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黎明: 作品数：98 被引量：136H指数：7; 供职机构：天津科技大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划天津市科技支撑计划更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>

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高效表达AIM工程菌的发酵培养基及发酵条件优化被引量：1: 2010年; 为了进一步提高工程菌的载脂蛋白AI米兰突变体(AIM)的表达量,降低发酵成本,通过碳氮源优化实验并结合正交实验筛选出该工程菌产AIM的最适培养基为(g/L):蔗糖10,酵母粉10,硫酸铵6和NaCl 10;最适发酵条件为:装液量30 mL,接种量8%,诱导时机A600 1.0,诱导剂浓度0.8 mmol/L,诱导时间6 h.在此优化的条件下,AIM的表达量为2.26 g/L,是未优化条件下的1.58倍.; 黎明张俊环周政牛涛; 关键词：发酵培养基发酵条件大肠杆菌

一种高效无选择标记的黑曲霉基因组编辑方法被引量：2: 2022年; 黑曲霉(Aspergillus niger)是一种重要的工业生产菌株,被广泛地应用于生产酶制剂和有机酸,但仍需要进行基因组改造提高它的应用潜力。CRISPR/Cas9技术是一种被广泛采用的黑曲霉基因组编辑技术,但由于需要在基因组中整合选择标记或基因编辑效率还有待提高,影响了其在工业菌株改造中的应用。本研究建立了一种基于CRISPR/Cas9技术的高效无选择标记的基因编辑方法。首先,利用5S rRNA启动子启动sgRNA的表达,构建了一个含有AMA1(autonomously maintained in Aspergillus)复制起始片段的sgRNA和Cas9共表达质粒;同时通过敲除kusA基因构建非同源末端连接(non-homologous end joining pathway,NHEJ)修复缺陷的高效同源重组菌株;最后利用含有AMA1片段质粒的不稳定性,通过无抗平板传代丢失含有sgRNA和Cas9共表达质粒。利用该方法,在采用同源臂长度仅为20 bp的无选择标记供体DNA进行基因编辑时,基因编辑效率可达到100%。该方法为黑曲霉基因功能的研究和细胞工厂的构建奠定了基础。; 申玉玉陈忠秀陈杰赵宝顶吕佳桂玲路福平黎明; 关键词：黑曲霉无标记同源重组

重组人载脂蛋白AI米兰突变体在大肠杆菌中的可溶性表达: 2005年; 载脂蛋白AI米兰突变体(apoliproteinA_I_Milano ,AIM)是载脂蛋白AI的天然突变体,具有比载脂蛋白AI更强的抗动脉粥样硬化症的作用。将AIM基因N_末端的氨基酸密码子优化后,克隆至表达载体pET2 2b ,重组质粒转化BL2 1(DE3)宿主菌,用IPTG诱导表达。AIM以可溶形式表达,约占菌体总蛋白的38%。表达产物经ButylSepharose 4F .F疏水层析和QSepharoseH .P .阴离子交换层析后,再用Vivaspin2 0 (30 0 0 0MW)进行超滤,AIM单体的纯度达95 %以上。AIM单体与脂结合活性表明,AIM单体结合脂的速度比apoA_I慢,但结合脂的量比apoA_I高。这项研究为AIM的结构和功能,特别是临床应用研究奠定了基础。; 黎明赵洪亮薛冲张伟张士猛刘志敏

基于Methylovorus sp.J1-1基因组尺度代谢网络优化吡咯喹啉醌合成被引量：2: 2022年; 通过构建Methylovorus sp.J1-1基因组尺度代谢网络模型(genome scale of metabolic network model,GSMM),发掘能够提升吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone,PQQ)产量的发酵策略和相关靶基因。基于其注释的基因组和生化信息,构建J1-1的GSMM。再通过COBRApy预测可能使PQQ产量提高的氨基酸和潜在的靶基因并进行验证。构建了Methylovorus sp.J1-1的GSMM模型iKH584,共有584个基因,779个生化反应,121个交换反应与765个代谢产物,且可以用于后续模拟。根据iKH584模拟,外源添加谷氨酸、谷氨酰胺和脯氨酸、过表达glyA与hps1以及敲除hps2基因,均具有促进PQQ合成效果。结果表明:添加谷氨酸与脯氨酸时,PQQ的产量分别提高了10.4%与22.9%;过表达基因glyA与hps1,PQQ产量分别提高20.6%与14.6%;敲除基因hps2,PQQ产量最高可达140.84 mg/L,提高了8.0%,这与模拟结果基本一致,表明构建的模型基本正确。最后,在5 L发酵罐进行J1-1△hps2的分批补料发酵,PQQ的产量为812.64 mg/L,比亲本菌株提高了11.1%。建立的模型可以用来指导J1-1的发酵和菌株改造,提高PQQ产量。; 寇航王艳梅李彤薄明井张惟材熊向华黎明; 关键词：吡咯喹啉醌氨基酸

无选择标记转基因大豆表达载体的构建: 转基因大豆是世界上转基因作物中推广时间最早、推广面积最大、效益最高的转基因作物。然而,和所有其他转基因植物一样,构建的转基因大豆不仅含有目的基因,还含有选择标记基因,这; 黎明欧秀元魏东盛张代文邢来君李明春; 文献传递

赖氨酸-尸胺反向转运蛋白cadB基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化被引量：1: 2012年; 旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,因而不能够直接合成尸胺。从E.coliK12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因,与绿色荧光蛋白基因gfp融合构建成融合表达载体pXBG,并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达,结果表明表达的CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。将基因cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的pXMJ19-ldc上,构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白的重组质粒pXLB,并转化到谷氨酸棒杆菌中。; 黄云雁黎明刘萌孙昕周丽颖路福平; 关键词：谷氨酸棒杆菌共表达

一种糖化酶突变体及其应用: 本发明提供一种糖化酶突变体及其应用。目前工业上采用丝状真菌微生物生产的糖化酶具有生产效率高、热稳定性好的优点。但微生物发酵的糖化酶在高浓度葡萄糖存在的时具有较高的转苷活性，影响糖化效率。本发明通过定点突变，降低了其转苷活...; 黎明路福平吴佳婧; 文献传递

磷脂酰丝氨酸合成酶的制备方法: 本发明属于生物工程领域，涉及一种磷脂酰丝氨酸合成酶的制备方法，其技术方案是将工程菌发酵离心后粗酶液经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、SP-Sepharose HP离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析等步骤纯化...; 黎明路福平杜连祥张业尼李玉王建玲王春霞; 文献传递

一种耐受高浓度1,4-丁二胺的菌株及其培养方法与应用: 本发明涉及一种耐受高浓度1,4‑丁二胺的沃氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri)菌株及其培养方法与应用，该菌株命名为沃氏葡萄球菌0120，保藏编号：CGMCC No.27492；该菌株的16S rDN...; 黎明路福平

一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌及筛选方法和应用: 本发明涉及一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌，名称为16#，分类名称为：枯草芽孢杆菌Bacillus？subtilis，保藏编号为：CGMCC？No.11898，保藏日期：2015年12月22日，北京市朝阳区北...; 黎明路福平杨田; 文献传递