杨松华
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 供职机构：郑州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部“211”工程河南省杰出人才创新基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 同时沉默Livin基因和MTA1基因的siRNA载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建同时沉默Livin基因和MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)载体。方法:设计Livin和MTA1的siRNA靶序列,合成它们互补的寡核苷酸链,分别退火后重组入pRNAT-U6.2载体,得到pRNAT-U6.2-Livin和pR-NAT-U6.2-MTA1。AccⅡ和XhoⅠ酶切pRNAT-U6.2-MTA1,回收475bp的MTA1siRNA单元,然后与XhoⅠ和PmeⅠ酶切线形化的pRNAT-U6.2-Livin重组,得到pRNAT-U6.2-Livin-MTA1,后者用脂质体包被转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR法分别检测转染细胞Livin和MTA1基因mRNA的表达情况。结果:针对Livin基因和MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段分别克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析插入片段正确。PCR扩增证实MTA1siRNA单元重组入pRNAT-U6.2-Livin。RT-PCR检测显示,转染pRNAT-U6.2-Livin-MTA1的EC9706细胞Livin基因和MTA1基因mRNA表达水平皆明显降低。结论:同时沉默Livin基因和MTA1基因表达的siRNA载体构建成功。
- 杨松华赵国强郑红李月白赵继敏冯龙董子明
- 关键词：LIVINMTA1
- 脑肽精对阿尔茨海默病大鼠脑中NO、NOS和AChE的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 :观察脑肽精 (BPC)对阿尔茨海默病 (AD)大鼠脑中一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)和乙酰胆碱酯酶 (AChE)含量的影响。方法 :雄性SD大鼠 84只 ,随机分成 7组 ,每组 1 2只。Ⅰ～Ⅶ组分别为正常对照组 ,AD模型组 ,AD模型 +生理盐水组 ,AD模型 +脑复康 0 .3g/kg治疗组 ,AD模型 +BPC 1 5mg/kg治疗组 ,AD模型 +BPC30mg/kg治疗组及AD模型 +BPC 6 0mg/kg治疗组。向SD大鼠的海马注射 5 μg鹅膏蕈氨酸 (ibotenicacid ,IBO)建立AD模型后 ,分别用生理盐水、BPC或脑复康连续灌胃 2 0d治疗 ,1次 /d ,每次 2ml。灌胃期满后将大鼠断头处死 ,并立即在冰盘中开颅取脑做成组织匀浆。离心取上清液检测NO、NOS和AChE的含量。结果 :①与Ⅰ组比较 ,Ⅱ组大鼠脑中NO、NOS含量均明显升高 (P <0 .0 5 ) ,但AChE显著降低 (P <0 .0 5 ) ;②与Ⅱ组比较 ,Ⅲ组大鼠脑中的NO、NOS、AChE均无明显改变 (P >0 .0 5 ) ;③与Ⅱ组比较 ,脑复康组及BPC各浓度组大鼠脑中NO、NOS的含量均显著降低 (P <0 .0 5 ) ,AChE无明显改变 (P >0 .0 5 ) ;④BPC各浓度组NO、NOS间差异均有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,AChE无明显改变 (P >0 .0 5 )。结论 :BPC能够显著降低AD模型大鼠脑中NO。
- 王志超孟庆瑞安玉会张维娟张善锋杨松华毛红丽马红霞
- 关键词：阿尔茨海默病一氧化氮一氧化氮合酶乙酰胆碱酯酶
- RNAi干扰食管癌EC9706细胞MTA1基因表达对侵袭和迁移的影响被引量：5
- 2008年
- 目的采用RNAi抑制食管癌EC9706细胞株MTA1基因的表达,观察对食管癌细胞侵袭和迁移的影响。方法用脂质体包裹转染沉默MTA1表达的siRNA表达载体入食管癌细胞EC9706。定量RT-PCR和免疫印迹分别检测MTA1 mRNA和蛋白表达情况;划痕损伤实验和细胞体外侵袭实验分别测定迁移和侵袭的影响。结果定量RT-PCR检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低;转染沉默MTA1的siRNA表达载体组的食管癌细胞划痕未愈合,穿透Matrigel的细胞数量明显减少,与未转染组、转染空载体组和转染无关序列siRNA载体组比较差异有显著性(P<0·05)。结论RNA干扰介导的MTA1基因表达沉寂可有效降低食管癌细胞侵袭和迁移;MTA1基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点。
- 杨松华赵国强郑红赵继敏董子明
- 关键词：MTA1RNA干扰迁移
- 针对MTA1基因siRNA载体构建和沉默效应
- 2008年
- 目的构建针对人MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对食管癌细胞MTA1基因表达的抑制作用。方法设计MTA1的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测MTA1基因mRNA和蛋白表达的变化。结果把针对MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR和Westernblotting检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低,其中以481-499(GACCCTGCTGGCAGATAAA)为靶序列的siRNA沉默作用最强,MTA1蛋白几乎完全不表达。结论成功构建出沉默食管癌细胞MTA1基因表达的siRNA载体,为通过沉默MTA1基因的表达来减少恶性肿瘤侵袭转移提供了实验基础。
- 杨松华赵国强董子明
- 关键词：RNA干扰MTA1食管癌
- 针对人免疫缺陷病毒1型辅助受体CCR5 RNA干扰表达载体的构建
- 2008年
- 目的:抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的辅助受体CCR5表达,阻止HIV-1进入靶细胞。方法:设计CCR5靶向的发夹状siRNA,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹pRNAT-U6.2-siCCR5后转染U937细胞,采用RT-PCR和流式细胞术分别检测CCR5基因mRNA和蛋白表达的变化。结果:重组子pRNAT-U6.2-siCCR5,经过测序鉴定与设计一致。RT-PCR检测显示,转染pRNAT-U6.2-siCCR5细胞的CCR5基因表达水平显著降低于未转染对照组和转染空载体细胞(P<0.05)。未转染对照组U937细胞表面CCR5的表达率为(83.10±6.52)%,转染空载体组为(81.44±4.97)%,转染pRNAT-U6.2-siCCR5组为(1.94±0.06)%,3组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建出沉默细胞CCR5基因表达的siRNA载体。
- 靳静赵国新杨松华冯龙马云云卫艳萍赵国强
- 关键词：CCR5RNA干扰人免疫缺陷病毒1型辅助受体
- 复方戒毒肽对吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶表达水平的影响
- 2006年
- 目的:观察复方戒毒肽对吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶水平的影响。方法:实验于2003-03/2004-05在郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室动物室和郑州大学志愿戒毒研究中心第一实验室完成。复方戒毒肽由脑肽配制而成熏主要含有酸性肽,牛神经肽FF等小分子神经肽。80只健康的昆明种小鼠,雌雄各半,8～10周龄,体质量(20±2)g。抽签随机分为8组,每组10只。正常对照组:不做任何处理。成瘾模型建立:腹腔注射吗啡,1次/d熏100mg/kg,共11d。成瘾模型组:成瘾模型建立后,不做任何处理。生理盐水组:成瘾模型建立后,用生理盐水1mL/次灌胃治疗15d。自然戒断组:成瘾模型建立后,正常喂养15d,期间不做任何处理;高、中、低剂量的复方戒毒肽治疗组:成瘾模型建立后,给成瘾小鼠按80mg/kg,40mg/kg,20mg/kg的复方戒毒肽进行灌胃治疗,神经肽溶液的实际用量为1mL熏0.5mL熏0.25mL,时间为15d。单独使用复方戒毒肽组:仅给正常小鼠按80mg/kg剂量的复方戒毒肽灌胃15d。实验结束后取材,通过免疫组化和Biosens数字成像系统分析仪测定海马内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶水平。结果:80只小鼠均进入结果分析。各组N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶的水平的比较:与正常对照组相比,成瘾模型组两者水平均增高(134.93±6.83,117.24±3.91;116.26±8.64,96.81±6.16,P<0.05);与成瘾模型组、自然戒断组、生理盐水组、40mg/kg和20mg/kg复方戒毒肽组相比,80mg/kg复方戒毒肽组两者水平均明显降低(134.93±6.83,117.24±3.91;133.10±8.97,115.82±5.61;134.92±8.51,116.55±5.10;120.02±7.49,106.03±8.99;120.02±7.49,106.03±8.99;128.59±9.26,112.59±2.93;130.50±2.50,113.22±5.14,P<0.05)。结论:80mg/kg的复方戒毒肽能够降低吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶的水平。
- 安玉会杨松华马红霞毛红丽郭茂锋李萍
- 复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响(英文)被引量：1
- 2004年
- 目的:探讨复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响。方法:30例自愿戒毒者被分成3组,分别是复方戒毒肽组、激光组、复方戒毒肽加激光组,每组10例。治疗前和治疗10d后分别抽血。血中乳酸,乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)和Na+-K+-ATP酶的含量用生化方法分析。结果:复方戒毒肽加激光组血清中乳酸的浓度治疗前后分别是(2.75±0.28),(3.04±0.36)mmol/g,差异有显著性意义(t=0.041,P<0.05)。3组血清中LDH的浓度治疗前分别是(1290.00±384.27),(1410.00±443.35),(980.00±285.97)U/L;治疗后分别为(2546.67±563.76),(1960.00±514.67),(1640.00±474.15)U/L,治疗前后比较,差异有显著性意义(t=0.001,0.038,0.004,P<0.01～0.05)。3组全血中Na+-K+-ATP酶的浓度治疗后与治疗前比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:复方戒毒肽和激光治疗后均能增加志愿戒毒者血中LDH的含量。
- 安玉会郭茂峰孟庆瑞王志超章萍毛红丽张善锋杨松华
- 关键词：激光自愿戒毒者能量代谢血清
- 酸性肽对吗啡成瘾小鼠脑中NMDAR1、NOS、ChAT和行为学的影响
- 背景和目的 阿片类药物是临床上广泛应用的镇痛药。但是,阿片类物质极易产生耐药性,为了维持原有的药效,必须反复用药并不断加大剂量而导致对药物依赖性。近年来,外源性阿片类药物滥用已经成为日益严重的社会问题,禁毒和戒毒成为全球...
- 杨松华
- 关键词：成瘾戒断症状N-甲基-D-天冬氨酸胆碱乙酰化酶
- 文献传递
- 利多卡因对大鼠缺血脑损伤后海马CA1区神经元凋亡及细胞色素C释放的影响
- 2006年
- 目的:观察利多卡因对大鼠缺血脑损伤后海马CA1区神经元凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠,随机分成假手术组、模型组(制作缺血脑损伤模型)、利多卡因治疗组,每组10只。手术后24h分离右侧海马组织。TUNEL法检测3组大鼠海马CA1区细胞凋亡,免疫组化染色测定细胞色素C(CytC)蛋白和Bax蛋白的表达。结果:①与对照组相比模型组凋亡细胞数明显增加,与模型组相比治疗组凋亡细胞数明显降低(P均<0.001)。②与对照组相比,模型组CytC阳性细胞数明显减少,Bax蛋白阳性细胞数明显增多(P<0.001);与模型组相比,治疗组CytC阳性细胞数明显增加,Bax蛋白阳性细胞数明显下降(P<0.001)。结论:利多卡因可减少脑缺血后海马CA1区神经元CytC的释放并降低Bax蛋白的表达,对海马CA1区神经元有保护作用。
- 高立新王志举李怀洲杨松华王明臣
- 关键词：利多卡因脑缺血损伤凋亡
- 猪骨蛋白的氨基酸含量分析被引量：7
- 2004年
- 目的:分析探讨猪骨蛋白的氨基酸的组成与含量。方法:猪骨蛋白经6N的盐酸水解,随后用日立850-Ⅱ型自动氨基酸分析仪分析。结果:猪骨蛋白中17种天然氨基酸的含量(W／W)为:Asp 4.75,Thr 1.49,Ser 2.10,Glu 8.61,Gly 17.65,Ala 7.34,Cys 0.28,Val 2.21,Met 0.57,Ile 1.06,Leu 2.69,Tyr 0.61,Phe 1.86,Lys3.00,His 0.64,Arg 6.27,Pro 11.58。结论:猪骨蛋白中含有多种氨基酸,其中Gly、Pro、Glu、Ala、Arg、Asp等6种氨基酸是猪骨蛋白中存在的主要氨基酸。
- 安玉会杨松华晋佳路赵荷健蔡尚党
- 关键词：猪骨ET0天然氨基酸骨蛋白酸水解
