顾伟齐
- 作品数：24 被引量：68H指数：5
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人白介素-2痘苗病毒对MKN45胃癌细胞感染性及白介素-2蛋白表达
- 2001年
- 目的 体外研究表达人白介素 2 (hIL 2 )的重组痘苗病毒 (vacciniavirus ,VV)对MKN45胃癌细胞的作用。方法 应用分子病毒学同源重组技术构建能表达hIL 2的重组VV(VMJ6 0 1hIL 2 )。用DNA杂交技术鉴定VMJ6 0 1hIL 2 ,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测VMJ6 0 1hIL 2基因产物。用VMJ6 0 1hIL 2体外感染MKN45胃癌细胞株 ,探讨其对体外胃癌细胞的作用。结果 VMJ6 0 1hIL 2对体外MKN45胃癌细胞株有较强的感染性 ,VMJ6 0 1hIL 2感染的MKN45胃癌细胞能分泌具有生物活性的hIL 2蛋白。结论 VMJ6 0 1hIL 2的构建与鉴定 ,进一步为胃癌的免疫基因治疗打下了坚实的基础。
- 郜恒骏朱红音童菊芳顾伟齐任卫平萧树东
- 关键词：白介素-2痘苗病毒胃癌蛋白表达免疫疗法
- 表达HSV-TK痘苗病毒真核表达载体pMJ601的构建与鉴定
- 2002年
- 目的：构建含自杀基因（ＨＳＶ－ＴＫ）的痘苗病毒真核表达载体ｐＭＪ６０１，为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准 备。方法：利用目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切等多种基因工 程技术将胶纯化回收的ＨＳＶ－ＴＫ与ｐＭＪ６０１进行连接、转化及鉴定。结果：克隆在Ｘ－ｐＰＮＴ质粒上的ＨＳＶ－ＴＫ ＤＮＡ 成功地被克隆到经ＢａｍＨⅠ－ＨｉｎｄⅢ双酶切的ｐＭＪ６０１载体上。结论：重组ＨＳＶ－ＴＫ痘苗病毒真核表达载体ｐＭＪ６０１ 的构建，为胃癌自杀基因的基因治疗打下坚实的基础。
- 郜恒骏朱红音顾伟齐搂屹任卫平萧树东
- 关键词：自杀基因基因治疗
- 丝裂原激活蛋白激酶阻断剂与DNA甲基化酶抑制剂对人结肠癌细胞的协同影响被引量：6
- 2006年
- 目的研究细胞外信号调节激酶-丝裂原激活蛋白激酶途径(ERK-MAPK)与DNA甲基化间的关系及对结肠癌细胞生物学行为的协同影响。方法培养人结肠癌细胞SW1116,分别以PBS、二甲基亚砜(DMSO)为对照组,PD 98059 50μmol／L、5-氮脱氧胞苷(5-aza-dC)5μmol／L、PD 98059 50 μmol／L+5-aza-dC 5μmol／L进行药物干预,以定量RT-PCR检测DNA甲基化酶(Dnmt)1、3a和3b基因转录水平;流式细胞仪分析细胞周期;MTT测定细胞活力;光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果 ERK-MAPK途径阻断剂PD 98059下调Dnmt 1和Dnmt 3b,Dnmt抑制剂5 aza-dC下调Dnmt 1、 Dnmt 3a和Dnmt 3b,日5-aza-dC联合PD98059对Dnmt1及Dnmt 3a mRNA的表达下调更为显著。5- aza-dC明显降低G0／G1期细胞百分比(P<0．05),G2／M期细胞百分比明显增加(P<0．05);PD98059 使G0／G1期细胞百分比降低(P<0．05),G2／M期增加(P<0．05)。PD98059明显抑制细胞生长。PD 98059促进细胞分化,呈上皮样改变,细胞变狭长,胞质减少,细胞排列开始出现相对整齐;5-aza-dC干预组细胞大小不一,出现较多多倍体细胞(多个核分裂相)。结论 ERK-MAPK途径阻断剂及Dnmt抑制剂均能抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖,并诱导细胞分化;两者有协同作,ERK-MAPK信号转导途径能调控DNA甲基化水平。
- 陈朝飞房静远孙丹凤翁玉蓉李恩灵朱红音顾伟齐
- 关键词：细胞周期
- 重组人白细胞介素-2痘苗病毒的构建与鉴定
- 2001年
- 目的：构建表达人白细胞介素－２（ｈＩＬ－２）的重组痘苗病毒，为肿瘤免疫基因治疗作必要准备。方法：应用分子克隆基因重组技术构建重组ｈＩＬ－２痘苗病毒真核表达载体ＰＭＪ６０１（ＭＪ６０１ｈｌＬ－２）。在此基础上，应用分子病毒学同源重组技术构建能表达ｈＩＬ－２的重组痘苗病毒（ＶＭＪ６０１ｈＩＬ－２）。制备ｈＩＬ－２探针，用ＤＮＡ杂交技术鉴定ＶＭＪ６０１ｈＩＬ－２，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）检测ＶＭＪ６０１ｈＩＬ－２的基因产物。结果：成功构建了ＭＪ６０１ｈＩＬ－２和ＶＭＪ６０１ｈＩＬ－２，ＶＭＪ６０１ｈＩＬ－２感染的ＳＧＣ７９０１胃癌细胞能分泌具有生物活性的ｈＩＬ－２蛋白。结论：ＶＭＪ６０１ｈＩＬ－２的构建与鉴定为进一步实施体内恶性肿瘤免疫基因治疗打下了坚实的基础。
- 郜恒骏童菊芳朱红音顾伟齐任卫平萧树东
- 关键词：白细胞介素2痘苗病毒免疫疗法胃癌
- 叶酸受体α在胃癌组织中的表达及其与叶酸、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性以及胃癌生物学行为的关系被引量：7
- 2006年
- 背景:叶酸缺乏与胃癌发生有关,亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是叶酸代谢途径的关键酶之一,叶酸受体α(FRα)可介导细胞外叶酸进入细胞内。目的:探讨人胃癌组织中FRα的表达及其与叶酸、MTHFR基因多态性以及胃癌生物学行为的关系。方法:收集38例胃癌患者的癌组织、癌旁和外周正常组织标本,以自动化学发光系统测定叶酸含量,以聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测MTHFR基因677(C→T)和1298(A→C)两个常见多态,并以即时逆转录PCR(real-timeRT-PCR)检测FRα的表达。结果:FRα在胃癌组织中的表达显著降低(P<0.01),且表达降低癌组织与表达无变化癌组织相比,叶酸含量呈降低趋势(P=0.06)。FRα的表达与MTHFR基因多态性无明显相关性。年龄≥60岁、有淋巴结转移以及肿瘤直径≥5cm的胃癌组织FRα表达水平更低(P≤0.05)。结论:胃癌组织中FRα低表达影响了细胞外叶酸进入细胞内,从而参与了胃癌的发生,其表达降低与年龄增长和胃癌的进展有关。
- 翁玉蓉房静远孙丹凤陈朝飞陆嵘顾伟齐朱红音
- 关键词：叶酸受体Α叶酸亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性
- Hemo-Quant试验——一种新的特异灵敏的粪便隐血定量法
- 1992年
- 本文介绍粪便隐血灵敏和特异的荧光测定法,应用热草酸试剂使无荧光的血红素转变为有荧光的原卟啉等,通过三步抽提,去除粪中主要干扰物粪卟啉及叶绿素,进行荧光测定。
- 李蓉蓉王建文顾伟齐萧树东李立群
- 关键词：隐血血红素荧光法
- 重组人白细胞介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2000年
- 目的：构建含人白细胞介素－２（ｈＩＬ－２）基因的痘菌病毒真核表达载体ｐＭＪ６０１，为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准备。方法：利用质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化和ＤＮＡ序列分析等多种基因工程技术，将纯化回收的ｈＩＬ－２基因分别与质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋／－及ｐＭＪ６０１进行连接、转化并签定。结果：克隆有ｈＩＬ－２基因的ｐＬＸＳＮ经ＥｃｏＲＩ－ＢａｍＨＩ酶切后，ｈＩＬ－２基因被成功地连接到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋／－上，再经Ｓａｉｌ－ＢａｍＨＩ酶切后，ｈＩＬ－２基因又被克隆到ｐＭＪ６０１真核表达载体上。结论：重组ｈＩＬ－２基因痘苗病毒真核表达载体ｐＭＪ６０１的构建为胃癌的免疫基因治疗打下了坚实的基础。
- 郜恒骏朱红音顾伟齐楼屹任卫平萧树东
- 关键词：重组人白细胞介素2痘苗病毒真核表达载体胃癌基因治疗
- 胃癌组织中肿瘤相关基因甲基化及其表达与叶酸和代谢酶MTHFR基因多态性的关系被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨人胃癌组织中癌基c-myc,抑癌基因p16INK4A,p21WAF1,错配修复基NhMLH1和hM2SH2的甲基化状态及其表达与叶酸、MTHFR基因多态性的关系．方法:胃癌38例手术切除标本的癌区、癌旁和外周正常黏膜组织,运用FOL ACS:180自动化学发光系统测定叶酸含量,PCR-RFLP技术检测MTHFR基因677(C→T)和1298(A→C)两个常见多态,并分别以Real—time RT-PCR和甲基化特异性PCR (MSP)技术检测肿瘤相关基因的表达和甲基化状态．结果:c-myc表达升高,p16INK4A,hMLH1和hMSH2表达降低的胃癌黏膜组织其基因启动子区异常甲基化．p21WAF1,hMSH2表达降低, p16INK4A高甲基化者叶酸水平明显降低,c-myc低甲基化和表达升高者中均存在低叶酸水平．MTHFR 677CC基因型的胃癌黏膜组织p16INK4A甲基化升高且表达降低,而其余肿瘤相关基因的甲基化及其表达与MTHFR两个常见多态均无明显相关性．结论:DNA甲基化在胃癌的发生、发展中具有重要作用,叶酸水平和MTHFR基因多态性通过影响部分肿瘤相关基因的甲基化状态而调控其表达．
- 翁玉蓉房静远孙丹凤陈朝飞陆嵘顾伟齐朱红音
- 关键词：肿瘤相关基因叶酸MTHFR基因多态性
- 上海市不同人群中丙型肝炎病毒感染的调查被引量：1
- 1996年
- 近年来国内外对丙型病毒性肝炎的研究愈益广泛深入，在流行病学、病毒学、病理学、免疫学、临床检测试验及治疗方面，均有明显进步。目前，第一代诊断试剂已被更为敏感的第二代诊断试剂所取代。聚合酶链反应(PCR)在该病研究中已被较普遍使用。人群中HCV感染情况的流行病学研究也更趋准确。
- 李继强曾民德李蓉蓉萧树东江绍基顾伟齐汤希伟钱家琪陈素英何颖欣罗国豪丁丽珍
- 关键词：丙型肝炎病毒感染丙型病毒性肝炎流行病学研究HCV感染免疫学
- 慢性HCV感染状态与机体细胞免疫功能关系的探讨被引量：2
- 1998年
- 目的:探讨慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者丙型肝炎病毒RNA(HCV RNA)增殖状态与T细胞亚群功能及血浆中IL-2和slL-2R活性的关系。方法:以间接免疫荧光法,ELISA法和RT-PCR分别检测75名慢性HCV感染患者(其中HCV RNA阳性47例,HCV RNA阴性28例)外周血T细胞亚群,IL-2及sIL-2R的水平和HCV RNA。结果:慢性HCV感染患者周围血CD3^+,CD4^+淋巴细胞亚群,CD4^+/CD8^+比值及IL-2水平均显著低于正常对照组(P<0.01),而sIL-2R明显升高(P<0.01);血清HCV RNA阳性患者T细胞亚群,CD4^+/CD8^+比值及IL-2水平显著低于HCV RNA阴性患者(p<0.01)。结论:慢性HCV感染患者的机体免疫功能紊乱。细胞免疫功能低下,HCV RNA阳性患者较阴性患者更甚,提示细胞免疫功能受抑可能是HCV持续增殖的原因。
- 李超群李继强曾民德华静邱德凯李蓉蓉顾伟齐王自鸣萧树东
- 关键词：慢性HCV感染T淋巴细胞亚群IL-2SIL-2R
