袁辰刚
- 作品数：14 被引量：71H指数：4
- 供职机构：上海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：上海出入境检验检疫局科研基金上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学农业科学更多>>
- 进出口化妆品的卫生状况及微生物种群分析被引量：14
- 2013年
- 对2009～2011年上海口岸进出境化妆品的卫生状况进行调查,研究化妆品中微生物的种群及其生化共性。采用《化妆品卫生规范》(2007版)及ISO 18415:2007(E)《化妆品-微生物学-指定菌和非指定菌检测》中规定的方法进行检测,结果发现,在31 460份样品中,菌落数含量≥10CFU/g(mL)的样品有68份,检出率为0.22%。其中超过限量标准范围的样品39批,不合格率为0.12%。进出口化妆品中的检出率最高的细菌为需氧芽孢杆菌,占42.4%,其次为假单胞菌属和葡萄球菌属细菌,未检出指定的致病微生物。生化聚类分析显示低营养要求和防腐剂耐受的细菌易在化妆品中定殖并影响产品质量。
- 韩伟谢小珏袁辰刚王震宇顾鸣
- 关键词：化妆品微生物污染
- 一种用于食源性空肠弯曲菌阻抗法检测的培养基及其应用被引量：4
- 2007年
- 目的:利用空肠弯曲菌生长时对培养基中添加物质氧化还原电位的改变,建立空肠弯曲菌阻抗检测法。方法:利用电阻抗法检测食品中空肠弯曲菌方法,通过对空肠弯曲菌选择性增菌培养基布氏肉汤的改进,加入硫酸亚铁、丙酮酸、偏亚硫酸钠等还原剂降低培养基中氧化还原电势Eh,及多种抗生素,TMP为抗菌增效剂,多粘菌素B对革兰阴性菌有效,万古霉素对革兰阳性菌抗菌效果较强。检测时在培养基表面覆盖石蜡油以获得更好的微需氧条件,连续检测空肠弯曲菌代谢所引起培养基的电阻抗变化值,通过培养基电阻抗变化判定空肠弯曲菌的存在。结果:经与常规培养法进行比较,阻抗法可最低检出添加量为102/m l的阳性样品,检测结果与常规培养法一致性较高,对于阴性结果能在48 h内出具结果,大大提高了检测速度。结论:空肠弯曲菌阻抗检测法相比于传统的培养法,能够有效缩短检测时间,提高检测效率。
- 杨捷琳袁辰刚顾鸣韩伟金伟清
- 关键词：空肠弯曲菌
- 微孔板式微生物法快速测定婴儿奶粉中维生素B_(12)的研究被引量：21
- 2015年
- 试验旨在比较研究微孔板式微生物法与国家标准方法GB 5413.14—2010的检测效果,并评价微孔板式微生物法检测试剂盒检测维生素B12的检测性能。将微孔板式微生物法与国家标准方法GB 5413.14—2010分别进行模拟样品及自然样品的检测试验,比较分析检测结果。对微孔板式微生物法进行评价试验,并通过耐变性试验、批间变异试验及比对试验,分析微孔板式微生物法的检测性能。微孔板式微生物法与国家标准方法GB 5413.14—2010的检测效果基本一致。微孔板式微生物法具有良好的检测性能。
- 王赢袁辰刚谢小珏顾鸣韩伟
- 关键词：维生素B12微生物法
- 进口乳酸菌制品中乳酸菌的检测鉴定与分析
- 2015年
- 旨在为乳酸菌制品就乳酸菌质量指标提供更可靠的评价及建立更完善的检测方案。采用国家标准4789.35—2010的检测方法对140批进口乳酸菌制品中乳酸菌含量进行检测,并且对这140批乳酸菌制品中的菌种进行了PCR检测鉴定,根据检测结果,判断该制品的质量是否可靠。这140批乳酸菌制品中乳酸菌含量均达到我国国家标准的要求,所含乳酸菌菌种也与产品标签所示相符。就乳酸菌含量及所含乳酸菌菌种范围而言,这140批进口乳酸菌制品的产品质量较为可靠,建立的检测方案也切实可行。
- 王赢袁辰刚谢小珏顾鸣韩伟
- 关键词：乳酸菌PCR
- 阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因克隆、表达及活性研究被引量：10
- 2008年
- 目的:利用pET质粒原核表达体系克隆、表达阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,表达产物进行Ni-NTA柱纯化,利用α-葡萄糖苷酶分解4-硝基苯基-α-D-呋喃型葡萄糖的特性进行表达纯化合的蛋白活性鉴定,为进一步制备阪崎肠杆菌检测用单克隆抗体奠定了基础。方法:从阪崎肠杆菌ATCC29544标准菌株中克隆获得阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,连接pET22b(+)表达载体后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用不同浓度的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达外源基因,分别检测不同诱导时间、不同浓度IPTG作用下表达产物,筛选高表达菌株。表达菌株大量培养后,超声波及蛋白酶K作用破菌,Ni-NTA亲和柱纯化目的蛋白,纯化产物进行酶活性的测定。结果:克隆获得的α-葡萄糖苷酶基因与NCBI收录的基因序列属等位基因,核苷酸位点有多处差异,氨基酸序列也有不同。构建表达载体并诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,目标蛋白相对分子质量约为65kD,与理论值相符。目标蛋白量约占菌体总蛋白量的18%。同时,由纯化结果可以看出,以500mmol/L咪唑洗脱时的纯化效果最理想,蛋白纯度可达90%以上。对表达产物进行过酶活性初步检测证明,重组的阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶能够分解4-硝基苯基-α-D-呋喃型葡萄糖,产生蓝绿色。结论:本研究中克隆获得了阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,通过构建pET22b(+)-Glu表达质粒转化大肠杆菌可获得基因重组的高表达菌株,表达产物具有较好的酶活性,纯化后纯度可达90%以上。
- 杨捷琳孟逊黄应峰袁辰刚朱崇日
- 关键词：阪崎肠杆菌Α-葡萄糖苷酶克隆原核表达
- 深度测序技术检测益生菌产品菌株组成及16SrDNA序列被引量：3
- 2013年
- 目的:探查益生菌制品的标签标示与产品中实际检测到的菌株比较及不同产品中菌株的异同性。方法:以市场上购买的进口、出口酸乳制品作为研究对象,设计可区别24种产品的样品标签序列(Barcode),通过PCR及Illumina平台深度测序分析,获得了酸乳制品中所含益生菌种类及序列等详细信息,根据Barcode序列信息对其中所含的24个混合样本进行区分,然后利用16S RDP的16S数据库,对测序的Reads进行比对。结果:24种产品中标签标示与样品中实际检测到的菌株完全一致的仅有两种,在24种酸乳制品中,以嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌/德式乳杆菌为主要发酵菌株,双歧杆菌作为添加的益生菌基本在所有样品中存在,但含量较低,另一方面,不同产品中同一菌株的16S rDNA序列相似度较高,仅有两种菌株的1～2个碱基存在差异。结论:深度测序是一种可快速有效对食品中微生物群体精确筛查的技术,能够精确深入了解食品中微生物群落。使用溶方法检测目前市场上的酸乳制品,可发现使用的发酵菌种多来自商业化购买的菌剂,同质化程度较高,而作为后添加的双歧杆菌由于其生长条件的苛刻,实际活菌数量较低。
- 杨捷琳袁辰刚窦同海丁小磊潘良文
- 关键词：乳酸菌酸乳制品RDNA
- 克诺罗杆菌检测用单克隆抗体的制备及功效评价被引量：2
- 2014年
- 目的:选择克诺罗杆菌标准菌株中的多株代表菌株作为抗原,采用多抗原组合免疫的方法,筛选制备抗克诺罗杆菌属(Cronobacter spp.)检测用单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并对获得的抗体进行各项指标评价,为进一步建立克诺罗杆菌免疫学快速检测方法创造条件。方法:采用冻融裂解、超声破碎、全颗粒三种方法制备抗原,以克诺罗杆菌标准菌株及分离菌株20株,9株非克诺罗杆菌进行筛选。筛选获得的抗体鉴定特异性,进行Ig亚类分型,测定效价及相对亲和力常数。结果:获得6株针对克诺罗杆菌的杂交瘤细胞株,腹水效价均在1∶107以上;相对亲和常数均大于1.0×1010L/mol。采用"鸡尾酒法"将多种抗体应用到胶体金试纸条制备上,可获得检测灵敏度为105CFU/mL,特异性较好的试纸条。结论:成功制备了针对克诺罗杆菌的多株单克隆抗体,抗体特异性检测表明,所制备的6株单克隆抗体针对克诺罗杆菌不同的亚种或亚型。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)和胶体金试纸条检测阪崎肠杆菌的方法。为进一步开发阪崎肠杆菌的免疫检测试纸条,建立快速的检测方法创造条件。
- 袁辰刚杨海荣杨捷琳吴杨陈颖潘良文何宇平
- 关键词：单克隆抗体
- 食品中乳酸菌快速检测方法的比较研究被引量：1
- 2014年
- 试验旨在比较研究3M测试片法、Tempo检测法与国家标准方法GB 4789.35—2010的检测效果,并评价3M测试片法检测乳酸菌的检测性能。将3M测试片法、Tempo检测法与国家标准方法GB 4789.35—2010分别进行模拟样品及自然样品的检测试验,比较分析检测结果。对3M测试片法进行评价试验,并通过6家实验室的协同试验,分析3M测试片法的检测性能。结果表明,与国家标准方法GB 4789.35—2010相比,Tempo检测法快速但检测结果存在一定误差,3M测试片法检测结果与国家标准方法GB 4789.35—2010基本一致,表现出3M测试片法具有良好的检测性能。
- 王赢韩伟袁辰刚顾鸣郑晶
- 关键词：乳酸菌
- 含内标的多重实时PCR法同时检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌被引量：1
- 2019年
- 目的建立含内标的多重实时荧光PCR法同时检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌。方法针对空肠弯曲菌特有hipO基因和结肠弯曲菌特有ceuE基因设计引物探针,设计并优化内标DNA添加量。测试了方法的特异性、灵敏度以及在鸡肉中的检出限。结果内标的最适添加量为10~4copies/PCR。所建立方法对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的灵敏度分别达到4.7copies/PCR和5.23copies/PCR;对115株空肠弯曲菌、49株结肠弯曲菌和42株非目标菌株在3种不同类型的实时荧光PCR仪上的特异性均达到100%;对鸡肉中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检出限达到10CFU/25g,与传统检测方法一致。采用所建立的方法对50份市售生鲜鸡肉进行检测发现,空肠弯曲菌阳性率为12%(6/50),结肠弯曲菌阳性率为4%(2/50);传统国标检测方法除了1份空肠弯曲菌阳性样品未得到分离确认,其余PCR阳性样品均在平板上分离确认。结论该方法特异性强、灵敏度高、开放性好、含有内标可防止"假阴性",可应用于食品中2种重要致病性弯曲菌的快速同步检测。
- 申进玲赵丽娜蒋原韩伟袁辰刚
- 关键词：弯曲菌
- 沙门氏菌快速测试片在食品检测中的初步应用研究被引量：2
- 2015年
- 目的应用3M沙门氏菌SALX测试片法检测食品中的沙门氏菌。方法对67批自然样品,以及使用3个沙门氏菌标准菌株进行人工污染的20批样品,同时采用3M沙门氏菌SALX测试片法与国家标准方法GB 4789.4-2010进行检测并比较,评价3M SALX沙门氏菌测试片法检测沙门氏菌的检测性能。结果 3M沙门氏菌SALX测试片法与国标法符合率达95.5%,各有1例假阳性和假阴性。结论 3M沙门氏菌SALX测试片法操作相对简便,稳定性好,与国标法有较高的符合率,作为一种新的沙门氏菌检测方法,仍需进一步积累检测数据。
- 袁辰刚韩伟谢小珏顾鸣
- 关键词：沙门氏菌
