黄仆
- 作品数：9 被引量：24H指数：3
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪NF-κB p65/p50亚基的原核表达及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 为了研究经原核表达的猪细胞核转录因子NF-κB p65/p50融合蛋白对猪繁殖与呼吸综合病毒(PRRSV)体外增殖影响,本文采用RT-PCR技术扩增出编码成熟p50区和p65开放阅读框(ORF),将其克隆至pET21a(+)中,转化至Rosetta感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)对表达产物进行鉴定;纯化复性后添加到DMEM细胞维持液中,观察p65/p50对Marc145细胞毒性,确定最佳使用浓度;探讨最佳浓度的p65/p50对PRRSV体外感染增殖活力的影响,通过实时荧光定量PCR方法研究PRRSV感染时相,绘制PRRSV增殖曲线。成功构建了大量以包涵体形式表达Mr均约为70kD的p65/p50融合蛋白的p65/p50-pET21a(+)原核表达载体;Western-blot显示p50和p65重组蛋白可分别与兔抗人p50多克隆血清、兔抗人p65纯化抗体反应。确定p65/p50最佳添加浓度为0.4μg/mL。通过实时荧光定量PCR技术研究PRRSV感染时相,结果表明NF-κB p65/p50可促进PRRSV感染Marc-145CPE出现及病毒早期增殖;但CPE出现后,病毒增殖受到抑制,病毒滴度水平显著降低(P<0.05)。该结果为进一步研究PRRS的发病机理及治疗策略提供了新思路。
- 王潇娣朱玲蔡雨函黄仆徐志文
- 关键词：核转录因子-ΚB猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒复制
- 猪细小病毒四川株的分离鉴定及其一步生长曲线
- 2013年
- 为了研究猪细小病毒(PPV)的增殖规律,利用PK-15细胞从流产胎儿的肝、肠系膜淋巴结和肾样品中分离到1株病毒,经PCR检测、蚀斑纯化、病毒理化试验、微量中和试验和血凝试验证实该分离株为猪细小病毒,命名为SC-L。针对PPV的VP1和NS1基因设计特异性引物,建立PPV的荧光定量PCR方法。以SC-L分离株感染PK-15细胞,感染后每隔4h分别收集感染细胞与上清液,利用荧光定量PCR方法对不同样品中的病毒DNA进行定量分析,绘制PPV SC-L的一步生长曲线。PPV SC-L株感染PK-15细胞,细胞外病毒含量在第4～20小时缓慢增加,20h后呈对数增长,第56小时达到最大值,随后病毒含量迅速下降,在第68小时时趋于稳定;在细胞内感染4h检测到微量的病毒粒子,第4～24小时细胞内病毒缓慢增长,24h细胞内病毒粒子呈对数增长,第44小时达到最大量,随后胞内病毒粒子逐渐降低。表明PPV在细胞内增殖到一定数量后逐步释放到细胞外,且细胞外病毒最大量高于细胞内。
- 江一帆吴云飞朱玲徐志文阳爱国廖珊陈蕾黄仆郭万柱
- 关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR
- 兔巴氏杆菌的分离鉴定及其16S rDNA序列分析被引量：5
- 2011年
- 兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌（Pm）引起的一种急性、传染性疾病，以败血症和出血性炎症为主要特征，因此又被称为“兔出血性败血症”。
- 奎玲黄仆刘孟良代洪波朱玲
- 关键词：多杀性巴氏杆菌兔巴氏杆菌病出血性败血症传染性疾病
- 猪溶血性链球菌的分离鉴定及溶血素基因的PCR检测被引量：1
- 2012年
- 为了建立简便、快捷、准确的猪溶血性链球菌实验室诊断方法,试验采用无菌操作技术将疑似猪链球菌病的猪组织接种于血平板上培养,对染色、镜检为链球菌的菌落进行分离纯化,然后进行生化鉴定、动物致病性试验、药敏试验。根据GenBank发布的猪链球菌溶血素基因(sly)全序列,设计1对特异性引物,然后抽提分离菌DNA扩增出大小为568 bp的目的片段。结果表明:使用此鉴定方法可简便、快捷、准确地检测出猪溶血性链球菌溶血素基因。
- 徐珊珊黄仆刘涛代洪波吴云飞刘孟良朱玲
- 关键词：溶血性链球菌溶血素基因PCR检测
- 四川地区猪场中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型与耐药性分析被引量：2
- 2017年
- 为研究四川猪场分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药现状及其SCCmec基因型情况,讨论猪源MRSA对公共卫生带来的隐患。于2013年3-12月在四川地区12个规模化猪场采集的120份样品中分离金黄色葡萄球菌(SA),对PCR初步鉴定出SA,再鉴定mec A、fem A耐药基因,阳性菌株判定为MRSA。对鉴定出的猪源MRSA进行SCCmec分型与耐药性试验及分析。共分离出60株金黄色葡萄球菌,其中22株MRSA,检出率18.3%(22/120),饲养员手棉拭子、猪鼻捻子、猪场水样中均分离出MRSA。药敏试验结果表明,22株MRSA菌株的多重耐药性明显,耐药性主要表现为4、6耐,其中SCCmecⅣa型17株、SCCmecⅠ型5株。目前四川地区猪源MRSA不仅对猪场人员存在感染隐患,同时也对公共卫生安全存在一定的威胁。
- 许思遥黄仆李萍杨凡姜子义吕雯婷徐志文朱玲
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性公共卫生
- 猪肺疫多杀性巴氏杆菌的分离鉴定被引量：10
- 2012年
- 为了研究四川乐山某猪场爆发的保育猪严重呼吸道疾病的主要病原,试验采用病理剖检、病毒检测、细菌分离鉴定、生化鉴定、动物回归试验以及多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测对病原进行鉴定。结果表明:发病猪有严重肺炎症状,支气管内部有少量泡沫,腹股沟淋巴结出血、水肿,其他实质器官未见明显病理变化;病毒检测结果显示为蓝耳病病毒阳性,猪瘟病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒2型阴性;从病猪肺脏中分离获得大肠杆菌和1株蓝耳病病毒继发的高致病性多杀性巴氏杆菌;该分离菌株对多种药物均高度敏感。
- 黄仆代洪波刘孟良唐蕊涵朱玲
- 关键词：猪肺疫多杀性巴氏杆菌
- 四川地区猪群中耐甲氧西林金黄色葡萄球的分离鉴定和耐药性研究
- 现在的养猪业规模巨大,相关动物产品的使用和食用人群众多,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistantst Staphylococcus aureus,MRSA)的发现引发了各界对养猪业及其产品的普...
- 黄仆
- 关键词：药敏试验
- 文献传递
- 四川地区猪群中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定和耐药性研究
- 现在的养猪业规模巨大，相关动物产品的使用和食用人群众多，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistantst Staphylococcus aureus，MRSA)的发现引发了各界对养猪业及其产品的普...
- 黄仆
- 关键词：药敏试验耐药性
- 文献传递
- 猪NF-kappaB p65/p50基因克隆、序列鉴定及实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2013年
- NF-κB信号通路在病毒感染、免疫损伤性疾病、肿瘤疾病中发挥重要作用,其活化水平常作为机体免疫应答水平、疾病发展进程的检测指标。为获得猪NF-κB p65/p50基因序列特征并建立体外定量检测其表达水平的实时荧光定量PCR方法,作者对猪NF-κB p65ORF和成熟p50编码区进行RT-PCR扩增、克隆、测序及生物信息学分析;设计特异性荧光定量引物,建立检测p65、p50实时荧光定量PCR方法。结果显示:所扩增的猪NF-κB p65ORF长1 662bp,编码553aa,成熟p50编码区长1 653bp,编码551aa;与不同动物的p65、p50序列相似性均较高;56.5%p65位于细胞核内,78.3%p50存在于细胞质中,p65、p50均无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:起始模板与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.999,扩增效率均在95%左右;敏感性高,初始模板的检出下限达到101 copies.μL-1;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内变异系数均小于5‰。本试验为进一步研究猪NF-κB p65/p50生物学功能及其在猪相关疾病发生发展中表达量变化奠定了基础。
- 王潇娣朱玲廖春燕黄仆徐志文郭万柱
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR
