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长双歧杆菌N-乙酰氨基己糖1-位激酶的活性位点被引量：2: 2016年; 【目的】研究长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JCM1217的N-乙酰氨基己糖1-位激酶(Nacetylhexosamine 1-kinase,Nah K)中对催化活性有影响的位点。【方法】利用点突变试剂盒,获得Nah K的4个位点的共10种单点突变体表达菌株。诱导表达并纯化野生型和突变体酶,用DNS法和NADH偶联的微孔板分光光度法检测野生型及突变体酶的最适p H和最适Mg^(2+)浓度,并测定酶促反应动力学参数。【结果】D208A、D208N、D208E和I24A四种突变体的催化活性几乎丧失。突变体H31A、H31V、F247A和I24V的最适p H由野生型的7.5变为7.0,突变体H31A和F247A的最适Mg^(2+)浓度由野生型的5 mmol/L变为10 mmol/L。反应动力学参数测定结果表明,突变体F247Y对底物Glc NAc/Gal NAc及ATP的催化活性均高于野生型。【结论】通过定点突变,确定了对Nah K催化活性有影响的4个位点,并且获得了一个催化效率提高的突变体(F247Y),为进一步对Nah K进行分子改造奠定了一定基础。; 关婉怡白静周天惠赵宝华; 关键词：活性位点长双歧杆菌 DNS法

E型产气荚膜梭菌iota毒素的截短表达及细胞毒性鉴定被引量：1: 2020年; E型产气荚膜梭菌产生的iota(ι)毒素能够引起多种动物坏死性肠炎、肠毒血症及人的食物中毒等。目前该病在临床上尚无有效治疗措施,严重威胁牲畜及人类的健康。目前活化的ι毒素多提取自产气荚膜梭菌培养液,或将异源表达的原毒素经酶切后获得,过程繁琐,毒素产量低。本试验对ι毒素基因(ia和ib)进行截短突变,构建异源表达载体,进行截短突变体蛋白的可溶性表达;以犬肾上皮细胞(MDCK细胞)为宿主细胞进行细胞毒性试验。结果显示纯化的ι毒素截短突变体蛋白具有较强的细胞毒性作用,细胞坏死特征明显:细胞形态不规则,无明显清晰的细胞膜,胞质液泡化,细胞核肿胀占据大部分空间,核内异染色质絮状化,线粒体出现空泡结构。因此,本试验制备的ι毒素截短突变体蛋白无需额外酶切即具备生物活性,节省了时间及成本,为ι毒素致病机理的深入研究奠定了基础。; 白静史燕敏付璇赵宝华

表观遗传学与肿瘤被引量：1: 2014年; 表观遗传学是研究基因的核苷酸序列不发生改变的情况下,基因表达或蛋白表达发生可遗传的变化,但又可以通过细胞发育和增殖而稳定遗传现象的一门遗传学分支学科.表观遗传学的研究内容包括DNA甲基化、组蛋白共价修饰、mRNA编辑、染色体重塑、基因沉默等.其调控机制是:细胞内功能基因的选择性激活或灭活.表观基因相对于整个基因组本身,提供了更有序、更特定的基因信息.表观遗传的异常会导致表型的改变,表现为人类疾病,如肿瘤.因此,随着人们对表观遗传学认识的深入,表观遗传学将成为生物医学研究领域的重点.; 王艳梅马文双白静赵宝华; 关键词：表观遗传学肿瘤 DNA甲基化

Globo系列糖抗原Gb4的细胞工厂法克级合成被引量：1: 2021年; Globo系列糖抗原Gb4广泛存在于多种细胞表面,参与细胞识别等多种生理活动,对机体生命活动起着重要作用.利用细胞工厂法大量合成Globo系列糖抗原Gb4,首先构建基因工程菌株,通过添加乳糖(Lac,二糖)为底物进行发酵,直接合成Gb4(四糖),并采用单因素分析法,依次对受体底物质量浓度、糖供体的前体糖的种类和质量浓度、发酵温度以及发酵时间进行了优化,最后确定1 g/L Lac为最适受体底物,添加5 g/L半乳糖(Gal)有利于糖供体UDP-Gal的合成,Gb4的合成产量提升了14倍,25℃为最适发酵温度,补加底物后21 h为最适发酵时间.以此最适条件在摇瓶进行大量发酵合成,胞内获得纯度约96%的Gb4,1 L发酵液可得到1.145 g的Gb4.该法简便迅速,极大地减小了寡糖合成的工作量,为Gb4的大量合成及功能研究奠定了基础.; 王晓雨白静王志颖周子璇关婉怡; 关键词：单因素分析

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白静