黄天晴
- 作品数：9 被引量：12H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生电气工程更多>>
- 猪源Lin28基因的克隆及其在猪胎儿成纤维细胞中的表达
- 2012年
- Lin28广泛地表达于早期胚胎中,是重编程的一个重要诱导因子。根据GenBank中公布的猪源Lin28的序列设计合成引物,以猪桑葚胚cDNA为模板,通过RT-PCR方法扩增其编码区全序列。将此克隆片段连接到PMXs表达载体上,构建逆转录病毒载体PMXs-Lin28。在293T细胞中包装携带Lin28基因的逆转录病毒,感染猪如猪胎儿成纤维细胞(Porcine embryonic fibroblasts,PEF)。免疫荧光及Real-time结果显示,PMXs-Lin28载体能够介导Lin28 mRNA和蛋白质在猪胎儿成纤维细胞中的高效表达,Lin28基因能够激活Oct4、Sox2、Nanog、Klf4和c-Myc基因的表达。
- 刘忠华韩小娇张鑫淼王娟牟彦双何文腾黄天晴孔庆然姜丹丹丛义梅尹智
- 关键词：成纤维细胞过表达
- 胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:通过shRNA干扰高效敲低猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的表达,进而验证其对于糖脂代谢相关基因表达的影响,为构建2型糖尿病模型猪奠定基础。方法:首先通过重叠PCR方法克隆了猪IRS1基因全部的mRNA序列(4 814bp)以及通过3'RACE方法克隆了猪IRS2基因的部分3'非编码区(3-untranslated region,3'UTR)。然后,通过Real-time PCR筛选获得了能显著敲低这两个基因的shRNA片段,并在同时敲低IRS1和IRS2的猪肝脏细胞中,检测糖脂代谢相关基因的表达。结果:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2的表达被显著敲低,分别下降了78%和64%。另外,糖异生作用酶磷酸烯醇丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,F-1,6-BP)基因表达显著上升,并导致催化肝脏中糖酵解反应的葡糖激酶(glucokinase,Gck)基因表达的显著下降。同时,胆固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins,SREBP-1)基因的表达也显著上升以及胆固醇调节基因Abcg8,CYP7a1表达明显上调。结论:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的敲低可激活糖异生作用,并抑制糖酵解反应,从而导致糖代谢的异常,同时也能引起脂类代谢的异常。
- 黄天晴孔庆然李妍于淼刘忠华
- 关键词：RNA干扰糖脂代谢
- 胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响
- 根据最新的流行病学研究,糖尿病正在成为全世界范围内的流行疾病。2型糖尿病（type2diabetes mellitus, T2DM）是一种复杂的代谢紊乱疾病,主要的发病机制为外周胰岛素抵抗与胰腺β细胞功能发生障碍。理解这...
- 黄天晴
- 关键词：RNA干扰糖脂代谢
- 文献传递
- 一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用
- 本发明公开了一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。通过与具有IRS2基因的质粒载体进行连接，本发明还提供了一种具有同时敲低猪源IRS...
- 孔庆然黄天晴刘忠华
- 文献传递
- 三倍体雌性虹鳟性腺发育过程中lc3b基因的表达分析被引量：1
- 2017年
- 旨在证明细胞自噬与三倍体雌性虹鳟性腺败育的关系。利用RT-PCR扩增虹鳟自噬基因lc3b(Microtubule associated protein 1 light chain 3 beta,lc3b)的编码区序列,通过透射电镜观察三倍体雌性虹鳟不同发育阶段性腺中自噬小体的形态,结合不同发育阶段性腺中lc3b基因和蛋白的表达,来证明细胞自噬的发生。结果表明,在200 dpf-270 dpf(Days post fertilization,dpf)这个发育阶段,lc3b基因以及自噬蛋白LC3B-II/LC3B-I的表达处于相对较高的水平,在这个时期内,都观察到了自噬体结构的存在。这些结果证明了性腺细胞自噬为三倍体雌性虹鳟性腺败育的主要原因之一。
- 黄天晴王星然王彦娜孙慧智韩英
- 关键词：三倍体虹鳟自噬性腺发育
- 三倍体虹鳟卵巢发育中细胞凋亡与发育相关基因的表达被引量：6
- 2016年
- 为了研究三倍体雌性虹鳟在生长过程中出现的性腺发育停滞、卵原细胞发育异常的原因，试验采集180-300dpf时期二倍体和三倍体虹鳟的性腺组织，利用光镜、电镜切片和TUNEL染色进行组织与细胞学对比研究，利用实时荧光定量PCR分析对卵巢发育和配子发生过程发育具有调节作用的生长分化因子9（GDF9）、骨形态发生蛋白4（BMP4）和骨形态发生蛋白7（BMP7）在二、三倍体相同时期的表达差异。结果表明：180-300dpf虹鳟三倍体卵巢中的卵原细胞发生凋亡，除240dpf三倍体虹鳟BMP4表达量显著高于二倍体外，三倍体虹鳟中GDF9、BMP4和BMP7表达量显著低于同时期二倍体。说明三倍体虹鳟卵原细胞发育异常，最终发生凋亡，可能与GDF9、BMP4和BMP7的低表达有关。BMP4在调节卵母细胞发育的同时可能有抑制细胞凋亡的作用。
- 柳广昊郝其睿黄天晴苗畅奇孙慧智王雪薇韩英
- 关键词：细胞凋亡GDF9BMP4BMP7
- 一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用
- 本发明公开了一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。本发明还提供了一种抑制IRS2基因表达的shRNA干扰载体。根据克隆经对比分析后的...
- 孔庆然黄天晴刘忠华
- 文献传递
- 三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)卵巢分化及滞育的调控机制研究被引量：3
- 2017年
- 尽管与性别决定和分化的相关基因在二倍体虹鳟中已被鉴定出来,如Cyp19a1a、Foxl2、Dmrt1、Amh和Sox9,但关于三倍体雌性虹鳟独特性腺表型及其相关性别控制基因的表达规律仍未得到深入研究,尤其是早期卵巢发育阻滞导致的生殖细胞去分化特征。因此,本研究以三倍体雌性虹鳟性腺发育中起重要调控作用的特异候选基因作为重点研究对象,辅助性腺体细胞与生殖细胞分化方向的组织学证据和类固醇激素表达规律,验证了各基因间的级联调控关系。结果表明,虹鳟三倍体与二倍体卵巢的分化特征基本一致。虹鳟二倍体与三倍体性腺分别在84dpf和98dpf就已分化为卵巢。但三倍体虹鳟卵巢分化存在障碍,早期发育停滞,卵原细胞及其滤泡细胞数量有限。Foxl2和Cyp19a1a在二倍体虹鳟卵巢和精巢中均有表达,它们在卵巢中表达量均呈逐渐升高趋势,但在精巢中的表达量非常低;这两个基因在雌性三倍体虹鳟性腺中的表达呈先升高后降低的趋势,其表达量均在8月龄时期达到最大。Dmrt1、Amh和Sox9在二倍体精巢和雌性三倍体卵巢中的表达均呈不断上调趋势,这些基因上调可能与血清睾酮含量的增加相关,因为在10月龄时期这两种鱼的血清含量相对较高,而这三个基因在二倍体虹鳟卵巢中的表达却呈下调趋势。因此本研究认为,维持鱼类卵巢分化需要持续高水平的雌激素,这可能是脊椎动物进化过程中的一个保守特征。可以推断雌性三倍体虹鳟卵巢滞育将导致其体细胞去分化,这对于Cyp19a1a表达及雌二醇合成存在抑制作用。因为这些雌激素是用来维持它们分化和继续发育的,可能产生一个负反馈圈,之后去分化会增强。
- 徐革锋牟振波陈怀发黄天晴王炳谦谷伟户国韩英
- 关键词：虹鳟三倍体
- 一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用
- 本发明公开了一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。通过与具有IRS2基因的质粒载体进行连接，本发明还提供了一种具有同时敲低猪源IRS...
- 刘忠华仇有文孔庆然黄天晴
- 文献传递
