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王革: 作品数：17 被引量：25H指数：3; 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划甘肃省自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性被引量：2: 2012年; 目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生化特性、质粒保有率、生长速度等的差异;取各代次菌株提取质粒DNA且分别进行双酶切及PCR鉴定、DNA测序;诱导表达各代次菌株,比较各代次菌株的重组rLF蛋白的表达水平及免疫反应性。结果各代次菌株菌落形态、生化特性、生长速度等方面与原始种子库无明显差异;在传至100代时的质粒保有率为76%;各代次菌株重组质粒电泳图谱、酶切图谱、PCR图谱未改变,未见lf基因变异;各代次菌株的总蛋白电泳图谱r、LF蛋白表达量r、LF蛋白的免疫反应性与原始种子库无明显差异。结论重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21具有较好的传代稳定性。; 李睿王革钱秋娟王秉翔

结核分枝杆菌Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4重组基因克隆及表达被引量：1: 2010年; 目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴定,构建原核重组表达质粒PET30a-Mtb8.4和PET30a-Hspx。抽提重组质粒,产物经纯化后与目的基因Hspx、Mtb8.4连接,转化及测序鉴定,构建重组目的基因质粒PET30a-Mtb8.4-Hspx(PET30a-MH)和PET30a-Hspx-Mtb8.4(PET30a-HM)载体,转化大肠埃希菌BL21,以IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果 SDS-PAGE蛋白电泳验证去标签MH和HM融合蛋白分子质量单位为28 ku,与预期值相符。结论本研究成功表达去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM,为结核亚单位疫苗免疫原性和临床前研究奠定了基础。; 吴玉敏谭继英王革刘万波胡丽娜祝秉东; 关键词：MTB8.4 HSPX 克隆

绿脓杆菌外毒素A与Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白嵌合表达质粒的构建及其免疫原性的研究被引量：4: 2005年; 构建外毒素结构域Ia基(EPA103)与Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白(HSV-2-gD)嵌合蛋白表达载体(pET-EgD),得到嵌合表达蛋白.利用外毒素结构域Ia基因表达蛋白的佐剂效应,以pET-EgD表达嵌合蛋白免疫Balb/c小鼠.结果显示:嵌合表达蛋白(pET-EgD)免疫小鼠,可在小鼠体内诱导产生抗HSV-2特异性抗体.嵌合表达蛋白(pET-EgD)具有较强的免疫原性,为开发研究Ⅱ型单纯疱疹核酸疫苗奠定了基础.; 马超黄思扬蒋琳杨福军王革辛芳; 关键词：绿脓杆菌外毒素A

从大肠杆菌中表达纯化炭疽杆菌保护性抗原: 目的：利用基因重组技术获取炭疽杆菌保护性抗原(PA)。方法：将炭疽杆菌保护性抗原编码基因pag与pET载体连接构建重组质粒，转化大肠杆菌DE3，诱导表达炭疽杆菌保护性抗原，并经亲和层析及凝胶过滤纯化此抗原。 ...; 王革尤明强李睿王秉翔; 关键词：炭疽杆菌保护性抗原基因重组生物学活性; 文献传递

重组鼠疫菌F1抗原在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析被引量：7: 2005年; 利用基因重组技术,用pET42(b+)质粒在大肠杆菌DE3中表达鼠疫菌F1抗原。经分析rF1抗原基因序列与天然F1抗原结构基因序列完全一致,电泳扫描测其表达量为25%:W estern B lot结果表明,rF1抗原可与F1特异性抗体相互作用,具有天然F1抗原的活性。用镍离子亲和层析纯化rF1抗原免疫BALB/c小鼠,在其血清中可检测到高滴度的抗F1抗体。; 王革王秉翔; 关键词：鼠疫苗基因重组技术抗原结构大肠杆菌疫菌

地高辛标记DNA探针杂交法检测Vero细胞DNA残留量的适用性验证及应用被引量：3: 2016年; 目的对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的DNA残留量。结果地高辛标记探针的标记效率为0.1 pg。验证结果显示探针与非同源DNA无杂交;最低检测限度为1 pg;探针在-20℃放置7个月后,检测灵敏度仍可达到1 pg;3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中残留DNA含量均符合《中国药典》规定质量控制标准。结论地高辛标记DNA探针杂交法特异性、灵敏度好,结果稳定,适用于人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。; 孙小慧刘晓凡赵雅静马超刘鹏冯德杰李薇魏然王革; 关键词：地高辛 DNA探针斑点杂交 VERO细胞

鼠疫菌V抗原的单抗系统建立和免疫学定量检测: 目的：制造鼠疫菌V抗原的鼠单克隆抗体，经抗体表位分析建立单抗系统，并通过此单抗系统建立免疫学检测鼠疫菌V抗原含量的方法，进行鼠疫疫苗研制中V抗原的质量控制。方法：用鼠疫菌V抗原免疫雌性BALB/c小鼠，取小鼠...; 常娅莉惠一明王秉翔焦磊胡丽娜傅林锋王革卜培英裴明玉万艳韩少波; 关键词：鼠疫耶尔森菌双抗体夹心免疫学检测; 文献传递

重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原制备工艺的建立被引量：2: 2011年; 目的建立稳定、高效的重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原工程菌的发酵与纯化工艺。方法研究LcrV工程菌pET-V/BL21(DE3)在试管和三角摇瓶中的生长和表达规律,对种子培养基、IPTG诱导时机、诱导时间及诱导浓度进行优化,并放大至30 L发酵罐培养,建立稳定的发酵工艺。收获菌体,经冻融、离心收集蛋白溶液,高压匀浆处理后,分别采用Q.Sepharose HP阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 FF(hs)疏水层析及Superdex 75 pg凝胶过滤层析三步柱层析纯化,建立稳定的纯化工艺,连续纯化3批,并按《中国药典》三部(2010版)的相关要求进行全面检定。结果经优化的条件培养及诱导表达,工程菌的收菌密度(A600值)可达34,LcrV抗原的表达量达36%,含量为1.6 g/L。发酵产物经柱层析纯化,LcrV产量高于140 mg,纯度大于95%,蛋白总回收率达8.5%以上。各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求。结论已建立了稳定的、适合规模化生产的LcrV制备工艺,为新型鼠疫组分疫苗的研制奠定了基础。; 胡丽娜常娅莉魏东万艳马维民傅林锋王革吴智远韩少波王秉翔; 关键词：大肠杆菌发酵纯化

氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原的影响因素: 2011年; 目的探讨氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原(Recombinant protective antigen,rPA)的影响因素。方法取含不同PO43-浓度的PBS和添加EDTA的PBS,分别稀释rPA后,加入氢氧化铝,放置2～8℃及(23±2)℃作用不同时间,检测A280和A260值,计算未吸附的rPA蛋白量,并比较不同溶液中氢氧化铝对rPA的吸附效果。结果氢氧化铝对rPA的吸附率随PO43-浓度的增加而降低;PBS中添加EDTA后,氢氧化铝对rPA的吸附效果明显下降;2～8℃较(23±2)℃的吸附率略有增加,但不同时间的吸附量无明显差异;在H2O中氢氧化铝对rPA的吸附效率比在PBS中高。结论稀释缓冲液和离子强度、EDTA均可影响氢氧化铝与rPA的吸附效果,但吸附温度和时间对吸附的影响不大。; 王革李睿王秉翔; 关键词：氢氧化铝炭疽抗原

炭疽杆菌保护性抗原在大肠杆菌中的表达及其纯化被引量：1: 2010年; 利用基因重组技术获取炭疽杆菌保护性抗原(PA)。将炭疽杆菌保护性抗原编码基因pag与pET载体连接构建重组质粒,转化大肠杆菌DE3株,诱导表达炭疽杆菌保护性抗原,并经亲和层析及凝胶过滤纯化此抗原。实验成功构建了表达炭疽杆菌保护性抗原的重组菌株,纯化后PA纯度达90%,且经检测纯化产物具有天然PA的生物学活性。同时表明从大肠杆菌中纯化PA较以往从炭疽杆菌中获取PA简便易行。; 王革尤明强李睿王秉翔; 关键词：纯化

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