肖桂芳
- 作品数：21 被引量：368H指数：11
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家转基因植物研究与产业化专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其转基因烟草抗虫性初探被引量：35
- 1997年
- 从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源率分别为99．5％和98．2％。由此，构建了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的植物高效表达载体pBinSKTI。并采用农杆菌介导的叶盘法转化了烟草，获得的转基因烟草再生植株经抗虫测试表明：与对照烟草相比，具有明显的抗棉铃虫能力。
- 高越峰朱祯朱玉肖桂芳李向辉
- 关键词：抑制剂抗虫基因转基因烟草
- 利用修饰的T7 RNA聚合酶基因建立一种植物耦联表达系统被引量：2
- 2002年
- 通过基因修饰,在T7 RNA聚合酶基因的5＇端添加了SV40大T抗原的核定位信号编码序列.利用CaMV35S启动子和修饰的T7 RNA聚合酶基因构建了植物表达载体pBBT7.同时,利用T7启动子和β-葡糖醛酸酶基因（gusA）构建了另一个植物表达裁体pBTG.通过农杆菌介导法将上述两个植物表达载体共转化烟草,共转化植株表现出较强的β-葡糖醛酸酶（β-glucuronidase,GUS）活性.上述结果表明T7 RNA聚合酶-T7启动子耦联表达系统在植物中是有效的,说明已成功构建了一种植物耦联表达系统.
- 陈峰路子显常团结徐鸿林吴茜肖桂芳朱祯
- 关键词：基因修饰核定位信号T7启动子基因表达植物基因工程
- 大白菜转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因获得抗虫植株被引量：43
- 2002年
- 以大白菜 3d苗龄带柄子叶为外植体 ,经根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)导入大白菜自交系‘GP 1 1’和杂交种‘中白 4号’ ,并获得了卡那霉素抗性植株。PCR检测和Southernblot杂交证实 ,sck基因已整合进大白菜基因组中 ;豇豆胰蛋白酶抑制剂活性检测表明 ,大部分转基因植株都对牛胰蛋白酶有一定的抑制活性 ,对照未转化植株抑制活性很低。室内离体叶片饲虫和田间自然抗虫性鉴定进一步证明 ,转基因植株对菜青虫 (PierisrapaeL.)具有一定抗性。
- 杨广东朱祯李燕娥朱祝军肖桂芳魏晓丽
- 关键词：大白菜豇豆胰蛋白酶抑制剂根癌农杆菌
- 利用双T-DNA载体系统培育无选择标记转基因烟草(英文)被引量：8
- 2003年
- 建立了一种利用双T-DNA载体培育无选择标记转基因植物的方法.通过体外重组构建了双T-DNA双元载体pDLBRBbarm.载体中,选择标记nptⅡ基因和另一代表外源基因的bar基因分别位于2个独立的T-DNA.利用农杆菌介导转化烟草(Nicotiana tabacum L.),在获得的转化植株中,同时整合有nptⅡ基因和bar基因的频率为59.2%.对4个同时整合有nptⅡ和bar基因植株自交获得的T1代株系进行检测分析,发现在3个T1代株系2个T-DNA可以发生分离,其中约19.5%的转基因T1代植株中只存在bar基因而不带选择标记nptⅡ.这一结果说明双T-DNA载体系统能有效地用于培育无选择标记的转基因植物.研究还利用位于2个不同载体上的nptⅡ基因与 bar基因通过农杆菌介导共转化烟草,获得共转化植株的频率为20.0%～47.4%,低于使用双T-DNA转化的共转化频率.
- 周红艳周红艳陈松彪李旭刚肖桂芳魏晓丽
- 关键词：转基因烟草无选择标记农杆菌介导
- 降低棉花试管玻璃苗的方法被引量：5
- 1999年
- 棉花试管玻璃苗是一种呈半透明状，叶片脆弱易碎、且不具有栅栏组织，难以移栽成活的畸形苗。它在一年中的５～１０月时常发生，严重时可使一切工作前功尽弃。因此，降低或抑制玻璃苗的产生，是棉花组织培养的一大难题。本文用晋棉７号转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因的胚分化试...
- 李燕娥吴霞史高川吴家和孟晋红范小平杨广东朱祯肖桂芳
- 关键词：试管苗诱导愈伤葡萄糖含量固定剂
- 转苏云金杆菌毒蛋白基因玉米植株的获得及其抗虫性分析(英文)被引量：9
- 2002年
- 玉米 (ZeamaysL .)转化成功与否与基因型密切相关。在转化过程中 ,除少数模式品种能够形成再生频率较高且易转化的Ⅱ型愈伤组织外 ,大多数栽培品种往往只能够形成再生频率较低且不易转化的Ⅰ型愈伤组织。因此探索Ⅰ型愈伤组织的诱导及其转化条件 ,提高转化效率 ,对直接改良玉米优良自交系具有重要意义。应用基因枪转化技术将苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)cry1Ac3基因导入玉米优良自交系E2 8及 34 0的Ⅰ型胚性愈伤组织中 ,经过膦丝菌素 (PPT)或潮霉素 (HygB)筛选 ,获得了再生植株。经PCR检测、Southernblot分析及Bt毒蛋白ELISA检测证实 ,外源基因已整合到玉米基因组中 ,并已获得表达。抗虫性分析结果表明 ,部分转基因玉米植株对玉米螟虫有较强的抗性。还比较了PPT和HygB两种筛选剂的筛选效果 ,表明PPT筛选的抗性愈伤组织的再生频率要高于HygB筛选的再生频率。
- 李慧芬李旭刚刘翔常团结肖桂芳朱祯
- 关键词：玉米植株再生抗虫基因
- 基因枪法转化小麦及转基因植株的获得被引量：33
- 2000年
- 应用基因枪法转化了小麦幼胚、成熟胚及胚性愈伤组织,成功地将携带有豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因以及选择标记潮霉素磷酸转移酶(Hpt)基因的质粒pBCAHpt导入小麦胚性愈伤组织。通过在选择培养基上严格筛选后获得潮霉素抗性(hygr)愈伤组织,并进一步分化培养获得完整的小麦再生植株。PCR检测结果显示抗性愈伤组织和再生植株细胞内存在有目的基因序列。
- 于晓红朱祯徐鸿林朱玉吴茜高越峰付志明肖桂芳安利佳李向辉
- 关键词：基因枪法转基因植株
- 水稻cDNA文库的构建及巯基蛋白酶抑制剂cDNA的分离被引量：23
- 1996年
- 取开花后２周左右的水稻未成熟种子提取总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，进而反转录合成ｃＤＮＡ并定向插入λｇｔ２２Ａ克隆载体，经体外包装建成水稻未成熟种子的表达型ＣＤＮＡ文库，经测定库容量达１．５×１０＾６Ｐｆｕ，进一步人工合成水稻巯基蛋白抑制剂（Ｏｒｙｚａｃｙｓｔａｔｉｎ）编码基因５－端保守的２１Ｎｔ的寡核苷酸经末端标记作为探针，从２．１×１０＾４Ｐｆｕ中筛选出９个阳性克隆。
- 周兆斓朱祯刘春明张海涛肖桂芳李向辉
- 关键词：水稻CDNA文库抑制剂CDNA
- 核基质结合区在转基因烟草中对转基因表达的影响被引量：15
- 2001年
- 为研究核基质结合区 (matrixattachmentregions,MARs)在转基因植物中对外源转基因 (transgene)表达的影响 ,将来源豌豆 (PisumsativumL .)的MARs序列构建在报告基因 β_葡糖醛酸酶 (β_glucuronidase ,GUS)基因 (uidA)的两侧形成植物表达载体。将此载体与不包含MARs序列的植物表达载体经根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导转化烟草 (NicotianatabacumL .)。GUS活性检测表明 ,MARs可以提高外源uidA基因的表达水平。和不包含MARs的转化植株相比 ,MARs序列的存在可以使uidA基因的平均表达水平提高 2倍 ,最高的可达
- 李旭刚路子显陈蕾肖桂芳朱祯
- 关键词：转基因基因表达烟草
- 陆地棉栽培品种新陆早1号转基因抗虫植株的获得被引量：26
- 1998年
- 通过根农杆菌介导法成功地将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂（ＣｐＴＩ）基因导入新疆陆地棉栽培品种新陆早１号。棉花幼苗下胚轴经根农杆菌共培养、抗性愈伤组织筛选和胚性愈伤的诱导等阶段获得了胚状体；经ＥＬＩＳＡ检测选择Ｎｐｔ－Ⅱ阳性的克隆进行分化培养和植株再生；经ＥＬＩＳＡ再度检测，选择Ｎｐｔ－Ⅱ阳性的再生植株进一步培养。当生长至５—６片真叶时，将再生植株直接移栽到温室或进行嫁接。通过ＰＣＲ鉴定和ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测证明，修饰的ＣｐＴＩ基因已存在于再生植株的基因组内。抗虫测试结果表明，转化棉株对棉铃虫具有较强的抗性。
- 王伟朱祯邓朝阳高越峰徐鸿林肖桂芳郭仲琛李向辉
- 关键词：抗虫基因基因修饰陆地棉
