胡英芳
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 突变型HIF-1α基因对人骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因对体外诱导环境人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)分化成心肌样细胞(cardiomyocyte-like)过程中的影响。方法重组腺病毒Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的hMSCs,诱导培养后第4周,提取细胞浆蛋白,一步法酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量;Western blot测定HIF-1α及VEGF蛋白表达水平。结果5-aza诱导hMSCs第4周cTnI值:Ad-HIF-1αnature(0.426±0.001)、Ad-HIF-1α564(0.424±0.002)、Ad-HIF-1α564/402(0.428±0.005)、Ad-HIF-1α564/803(0.441±0.003)、空白组(0.411±0.010)、Ad-LacZ(0.410±0.016),各实验组有显著性差异(P<0.05);Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达高于Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402三组(P<0.05)。Western blot结果显示Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803四组HIF-1α及VEGF蛋白表达水平均较Ad-LacZ组高,有显著性差异(P=0.000),但Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803与Ad-HIF-1αnature相比,各组间两种蛋白表达差异均无显著性(P>0.05)。结论野生型HIF-1α基因及突变型能促进5-aza诱导的hMSCs向心肌样细胞转化,为HIF-1α及hMSCs在心肌再生中的联合应用奠定了实验基础。
- 裴静娴刘城童锴胡英芳王月刚郭寿贵吴平生
- 关键词：低氧诱导因子1Α5-氮胞苷心肌样细胞
- 识别心尖球形综合征被引量：1
- 2007年
- 心尖球形综合征（apical ballooning syndrome）可能是一种急性扩张性心肌病，特点为突然发生类似心绞痛样的胸痛；心电图表现有典型的ST段抬高、多导联T波倒置和异常的QS波；超声心电图或左心室造影见前壁下部和心尖部有非连续性室壁运动异常；有限的心肌酶释放。其临床表现类似急性心肌梗死。但多发生于冠状动脉造影没有发现狭窄的明显血流动力学证据的病人。这些病例虽然有明显的心室收缩功能损害。但有突然起病后快速好转的特点。而且以女性居多。
- 胡英芳吴平生
- 关键词：心尖球形综合征扩张性心肌病急性心肌梗死应激
- 携EGFP的人低氧诱导因子-1α真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2007年
- 目的构建携EGFP的人低氧诱导因子(HIF-1α)真核表达载体,为研究人HIF-1α基因对冠心病的血管新生作用奠定基础。方法采用分子克隆技术,KpnⅠ、XbaⅠ双酶切pcDNA3.1/V5-HisA-HIF-1α获得HIF-1αcDNA,克隆到质粒pcDNA3.1(+),得到质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α,以KpnⅠ,ApaⅠ双酶切质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α获得HIF-1αcDNA,克隆到质粒pEGFP-c1得到pEGFP-HIF-1α-c1质粒。脂质体法转染HEK293细胞,用荧光显微镜和Western blotting检测EGFP和HIF-1α在HEK293细胞的表达。均显示融合蛋白在细胞中表达。结果经酶切鉴定及PCR证实重组pEGFP-HIF-1α-c1质粒构建成功,荧光显微镜和Western blotting显示EGFP和HIF-1α融合蛋白在HEK293细胞中表达。结论成功构建重组真核表达载体pEGFP-HIF-1α-c1并在HEK293细胞表达,为冠心病的HIF-1基因治疗研究奠定更直观的基础。
- 谢宜军吴平生王月刚胡英芳童锴
- 关键词：低氧诱导因子-1Α绿色荧光蛋白真核表达载体基因治疗
- 人3突变型低氧诱导因子1α真核表达载体和腺病毒表达载体的构建及鉴定被引量：9
- 2008年
- 目的为了深入研究人低氧诱导因子1α基因对冠心病的血管新生作用,构建人3突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)。方法双酶切pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564、pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803,凝胶回收前者酶切片段中大小为300bp的小片段及后者酶切片段中大小为6300bp的大片段,并将两者连接,重组成3突变型穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803,并进行酶切和PCR鉴定。鉴定正确后,采用分子克隆技术,以PI-SceI和I-CeuI双酶切重组3突变型穿梭载体,获得含有3突变型HIF-1α(pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)的表达盒,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架载体Adeno-XTM Viral DNA连接,重组成3突变型腺病毒载体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803),再进行酶切及测序鉴定。结果经酶切鉴定及基因测序证实重组3突变型真核表达载体和腺病毒表达载体质粒构建成功。结论成功构建重组人3突变型低氧诱导因子1α真核表达载体(pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)和人3突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体(pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564-Ala803)。
- 赖艳娴刘城王月刚谢宜军童锴胡英芳韦莉莉吴平生
- 关键词：低氧诱导因子-1Α血管新生
- 重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α调节细胞周期的分子机制被引量：4
- 2008年
- 背景:目前研究显示低氧诱导因子1α可诱导细胞周期停滞,但其机制尚不清楚。目的:研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)调节细胞周期的分子机制。设计、时间及地点:对照实验,于2007-03/12在南方医科大学中医实验中心完成。材料:人结肠腺癌细胞株LoVo细胞由南方医院消化内科实验室提供;重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ载体为自行构建。方法:将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ在HEK293A细胞中扩增,测定病毒滴度,然后在常氧下以感染复数10,20,30,40,50,60,70,80,90,100感染LoVo细胞。主要观察指标:X-gal染色检测重组腺病毒对LoVo细胞的感染效率;荧光定量PCR检测不同时间点低氧诱导因子1α与p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:①重组腺病毒扩增后能获得较高的滴度,在LoVo细胞中具有很高的感染效率,感染效率与感染复数成量效关系,当感染复数为60时,感染效率为90%以上。②随低氧诱导因子1α表达的增高,p21WAF1/CIP1的表达也相应增高,两者存在正相关(r=0.945,P<0.05)。③与对照病毒相比,重组腺病毒感染后LoVo细胞增殖轻度受抑;细胞周期示G1期细胞明显增加,S期的细胞显著减少(P<0.05)。结论:①重组腺病毒载体介导的人HIF-1α-Ala564-Ala803基因可有效地转染LoVo细胞并成一定的量效关系。②低氧诱导因子1α在细胞周期的调节中发挥重要的作用,可能通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞于G1期。
- 韦莉莉王月刚陈娓唐其东赖艳娴胡英芳吴平生
- 关键词：腺病毒HIF-1ΑP21WAF1/CIP1
- β肾上腺素能受体阻滞剂在妊娠和哺乳人群中的应用被引量：1
- 2011年
- 高血压是妊娠期最常见的疾病之一。人群研究表明超过5％的孕妇患有慢性高血压。美国妊娠期高血压的发病率（包括先兆子痫和子痫）约为12％-22％，约17．8％的孕妇死于该疾病。在发展中国家三级医院中死亡的孕妇近1／4是死于高血压和生殖系统引起的脓毒血症。
- 吴平生胡英芳
- 关键词：妊娠期高血压Β肾上腺素能受体阻滞剂慢性高血压哺乳先兆子痫
- 人低氧诱导因子1α重组腺病毒载体及其应用
- 本发明涉及突变型低氧诱导因子1α，其编码核酸，含有低氧诱导因子1α野生型编码核酸的载体，特别是重组腺病毒载体，以及含有它们的药物组合物。本发明的突变蛋白质、核酸、载体和药物组合物可用于治疗缺血性疾病例如冠心病、外周动脉缺...
- 吴平生王月刚刘城陈娓傅锐斌郭寿贵谢宜军童铠胡英芳赖艳娴
- 文献传递
- 构建双突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的实验被引量：4
- 2007年
- 目的:前期实验已成功构建无突变及564位是单突变腺病毒载体。在此基础上构建人双突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体,为进一步研究低氧诱导因子1α基因及其突变体的临床应用奠定基础。方法:实验于2005-12/2006-12在南方医院心内科重点实验室完成。①实验材料:限制性内切酶PacI(NEB),PI-SceI、I-CeuI(Clontech);IPTG、X-Gal(Takara),转染试剂Lipofectamine2000(Invitrogen),凝胶回收试剂盒(Omega);DMEM(Omega);小牛血清(PAA);北京天为时代公司病毒基因组提取试剂盒;HIF-1α单克隆抗体(Chemicon International公司);羊抗鼠辣根过氧化物酶标记二抗(北京鼎国生物公司)。质粒、菌珠、细胞系等:Adeno-XTM-Adenoviral Expression Systems(BD.CLONTECH):包括有pShuttle2、pShuttle2-lacZ、Adeno-XTMViralDNA等;重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803及pShuttle2-lacZ(本室已构建成功);大肠杆菌DH5α(本室保存);HEK293A细胞(中科院上海细胞所)。②实验方法:采用分子克隆技术,以PI-SceI和I-CeuI双酶切重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803,然后切下含有低氧诱导因子1αcDNA表达的盒片段,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-XViralDNA连接,重组成pAdeno-HIF-1α腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,在HEK293A细胞中包装成为重组腺病毒Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803。③实验评估:进行PCR鉴定及滴度测定。用重组腺病毒转染293A,采用Westernblot鉴定低氧诱导因子1α蛋白表达。结果:提取重组腺病毒质粒pAdeno-HIF-1α-Ala564-Ala803以引物A、B和引物1、2、3、4进行PCR鉴定,分别扩增出287,460,214bp的3种引物片段,与预期一致,经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功。pAdeno-lacZ转染293A细胞后X-Gal原位染色,显示约有近20%左右细胞染成蓝色,病毒滴度为6.8×107pfu/mL。Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803转染293A后稳定表达低氧诱导因子1α蛋白。结论:成功构建了重组腺病毒�
- 胡英芳王月刚谢宜军赖文岩赖艳娴吴平生
- 关键词：低氧诱导因子冠状动脉粥样硬化性心脏病基因治疗腺病毒载体
- 重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α对细胞凋亡调节机制的研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)对细胞凋亡的调节机制。方法将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ感染常氧下LoVo细胞,荧光定量PCR检测不同时间点HIF-1α,p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平,Westernblot检测HIF-1α,p21WAF1/CIP1的蛋白表达水平,及Hoechst染色检测loVo细胞的凋亡率。结果Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803感染LoVo细胞后随着HIF-1αmRNA和蛋白表达水平的增高,p21WAF1/CIP1的mRNA和蛋白表达水平也相应增高,Hoechst染色示Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803组细胞的凋亡率(16.2%)明显高于对照组(5.5%)(P=0.00)。结论HIF-1α可通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞,促进细胞凋亡。
- 韦莉莉吴平生王月刚胡英芳谢宜军
- 关键词：腺病毒低氧诱导因子1Α细胞凋亡P21WAF1/CIP1
- 识别心尖球形综合征
- 心尖球形综合征(Apical Ballooning Syndrome)可能是一种急性扩张性心肌病,具有如下特点:突然发生类似心绞痛样的胸痛;心电图表现有典型的ST段抬高、多导联T波倒置和异常的QS波;超声心电图或左室造影...
- 吴平生胡英芳
- 关键词：心尖球形综合征扩张性心肌病心电图ST段抬高超声心电图病理生理
- 文献传递
