刘建平
- 作品数：76 被引量：174H指数：7
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项上海市科学技术委员会基础研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 一种提高重组蛋白在克鲁维酵母中表达量的方法
- 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种提高重组蛋白表达水平的技术方案。该方法中，首先将菊粉酶基因的启动子、α－信号肽、目的蛋白和菊粉酶基因的终止子编码序列依次连接；然后将上述序列插入克鲁维酵母表达载体；最后转化克鲁维酵...
- 刘建平李育阳俞静袁汉英蔡显鹏
- 文献传递
- 表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母免疫小鼠研究被引量：2
- 2011年
- 近年来研究显示全细胞重组酿酒酵母疫苗具有治疗性疫苗潜能.为了研究重组酿酒酵母结核病候选疫苗的免疫效果,将IFN-γ基因与结核杆菌抗原蛋白Ag85B、ESAT6的基因融合,利用pHR酿酒酵母表达系统和同源重组方法,成功构建了以酿酒酵母Y16为宿主的表达融合蛋白IFN--γAg85B和IFN--γESAT6-Ag85B的重组酿酒酵母.Western blot证实了融合蛋白IFN--γAg85B、IFN--γESAT6-Ag85B在重组酵母内能有效表达.将热失活后的重组酿酒酵母全细胞以皮下注射方式免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清抗体,结果显示:重组酵母能够有效激发小鼠产生Ag85B特异性IgG抗体,免疫后3周后的IgG效价明显高于免疫2周的,与表达IFN-γ-Ag85B的重组酵母相比,表达IFN--γESAT6-Ag85B的重组酵母能够更有效地诱导小鼠免疫细胞Th1型反应.
- 江佳稀张宇飞沈洪波王洪海刘建平
- 关键词：结核杆菌抗原酿酒酵母体液免疫
- 猪卵透明带-3α基因在大肠杆菌中的融合表达和鉴定被引量：7
- 1999年
- 目的通过遗传工程获得ＺＰ３α融合蛋白，以便用表达产物制备ＺＰ３α单克隆抗体。方法根据重新测序的猪ＺＰ３αｃＤＮＡ５＇端非编码碱基数，ｐＷＲ４５０表达质粒家族的ｐＷＲ４５０－２被选用来表达β－半乳糖苷酶（ＬａｃＺ）／ＺＰ３α融合蛋白。带５＇端非编码区和信号顺序的全长ＺＰ３αｃＤＮＡ片段，用ＥｃｏＲⅠ酶切自ｐＺ５８质粒，然后被重组插入ｐＷＲ４５０－２质粒中被截短ＬａｃＺ＇基因的３＇端多克隆区。此重组质粒转化大肠杆菌ＴＧ１后，ＺＰ３α融合蛋白的表达通过ＩＰＴＧ诱导。结果在１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ存在下可观察到ＬａｃＺ／ＺＰ３α融合蛋白在大肠杆菌中的表达，表达量约占总细菌蛋白的５％。在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上，融合蛋白显示相对分子质量为１０．２×１０４。在蛋白印迹实验中，融合蛋白显示了与兔抗猪ＺＰＩｇＧ的特异免疫学反应。
- 徐万祥谢毅王健王健邱德义李昌本刘建平
- 关键词：大肠杆菌基因表达
- 人类抗砷相关基因(hARRG)的克隆和表达被引量：15
- 2000年
- 目的 :克隆并表达人类抗砷基因 human arsenite resistance related gene(h ARRG)。 方法 :从人胎脑中获得 m RNA,建立 c DNA文库 ,通过大规模测序克隆出一人类新基因。 结果 :该基因全长 1170 bp,读框为 (ORF)72 3bp,经序列分析 ,与中国仓鼠抗砷基因 arsenite resistance gene (asr2 )同源性达 88%。根据 ORF设计引物 ,PCR扩增 ,扩增产物酶切后装入 PQE30质粒 ,诱导后获得 >40 %的高效表达。用镍亲和层析法纯化后纯蛋白回收率 >80 %。 结论 :首次在国内成功克隆并表达了人类抗砷相关基因 h ARRG。
- 杨磊王国荃应康黄瑾戴建凉袁有忠刘建平谢毅毛裕民
- 关键词：抗砷基因克隆砷中毒基因表达
- 一种基于单核苷酸分子对接的核酸适配体设计方法
- 本发明属于核酸适配体设计技术领域，具体为一种基于单核苷酸分子对接的核酸适配体设计方法。本发明从靶标小分子的实验结构出发，通过水合对接获得结合在靶标小分子周围的核苷酸位置；随后将离散的核苷酸组装为完整的核酸适配体；最后采用...
- 黄强宋梦华刘建平颜志超李园园
- 文献传递
- 靶向河豚毒素的高亲和性DNA适配体及其获得方法和用途
- 本发明公开了一种靶向河豚毒素的高亲和性DNA适配体及其获得方法和用途。本发明选有可能与TTX结合的DNA适配体Anti‑vWF；然后使用碱基T替换Anti‑vWF中的非天然碱基获得其变体Tv‑51，并利用分子对接及分子动...
- 黄强李园园刘建平宋梦华颜志超
- 结核分枝杆菌抗原重组酿酒酵母免疫诱导小鼠特异性免疫应答
- 2014年
- 近年来基于重组酿酒酵母全细胞的新型疫苗研究报道不断出现。以结核杆菌重要保护抗原ESAT6和Ag85B为对象,采用p HR酿酒酵母表达系统,构建了两种分别表达ESAT6-Ag85B(EA)和IFN-γ-ESAT6-Ag85B(IEA)融合抗原的重组酿酒酵母Yeast-EA和Yeast-IEA。重组酵母以皮下注射方式免疫小鼠后,小鼠产生高水平Ag85B特异性抗体,淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子,无IL-4产生,发生Th1型细胞免疫应答,其中Yeast-IEA效应更强,优于传统的BCG疫苗。实验证实重组酵母能够刺激树突状细胞的成熟分化。研究结果显示结核分枝杆菌抗原重组酿酒酵母全细胞疫苗具有发展成为新型抗结核疫苗的潜力。
- 陆健江佳稀刘建平王洪海
- 关键词：酿酒酵母结核分枝杆菌BCG
- 一种自剪切内含肽重组酿酒酵母表达优化研究
- 2015年
- 自剪切内含肽纯化系统在大肠杆菌中已经得到很好的应用。为了在真核生物中应用该系统,以酿酒酵母为宿主,p HR质粒为表达载体,构建微型内含肽ΔI-CM intein酿酒酵母表达系统。以猪免疫球蛋白Ig G的Fc domain为亲和标签,绿色荧光蛋白gfp为报告蛋白,在酿酒酵母GPD强启动子作用下,表达出融合的Fc-intein-gfp蛋白。检测发现融合序列在起始密码子ATG前加入一段Kozak序列有利于gfp表达。在此基础上,将微型内含肽ΔI-CM intein序列替换成密码子优化的ΔI-CMintein-O序列,显著促进gfp蛋白的表达量,初步实现了ΔI-CM intein融合蛋白的高效表达。为新型自剪切内含肽酿酒酵母表达系统的建立和重组蛋白高效纯化的实现奠定了基础。
- 王晶晶张旭刘建平王洪海
- 关键词：KOZAK序列密码子优化
- 靶向河豚毒素的高亲和性DNA适配体及其获得方法和用途
- 本发明属于河豚毒素检测技术领域，具体为靶向河豚毒素的高亲和性DNA适配体及其获得方法和用途。本发明对之前已发现的TTX适配体AI‑57（平衡解离常数为28.34 nM）进行了优化设计，获得亲和力更高的变体AI‑52，测得...
- 黄强李园园刘建平宋梦华颜志超
- 人类组织特异性DNA聚合酶POLλ2基因的克隆、表达纯化和鉴定
- 2007年
- 发现并克隆了一个肝脏特异的人类DNA聚合酶基因,是POLλ的一个剪接体,命名为POLλ2.该剪接本的cDNA长2206bp,包含一个1452bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,位于人10号染色体长臂24区,长约7.9kb,包含8个外显子和7个内含子.生物信息学分析表明,POLλ2蛋白和DNA聚合酶X家族成员高度同源,并含有这个家族特有结构域POLx,因此是一个DNA聚合酶X家族的新成员.该剪接本的核苷酸序列和相应蛋白质氨基酸序列已提交至GenBank,登录号为AY302442.亚细胞定位实验证实,POLλ2蛋白定位于细胞核;人16种组织表达谱实验表明,POLλ2在肝组织和睾丸组织中特异性高表达,在卵巢组织中低表达,而在其他组织中没有检测到表达.癌和癌旁表达实验表明,与正常肝组织和癌旁组织相比,在15个肝癌组织的样本中有80%样本的POLλ上调表达,导致POLλ2和POLλ的mRNA分子的比例异常,可能和肝癌的病理过程有关.通过筛选菌株,E.coli BL21(DE3)CONDON Plus可以高效地表达可溶性POLλ2蛋白;通过Ni-NTA resin和Superdex-75纯化了POLλ2重组蛋白.经过同位素α-32P-dCTP掺入实验,证实了POLλ2具有DNA聚合酶活性.
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- 关键词：基因克隆纯化肝癌
