马建
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省医学科技创新人才工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 干细胞贴膜治疗脊髓损伤被引量：4
- 2009年
- 背景:目前人们较多采用的成体干细胞移植,移植方式多形成再次损伤,且体内神经元分化的效率不高。目的:在以往分步诱导分化高效获得神经元前体细胞的基础上,制成干细胞贴膜,观察其贴敷移植治疗脊髓损伤功能恢复的效果。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/10在郑州大学医学院实验中心完成。材料:酶、化学法制作膜样基质;分离培养、扩增羊膜间充质干细胞,BrdU标记,调整部分细胞浓度为1×1011L-1成细胞悬液备用。余分步诱导并制成干细胞贴膜。方法:健康成年雄性SD大鼠88只,体质量220～250g,以自制打击器制作急性脊髓损伤模型。模型成功后6h,抽签法随机分为4组,每组22只。干细胞贴膜组:在T11进行椎板切除术,打开硬膜充分显露损伤脊髓,止血,将干细胞贴膜贴敷在损伤脊髓表面,手术显微镜下固定于硬膜,分层缝合肌肉皮肤;细胞移植组:损伤脊髓头尾端移植1×1011L-1细胞悬液共5μL,余同上;基质组:贴敷膜样基质在损伤脊髓表面,余同上;对照组:仅行椎板切除术,并打开硬膜。主要观察指标:术后第1天及其后1周1次共10周,进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测;术后2,4,6周观察移植细胞存活及形态学变化,免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白、突触素及神经元特异性烯醇化酶的表达。结果:①运动功能检测:各组BBB积分在4周及以后达到稳定,以10周时BBB评分12及以上为重要的恢复指标,则干细胞贴膜组为100%,细胞移植组为33%,基质组和对照组仅为17%。斜板实验的顺位实验,干细胞贴膜组第10周时的角度与第4周相比有显著改善(P=0.027),而同组同时间点的BBB分值间差异无显著性意义(P=0.286)。②干细胞贴膜组和细胞移植组远端损伤边缘BrdU阳性细胞计数差异无显著性意义(P=0.089)。干细胞贴膜组BrdU阳性细胞多呈神经元形态,细胞移植组BrdU阳性细胞多呈小胶�
- 胡炜关方霞杨波杜英马建李祥生胡祥焦红亮李远
- 关键词：脊髓损伤体内分化突触素
- 两份人脐血间充质干细胞混合培养及向神经元样细胞的分化被引量：7
- 2008年
- 背景：脐血间充质干细胞可诱导分化为神经样细胞，但在临床中发现干细胞培养细胞增殖的数量不足。目的：观察两份脐血间充质干细胞混合培养的生长情况，以及经碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞的分化。设计、时间及地点：于2007—01/10在郑州大学基础医学院微生物与免疫学实验室完成以细胞为对象的对照观察性实验。材料：健康分娩产妇自愿捐献的脐血60～180mL。方法：应用Ficoll—Hypaque淋巴细胞分离液以密度梯度法获取脐血间充质干细胞，加入碱性成纤维细胞生长因子诱导分化。当细胞传至第3代时，随机取培养的6份脐血间充质干细胞（半量）为A组，6份脐血间充质干细胞（半量）为B组，将A、B组各剩余的半量脐血间充质干细胞混合为C组。3组细胞密度均为1．0×10^4L^-1。主要观察指标：以活细胞计数和MTT比色法比较3组细胞扩增数量，免疫组织化学检测脐血间充质干细胞神经胶质细胞标志物、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白的表达。结果：活细胞计数和MTT比色检测显示，将两份不同脐血间充质干细胞混合后，细胞贴壁比单份脐血间充质干细胞快（P〈0．05），增殖也非常快（P〈0．05）。3组细胞经碱性成纤维细胞生长因子诱导后均表达神经胶质细胞标志物、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白，并且巢蛋白阳性表达率无差别（P〉0．05）。结论：混合脐血间充质干细胞之间有互相促增殖作用，应用碱性成纤维细胞生长因子诱导的脐血间充质干细胞可表达神经胶质细胞标志物、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白。
- 焦红亮杨波关方霞李建斌杜英单泓胡祥胡炜马建满勇赵林娜段艳丽
- 关键词：脐血分化
- 羊膜间充质干细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨羊膜间充质干细胞静脉移植对脊髓损伤修复的影响。方法:90只成年SD大鼠按改良Allen′s打击方法建立脊髓损伤模型,随机分为3组:对照组、假移植组和移植组,每组30只。于脊髓损伤后1周经尾静脉移植Brdu标记的羊膜间充质干细胞。3组大鼠分别于损伤后第1 d、3 d、1周及移植后1 d、3 d、1周、2周、4周采用BBB评分法对行为学进行评价。并于移植后1 d、3 d、1周、2周、4周分批处死,切片观察Brdu标记的细胞能否迁移到损伤区。结果:脊髓损伤后第1 d,3组实验动物后肢运动功能BBB评分皆为0分;细胞移植1周后移植组动物BBB评分为5.6±0.6,对照组和假移植组动物BBB评分分别为5.3±0.4和5.2±0.6;细胞移植2周后移植组、假移植组和对照组BBB评分分别为11.3±0.9、6.4±0.5和6.5±0.8;4周后3组实验动物评分分别为13.4±0.9、8.3±0.6和8.5±0.7;在损伤部位出现了Brdu标记的羊膜间充质干细胞。结论:经静脉移植的羊膜间充质干细胞能够迁移到损伤区并对脊髓损伤有一定的修复作用。
- 马建杨波关方霞胡炜焦红亮杜英宋来君胡祥
- 关键词：羊膜间充质干细胞脊髓损伤静脉移植BBB评分
- 人脱细胞羊膜对间充质干细胞向神经系细胞分化的影响被引量：2
- 2009年
- 背景:成体干细胞在细胞外基质加细胞因子作用下向神经系细胞分化的报道甚少。目的:根据干细胞巢原理,探讨羊膜间充质干细胞体外向神经系细胞诱导分化的条件,及其定向分化过程中神经蛋白的表达。设计、时间及地点:细胞形态学观察及蛋白分子水平检测,于2007-12/2008-04在郑州大学医学院实验中心完成。材料:产妇自愿捐献的羊膜由郑州大学第一附属医院产科提供。维甲酸、碱性成纤维细胞生长因子为Sigma公司产品。方法:体外分离培养、扩增羊膜间充质干细胞,调整细胞密度为4×107L-1,同时通过酶-化学法制作膜样基质。设立2组:诱导组羊膜间充质干细胞以基础培养基预诱导后,按4×107L-1接种在膜样基质上,并以神经基础培养基培养2d,然后替换为含10-3mmol/L维甲酸、20μg/Lβ-神经生长因子的DMEM/F12神经诱导培养基,继续培养24h,换基础培养基继续培养3d。对照组除不用膜样基质外,余步骤同诱导组。主要观察指标:细胞形态学变化,蛋白分子水平鉴定神经细胞表型。结果:诱导组接种到膜样细胞外基质24h可见细胞呈球形,紧贴膜样基质,胞体伸出突起,折光性强;第3天大部分细胞突起延伸并相互连接;4～6d突起形成网状结构且排列具有一定的方向性;对照组3d时见多个突起,4～6d细胞又恢复纤维细胞形态。预诱导后,两组巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶表达明显增高,突触素、胶质纤维酸性蛋白表达无明显变化;诱导6d时与对照组比较,诱导组神经元特异性烯醇化酶表达无明显差异(P>0.05),突触素表达显著升高(P<0.01),巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:在膜样细胞外基质上,羊膜间充质干细胞可显示典型神经元特有的形态特征、表达标记。提示应用基质加细胞因子的诱导程序,可以从羊膜间充质干细胞高效获得神经元前体细胞,并抑制其向神经胶质细�
- 胡炜关方霞杨波杜英马建李祥生胡祥焦红亮李远
- 关键词：羊膜间充质干细胞细胞外基质分化
- 腹侧急性闭合性脊髓损伤模型建立被引量：1
- 2009年
- 脊髓损伤发病率高，病理机制复杂，建立理想的模型尤为重要，现已有多种模型报道。我们用自制适形撞击器建立腹侧急性闭合性脊髓损伤动物模型。
- 胡炜关方霞杨波焦红亮马建常克亮胡祥李远杜英宋来君
- 关键词：急性闭合性脊髓损伤腹侧病理机制动物模型
