邹兴启
- 作品数：94 被引量：183H指数：8
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒进行鉴别诊断的基因芯片以及检测方法
- 本发明涉及一种探针组合物，其是用于对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒进行鉴别诊断的探针组合物；还涉及相应的基因芯片和试剂盒。
- 张乾义夏应菊王琴赵启祖徐璐邹兴启万建青郎洪武李翠朱元源徐嫄王兆
- 猪瘟病毒抗体ELISA检测国家级能力验证结果与分析被引量：2
- 2020年
- 猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心,猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室(以下简称:参考实验室)承担了国家认证认可监督管理委员会(以下简称“认监委”)组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”(CNCA-19-A01),全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品,并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样,由其采用ELISA方法对各盲样进行定性判断,并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测1次,若补测结果仍为“不满意”,则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次能力验证猪瘟病毒抗体检测的实验室共有103家,初测满意率为92.23%,初测和补测的总体满意率为100%。此次能力验证结果表明,参加此次能力比对试验的猪瘟检测机构均能够提供正确的检测结果,可以满足猪瘟病毒抗体监测的需求。通过本次能力验证项目查找出了存在的问题,参试单位可以及时纠正错误,进一步提升猪瘟抗体的检测能力。
- 徐璐夏应菊张乾义张雯雯王震李翠邹兴启朱元源徐嫄王兆赵启祖王琴
- 关键词：猪瘟免疫抗体ELISA
- 猪瘟病毒C株表位突变毒株的构建及拯救
- 2024年
- 本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细胞连续传代完成病毒的拯救和增殖。结果显示,经特异性限制内切酶酶切反应验证,感染性克隆构建成功。经RT-PCR、过氧化物酶单层细胞试验检测,表明病毒成功拯救。病毒细胞传代至17代,检测到病毒,表明病毒可以稳定传代。综上,本研究成功构建了C株WH303突变感染性克隆MC和MC-flag,并成功拯救MC株,得到可以稳定传代的病毒株。
- 刘元杰徐璐朱元源徐嫄张乾义李翠李明夏应菊王琴刘业兵赵启祖邹兴启
- 关键词：猪瘟病毒C株感染性克隆
- 猪瘟病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR鉴别方法的建立与应用被引量：24
- 2009年
- 【目的】建立一种快速、敏感、特异地检测猪瘟病毒野毒的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,为临床鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒提供了准确可靠的工具。【方法】在猪瘟病毒基因组5′端非编码保守区设计一对猪瘟病毒通用引物和一条特异性MGB探针,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件,进行特异性、灵敏度和临床样本符合检验。【结果】该方法在100～10-7范围内线性相关系数为0.998,检测极限达5.3×10-2pg病毒核酸;对24个质控样本检测结果显示,该方法能检测除猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)以外的猪瘟流野毒株,其它猪相关致病病原检测阴性;对122份疑似猪瘟样本检测的结果与本实验室建立的RT-nPCR方法的符合率为94.3%(115/122),阳性和阴性符合率分别为86.4%(38/44)和98.7%(77/78),Kappa值为0.87>0.75【。结论】建立的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法能鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒,且特异性好、灵敏度高、与笔者先前建立的RT-nPCR方法对临床样本的检测结果具有高度的一致性。
- 刘俊王琴范学政徐璐赵启祖黄伟汤波沙莎周远成陈蕾邹兴启
- 关键词：猪瘟荧光定量PCR兔化弱毒疫苗
- 猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR检测试剂盒
- 本发明涉及猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR检测试剂盒。利用猪瘟兔化弱毒疫苗株（HCLV株）的基因序列，设计了特异性的HCLV荧光探针和引物。经过对反应条件的优化，研发了猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR检测试剂盒。...
- 王琴徐璐赵启祖范学政邹兴启朱元源陈锴
- 文献传递
- 一种抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其应用
- 本发明涉及一种抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其应用。本发明筛选得到了一株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白的杂交瘤细胞株，该细胞株所分泌的单克隆抗体CSFV‑1C8与CSFV的E2蛋白能够发生特异性反应，而与牛病毒性腹泻/...
- 王琴徐璐张乾义赵启祖范学政邹兴启朱元源李翠
- 文献传递
- 猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化
- 2019年
- 采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件。将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting 鉴定E^rns 蛋白的反应性,并采用间接ELISA 方法对其应用进行了初步探索。结果显示,获得了重组杆状病毒rBac-E^rns,经Western Blotting 和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和E^rns 单抗发生特异性反应。纯化后的E^rns 蛋白纯度较好,浓度为0. 2 mg/ mL,经Western Blotting 方法鉴定证明,纯化后的蛋白与E^rns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA 方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清。表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒E^rns蛋白,纯化后的E^rns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于E^rns 蛋白的结构和生物学功能研究。
- 牛康徐璐张乾义夏应菊朱元源邹兴启李翠赵启祖王琴
- 关键词：猪瘟病毒杆状病毒系统间接ELISA
- 口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量测定方法的比较被引量：3
- 2013年
- 口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量的测定，可以反映出疫苗生产工艺的优劣以及疫苗质量。采用凯氏定氮法、改良Lowry法和考马斯亮蓝法三种较常见的蛋白质含量测定方法，对全国六个不同口蹄疫灭活疫苗生厂家共计15批疫苗的总蛋白质含量进行测定，并对测定结果进行比较，同时采用SDS—PAGE对样品中蛋白质含量进行定性，验证以上三种方法测定结果。结果表明，这些疫苗的总蛋白质含量差异比较大，1mL水相样中蛋白质含量在50—2000μg范围内。三种检测方法比较表明，改良Lowry法能较真实的反映口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量；与凯氏定氮法相比，此方法操作简单，工作效率高，而且低耗。
- 马丽邹兴启朱元源史兰广赵启祖
- 关键词：口蹄疫灭活疫苗凯氏定氮法
- 猪瘟病毒中等致病力毒株在体内的动态分布被引量：1
- 2018年
- 【目的】目前我国猪瘟的感染类型主要是亚急性感染及慢性感染,研究猪瘟亚急性感染后体内病毒RNA和蛋白的分布情况,有助于阐述亚急性病程猪瘟病毒的复制分布规律,为猪瘟的早期诊断和预防奠定重要基础。【方法】成功以中等致病力毒株(HeBHH1/95)构建了亚急性猪瘟感染动物模型,分别采集感染后第1、3、6、10、13、20、24、28天感染猪的十二指肠、脾脏、肾脏、肺脏、胰、回盲瓣6种组织器官并进行连续切片。应用建立的猪瘟病毒可视化原位杂交技术(ViewRNA ISH)研究感染组织中病毒RNA动态分布,同时采用免疫组化(IHC)、H.E染色分别检测感染组织中蛋白的分布情况及其组织损伤位置,从而在病毒核酸和蛋白水平系统性的观察病毒的分布情况。【结果】采用Mittelholzer方法进行临床计分发现感染后6—10 d感染猪猪瘟临床症状记分迅速增加,11—26 d感染猪临床记分一直维持在15分左右,直到28 d临床记分达到最高值20分。感染后8—10 d感染猪体温呈上升趋势;13—24 d感染猪体温呈现稽留热,持续在40℃左右;此后体温开始回落,至濒死前体温回落至39.5℃左右。应用CSFV ViewRNA ISH感染后第1天在十二指肠绒毛杯状细胞及胰腺的腺泡、回盲瓣的固有层、肾脏的肾小管等这些具有分泌功能的结构组织周围检测到病毒RNA阳性信号;感染后第3天在肺脏的细支气管和脾脏的椭圆体周围检测到病毒RNA阳性信号;第13天阳性信号富集显著,至第28天病毒RNA广泛分布在脾脏动脉周围淋巴鞘及胰腺腺泡和肾小管等组织周围。采用IHC和H.E染色法在连续切片的相似视野下验证ViewRNA ISH检测结果,发现感染后第1天十二指肠、胰腺、肾脏亦可检测到病毒蛋白阳性信号和相应组织的病理变化,但回盲瓣在第3天检测到病毒蛋白阳性信号和组织的病理变化,在之后的病程中各组织中病毒RNA、蛋白定位情况�
- 孙骏翔张乾义徐和敏王团结徐璐邹兴启朱元源李翠夏应菊徐嫄陈锴张玉杰赵启祖王琴
- 关键词：猪瘟病毒RNA
- 猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救被引量：10
- 2011年
- 【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50.mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒。【结论】成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒。
- 邹兴启赵启祖范运峰朱元源王琴徐璐范学政宁宜宝
- 关键词：猪瘟病毒C株传代
