基因进行密码子优化来提高DNA疫苗的免疫原性。方法：免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠，对小鼠进行免疫，共三次，每次间隔 2w，三免二周后以103.87E1D50的A/Swine/Guangdong/1...
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红周艳君童光志
- 关键词：免疫效力
