田蓉
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：第四军医大学基础医学部细胞工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制被引量：1
- 2005年
- 目的进行治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制研究.方法用细胞计数、ELISA和FCM分别检测细胞生长、抗体生成速度和抗原结合活性;冻存细胞复苏后及体外传代3个月,检测抗体分泌稳定性和克隆阳性率;进行无菌检查、细胞核型和同工酶谱分析,了解细胞遗传稳定性、外源因子污染和细胞间交叉污染情况.结果肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速度分别为0.047～0.052/h和1.1～1.4 pg/cell·h,与靶细胞FHCC98结合的阳性率达99%,平均荧光强度在200以上.冻存细胞复苏后及体外连续传代3个月后,其特异性抗体生成速度维持在1.0 pg/cell·h以上,培养上清抗体效价仍为1:1000.不同批次的生成细胞核型均符合杂交瘤细胞特征,外源因子检查阴性,无细胞间交叉污染.结论HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速率、抗体稳定性和特异性均符合已建立的规模化放大培养的种子细胞质控标准.
- 李玲米力刘蓉汪莉徐力青冯强田蓉陈志南
- 关键词：单克隆抗体HAB18种子细胞细胞培养细胞生长
- HAb18G/CD147真核荧光蛋白的表达及鉴定
- 2006年
- 构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22—50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用。通过PCR及OverlappingPCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJM109,构建含有肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及E51的真核荧光蛋白表达载体。并经限制性酶切及序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染COS-7细胞,进行瞬时表达;荧光显微镜观察EGFP表达,通过流式细胞术检测蛋白的表达情况,明胶酶谱法鉴定其功能。成功地构建了真核荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,并经限制性酶切及序列分析证明外源基因插入正确;流式细胞术鉴定该蛋白表达正确;功能实验证实缺失片段E51不具有诱导成纤维细胞分泌MMPs的功能。结果显示HAb18G/CD147基因第22—50位氨基酸与其刺激成纤细胞分泌MMP和功能有密切关系。实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础。
- 库晓明田蓉杨向民李郁谬成功姚西英陈志南
- 关键词：HAB18G/CD147EGFP
