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翁新宪: 作品数：18 被引量：127H指数：7; 供职机构：中南大学湘雅医学院肿瘤研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划美国中华医学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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鼻咽癌恶性转化基因Tx核苷酸序列分析被引量：8: 2002年; 从人类鼻咽癌细胞系CNE2基因组DNA文库中克隆一个恶性转化基因Tx转染小鼠JB6 + 细胞 ,使细胞恶性转化 ,宿主细胞具有停泊非依赖生长的特性 .已经报道的Tx中一个 3 0kb片段(Tx3 0 )的序列分析结果表明 ,Tx包含人类免疫球蛋白κ轻链完整的J区 .进一步对Tx全长进行亚克隆和测序 ,并采用生物信息学方法进行分析表明 ,Tx包含人类Igκ完整的J区、C区基因片段、还有 5个重组信号序列 ,1个核基质结合序列和 1个N segment的插入 .Tx与正常人IgκJ、C区比较只是在某些位点存在碱基的缺失、插入或置换 ,二者同源性高达 98% ,其电子定位于 2p11 2 ,这与人Igκ的染色体定位是一致的 .可以认为。; 任维黎明夏林庆翁新宪廖伟曹亚; 关键词：鼻咽癌核苷酸序列分析

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过NF-κB、AP-1促进IL-8分泌被引量：3: 2002年; 目的　探讨EB病毒LMP1分子致瘤机制 ,在已证实鼻咽癌细胞系中LMP1有效激活NF κB或AP 1的基础上 ,对LMP1是否通过NF κB或AP 1促进IL 8分泌进行探讨。方法　以稳定表达LMP1及其 3种突变体、空白载体的鼻咽癌细胞系 [HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 185 )、HNE2 LMP1(1 2 31)、HNE2 LMP1△ 187 35 1和HNE2 pSG5 ]及antisense LMP1处理的HNE2 LMP1鼻咽癌细胞系为材料 ,将IL 8报道质粒瞬时导入这些细胞系中 ,通过测定luciferase值以反映LMP1是否促进IL 8转录 ;将mutAP 1 IL 8 luc或IκBα(S32A S36A)表达质粒导入HNE2 LMP1细胞系中 ,比较其IL 8报道活性 ,以确定LMP1是否通过AP 1或NF κB诱导IL 8转录 ;利用ELISA方法测定HNE2 LMP1、HNE2 pSG5、anti sense LMP1处理的HNE2 LMP1鼻咽癌细胞系中的IL 8浓度 ,进一步从蛋白水平上确定LMP1是否促进IL 8分泌。结果　与HNE2 pSG5相比 ,在HNE2 LMP1、HNE2 LMP1△ 187 35 1和HNE2 LMP1(1 2 31)细胞系中IL 8报道活性分别升高了原来水平的 11.5、8.6和 3.4倍 ,而HNE2 LMP1(1 185 )对IL 8报道活性不影响。在HNE2 LMP1细胞系中IL 8蛋白水平提高了 17.4倍 ,而antisense LMP1则使HNE2 LMP1细胞的IL 8报道活性及蛋白水平分别下降到原来水平的 18.3%和 9.2 % ;; 王承兴顾焕华邓锡云李晓艳夏林庆易薇翁新宪曹亚; 关键词：EB病毒 IL-8分泌 NF-ΚB AP-1 鼻咽癌

EB病毒LMP1通过NF-kB介导的HSV-tk/GCV治疗EBV相关肿瘤的研究被引量：3: 2002年; 目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)通过活化NF-kB反式激活HIV-LTR进而启动自杀基困HSV-tk在EBV相关肿瘤治疗中的作用,为进一步开展肿瘤治疗提供科学的实验依据。方法:以鼻咽癌细胞为实验模型,将HSV-tk基因置于HIV-LTR调控序列之下,构建LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk/GCV系统,采用同位素方法检测tk活性来研究LMP1通过NF-kB调控HSV-tk转录的靶向性和表达特征,MTT方法检测在GCV处理下肿瘤细胞的生长状况。结果:成功构建受LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk表达质粒,发现其在GCV处理下,表达LMP1的肿瘤细胞的生长有显著的抑制。结论;携带有LMP1-HSV-tk的细胞对GCV治疗高度敏感,显示这一肿瘤治疗系统在EBV相关肿瘤中具有一定的应用前景。; 杨力芳王承兴胡智唐敏顾焕华翁新宪易薇曹亚; 关键词：EBV-LMP1 HSV-TK/GCV 肿瘤治疗鼻咽癌

外泌体形成分泌调控及其在肿瘤发生发展中的作用被引量：4: 2018年; 外泌体(exosome)是起源于细胞内体的双层膜小泡。作为细胞间重要的介质,外泌体转运脂质、蛋白质、RNA等物质,从而发挥重要的生物学功能。外泌体的形成与分泌需要经过一个多因素、多阶段参与的精细调控过程。供体细胞分泌负载内含物的外泌体进入肿瘤微环境,随后受体细胞以不同的作用方式摄取其中的内含物,引起肿瘤的侵袭转移、免疫逃逸、治疗抵抗等。近年来,外泌体已成为医学研究的热点之一。现就外泌体形成分泌调控及其在肿瘤发生发展中的作用进展予以综述。; 翁新宪周转张治宝廖朝亮杨力芳; 关键词：外泌体肿瘤微环境

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过NF-κB、AP-1促进MMP9表达被引量：34: 2002年; 目的　探讨EB病毒 (Epstein BarrVirus,EBV)LMP1是否通过NF κB和AP 1促进MMP9表达 ,为全面阐明LMP1的分子致瘤机制提供实验依据。方法　将MMP9 CAT表达质粒导入HNE2 pSG5、HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 185 )、HNE2 LMP1(1 2 31)、HNE2 LMP1Δ187 35 1鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)细胞系 ,比较各组细胞系的氯霉素乙酰转移酶 (CAT)活性 ,以确定LMP1或其不同的结构域是否上调MMP9转录 ;采用明胶Zymography法检测上述细胞产生MMP9的活性 ,以确定LMP1或其不同的结构域是否促进MMP9蛋白表达 ;借助报道基因分析法确定在NPC中野生型LMP1能否激活NF κB和AP 1的活性 ,进一步将突变了NF κB或AP 1结合位点的MMP9 CAT表达质粒导入上述细胞系 ;比较相应的CAT活性 ,以确定LMP1或其不同的结构域是否通过NF κB或AP 1上调MMP9表达。结果　与导入载体pCDNA3比较 ,HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 185 )、HNE2 LMP1(1 2 31)和HNE2 LMP1Δ187 35 1NPC细胞系CAT活性分别提高 7.2 ,1.3,3.3和 4.0倍。明胶Zymography法检测显示 ,在HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 2 31)和HNE2 LMP1Δ187 35 1细胞系中 ,均可检测到 92 0 0 0MMP9活性 ,而HNE2 pSG5、HNE2 LMP1(1 2 31)几乎均为阴性。较之母细胞 ,野生型LMP1活化NF; 王承兴邓锡云李晓艳顾焕华易薇翁新宪夏林庆曹亚; 关键词：EB病毒 LMP1 NF-ΚB AP-1 鼻咽癌

鼻咽癌中EBV LMP1激活NF-κB的实验研究被引量：9: 1999年; 目的：探讨在鼻咽癌细胞系中ＥＢ病毒潜伏膜蛋白ＬＭＰ１能否激活重要的核转录因子ＮＦ－κＢ，及ＮＦ－κＢ的活化对鼻咽癌细胞系表型的影响。方法：我们选用两种鼻咽癌细胞系即有ＬＭＰ１表达的ＣＮＥ－ＬＭＰ１和无ＬＭＰ１表达的ＨＮＥ１，用包含ＮＦ－κＢ结合位点萤虫素酶报道基因共转染的方法及软琼脂集落形成法观察两株细胞中的ＮＦ－κＢ的活性。结果：建立稳定表达包含ＮＦ－κＢ结合位点萤虫素酶报道基因的两种细胞株。在这两株细胞中的ＮＦ－κＢ活性有明显差异。结论：我们发现ＬＭＰ１在鼻咽癌细胞中激活ＮＦ－κＢ呈剂量和时间效应。进一步研究证明抑制ＮＦ－κＢ的活化可以抑制鼻咽癌细胞的恶性表型。; 潘雷顾焕华梁茱梁茱翁新宪易红曹亚; 关键词：鼻咽肿瘤核转录因子

鼻咽癌转化基因Tx中3.0kb片段序列分析: 从中国人鼻咽癌细胞株CNE2中克隆分离出的恶性转化基因Tx。其基因长度为16kb。在对其中2.8kb片段测序的基础上,对其中XhoI/EcoRI长度约3.0kb的片断(Tx3.0)进一步进行了测序,并利用生物信息学技术分...; 黎明任维廖伟翁新宪夏林庆曹亚; 文献传递

EB病毒诱导人鼻咽上皮细胞逃避老化期的生物学研究(英文)被引量：2: 2002年; Objective To observe the biological changes of primary human nasopharyngeal epithelial cells in the early stage of immortalization. Methods The morphological changes of nasopharyngeal epithelial cells were observed by phase-contrast microscopy, and the activity profile of senescence-associated β-galactosidase (SA-β-Gal) was detected by SA-β-Gal staining. The expression of p16 INK4a protein was tested by immunochemical assay, and the life span in vitro of nasopharyngeal epithelial cells was calculated as population doublings. In addition, the expression of Epstein-Barr (EB) virus latent membrane protein 1 (LMP1) was also detected by immunofluorescence staining. Results Morphologically, cells treated with EB virus and 12-o-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate (TPA) formed multi-layer foci, and their cellular life span in vitro was extended (about 155 days of culture). A low percentage of cells (about 4.8%) expressed SA-β-Gal activity at late primary culture, and did not always express p16 INK4a protein in the progression of culture. Conclusions Nasopharyngeal epithelial cells treated with EB virus in cooperation with TPA can pass through the stage of senescence and enter the early stage of immortalization. Some changes of phenotype occur in these cells. Our results provide data for further studying the mechanism of immortalization and the establishment of a human nasopharyngeal epithelial cell line.; 杨静唐发清顾焕华邓锡云翁新宪唐敏曹亚; 关键词：生物学鼻咽上皮细胞永生化

EB病毒LMP1 CTAR1、CTAR2的表达促使人鼻咽癌细胞HNE2增殖被引量：1: 2003年; 探讨EB病毒LMP1不同结构域在鼻咽癌中的致瘤作用,为阐明鼻咽癌分子发病机理,寻找治疗鼻咽癌的分子靶提供实验依据。以转染空白载体为对照,利用电穿孔转染方法,建立稳定表达LMP1不同突变体的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1(1～815)、HNE2-LMP1(1～231)、HNE2-LMP1△187～351,并以这些细胞系为材料,用MTT法检测增殖期活细胞,BrdU掺入法检测细胞增殖状况,比较各组细胞的软琼脂集落形成率和裸鼠成瘤能力,以观察LMP1不同的结构域对鼻咽癌细胞生长的影响。LMP1(1～231)和LMP1△187～351在体外明显促进HNE2细胞增殖,HNE2-LMP1(1～231)、HNE2-LMP1△187～351平均吸光度(A)比值、BrdU掺入率、软琼脂集落形成率均高于HNE2-pSG5与HNE2(P<0 01),而HNE2-LMP1(1～187)与HNE2-pSG5、HNE2相比,这些指标无明显差别。HNE2-LMP1△187～351和HNE2-LMP1(1～231)的裸鼠成瘤潜伏期、倍增时间与平均瘤重明显高于HNE2-pSG5鼻咽癌细胞系,其差异有显著的统计学意义(P<0 05)。而HNE2-LMP1(1～187)、HNE2-pSG5和HNE2鼻咽癌细胞系在潜伏期、倍增时间与平均瘤重方面两两比较,差异无显著的统计学意义(P>0 05)。EB病毒LMP1CTAR1和CTAR2对HNE2细胞生长有明显促进作用,提示EB病毒LMP1可能在鼻咽癌的发生发展中起着重要的作用。; 王承兴任维李晓艳顾焕华易薇翁新宪夏林庆邓锡云曹亚; 关键词：EB病毒鼻咽癌细胞增殖

EB病毒潜伏膜蛋白1通过Survivin介导细胞增殖和抑制细胞凋亡被引量：9: 2003年; 利用间接免疫荧光、基因转染、抗体剔除 (Ab knock out)、细胞平板集落形成、流式细胞术以及半胱氨酸天冬酰胺酶 (caspase3)活性检测等方法 ,从survivin核移位、Rb磷酸化、细胞周期演进、细胞克隆形成和细胞凋亡等方面 ,探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)调控细胞增殖和细胞凋亡双重效应的分子机制 .结果发现 ,LMP1表达介导survivin核移位 ,促进细胞Rb磷酸化增加 ,S期细胞数显著增加 ;LMP1通过survivin促进细胞克隆形成 .用Ab knock out阻断survivin核移位和survivin反义核酸抑制survivin表达时 ,Rb磷酸化水平降低 ,S期细胞减少 ,抑制LMP1介导的细胞增殖 ,活化细胞caspase 3,诱导细胞凋亡 .结果提示。; 唐发清顾焕华胡智唐敏翁新宪易薇曹亚; 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1 介导细胞凋亡

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