阮雄中
- 作品数：58 被引量：112H指数：6
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD36基因缺失改善高脂饮食诱导的糖代谢异常并促进肝脏脂质积聚被引量：5
- 2021年
- 本研究旨在探讨在高脂饮食状态下CD36基因缺失对小鼠糖脂代谢的影响及作用机制。根据基因型将小鼠分为野生型小鼠(wild type,WT)及CD36基因敲除(CD36^(−/−))小鼠,给予高脂饮食喂养14周。小鼠腹腔注射葡萄糖(1 g/kg)或胰岛素(5 units/kg)进行葡萄糖耐量或胰岛素耐量测试。HE染色观察肝脏脂质变性,全自动生化分析仪测定小鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)、血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、天门冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)浓度。Real-time PCR和Western blot检测小鼠肝脏、肌肉组织胰岛素信号通路。Real-time PCR检测小鼠原代肝细胞中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)的mRNA水平,葡萄糖检测试剂盒检测糖异生能力。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)及ELISA检测肌肉胰岛素受体β(insulin receptorβ,IRβ)酪氨酸磷酸化水平。Real-time PCR和免疫荧光染色检测小鼠肌肉葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)的表达和定位。结果显示,在高脂喂养后,CD36^(−/−)小鼠血清FFA、TG、AST及ALT水平较WT小鼠明显升高(P<0.05),CD36^(−/−)小鼠肝脏外观呈脂肪样变性,HE染色结果显示肝脏脂质积聚加重,提示CD36缺失促进脂肪肝的发生。然而,相对于WT小鼠,CD36^(−/−)小鼠的空腹血糖水平降低、糖耐量升高,胰岛素耐量降低(P<0.05),提示在高脂饮食喂养条件下,CD36缺失并不会损害小鼠的糖耐量和胰岛素耐量。与WT小鼠相比,CD36^(−/−)小鼠肝脏IR/IRS/AKT胰岛素信号通路无显著差异,两组小鼠原代肝细胞PEPCK表达水平及糖异生能力均无显著差异。而在CD36^(−/−)小鼠肌肉组织中,Co-IP及ELISA实验显示IRβ酪氨酸磷酸化水平显著升高,p-AKT水平显著升高(P<0.05)。免疫荧光染色实验提示肌肉GLUT4在细胞膜的定位增强,表明CD36^(−/−)小鼠肌肉胰岛素敏感
- 罗小青曾晗谭伟杨萍陈压西阮雄中
- 关键词：CD36胰岛素敏感性葡萄糖代谢
- 脂多糖通过mTOR途径抑制肝细胞脂质自噬被引量：1
- 2021年
- 本研究旨在探讨脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对肝细胞脂质自噬的影响及其机制。体外培养人肝癌细胞株HepG2,用0.1 mmol/L软脂酸(palmitic acid, PA)负荷,分为对照(0μg/mL LPS)组、LPS (10μg/mL)组、LPS+DMSO组、LPS+雷帕霉素(rapamycin, RAPA, 10μmol/L)组。油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况;自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3转染细胞后激光共聚焦显微镜观察细胞自噬流;通过氟硼二吡咯BODIPY 493/503荧光染料和溶酶体标记物溶酶体关联膜蛋白1 (lysosomal associated membrane protein 1, LAMP1)进行脂滴和溶酶体的共定位,反映细胞内脂质自噬水平;Western blot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、p-mTOR、核糖体S6激酶1 (ribosome protein subunit 6 kinase 1,S6K1)、p-S6K1、LC3II/I、P62蛋白表达。结果显示,与对照组相比,LPS组细胞油红O染色红染脂滴增加,自噬体增加,自噬溶酶体明显降低,LAMP1/BODIPY共定位率降低(P <0.05),p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1和LC3II/LC3I比值升高,P62蛋白表达增加(P <0.05)。加入RAPA干预后,与LPS+DMSO组相比,自噬体减少,自噬溶酶体明显增加,LAMP1/BODIPY共定位率升高(P <0.05),肝细胞油红O染色红染脂滴减少(P <0.001)。综上,LPS通过激活mTOR通路抑制HepG2细胞脂质自噬,从而加重细胞内脂质积聚。
- 候正萍李燕平赵蕾陈压西阮雄中
- 关键词：脂多糖肝细胞
- 炎症对脂肪酸负荷的肾细胞FAT/CD36表达的影响被引量：5
- 2012年
- 目的:观察炎症是否干扰脂肪酸负荷的肾细胞[人系膜细胞(HMCs)和肾小管上皮细胞HK-2]脂肪酸转运蛋白(FAT/CD36)的表达。方法:分别给予不同浓度软脂酸(0 mmol/L、0.02 mmol/L、0.04 mmol/L、0.08 mmol/L、0.16 mmol/L、0.32 mmol/L)处理HMCs和HK-2细胞24 h。采用实时定量PCR和Western blotting方法检测细胞FAT/CD36的mRNA及蛋白的表达。进一步选取0.04 mmol/L软脂酸联合炎症因子(25μg/L TNF-α或20μg/L IL-6)处理肾细胞24 h后,观察炎症因子对肾细胞FAT/CD36 mRNA及蛋白表达的影响;油红O染色及酶比色法检测细胞甘油三酯(TG)水平;ELISA检测细胞游离脂肪酸(FFA)含量。结果:软脂酸呈浓度依赖性上调HMCs和HK-2细胞FAT/CD36 mRNA和蛋白表达。炎症因子明显刺激脂肪酸负荷的肾细胞FAT/CD36mRNA和蛋白表达进一步增加。油红O染色及胞内TG和FFA含量测定显示炎症因子促进肾细胞脂质积聚。结论:炎症上调脂肪酸负荷的肾细胞FAT/CD36表达,加重胞内脂质积聚。
- 万克强廖俊蕾赵蕾李青陈压西阮雄中
- 关键词：系膜细胞HK-2细胞炎症
- 疱疹病毒感染与动脉粥样硬化
- 2007年
- 现从血清流行病学、病理学、体外细胞培养和动物实验、药物干预试验等方面综述疱疹病毒感染与动脉粥样硬化发病的关系。
- 贾蓓黄爱龙陈压西阮雄中
- 关键词：疱疹病毒感染动脉粥样硬化
- 脂肪酸转运蛋白CD36与代谢性炎症
- <正>CD36(又名脂肪酸转运蛋白),属于B类清道夫受体家族,因其能识别众多内源性的配体,如:氧化低密度脂蛋白,长链脂肪酸,非修饰的脂蛋白和淀粉样蛋白等,被认为是将机体的天然免疫和代谢这两大过程有机联合在一起的重要靶点。...
- 陈压西阮雄中
- 文献传递
- 纤维连接蛋白在慢性肾衰和透析患者中的意义
- 1993年
- 对30例慢性肾功能衰竭和15例血透患者血清纤维连接蛋白(FN)值观察发现,32例慢性肾衰患者血清FN值明显低手正常对照组(P<0.05);15例血透患者透析前后血清FN值无显著变化;10例稳定的血透患者血清FN与血Sn/Scr呈显著负相关(P<0.01)。表明慢性肾衰功能衰竭(CRF)患者血清FN降低与营养状态低下有关,FN测定简单,半衰期短,可作为观察CRF和血透患者营养状态,疗效及预后的敏感指标。
- 阮雄中徐虹
- 关键词：糖蛋白肾功能衰竭
- SM22启动SCAP真核表达质粒的构建及其在CHO细胞中的表达被引量：3
- 2010年
- 为建立平滑肌特异的固醇调节元件结合蛋白(SREBP)的裂解激活蛋白(SCAP)超表达的转基因小鼠,深入探讨SCAP的功能,本实验构建了由平滑肌特异蛋白SM22启动子(pSM22)启动仓鼠SCAP443位点突变体——SCAP(D443N)的真核表达质粒,并在仓鼠卵巢细胞(CHO)验证其表达。利用巢式PCR从小鼠肝脏组织提取的基因组中扩增得到pSM22基因。先将其插入pMD-T载体,构建T-SM22,对pSM22测序后,通过双酶切将pSM22克隆到pGL3-control-Luc中,成为pGL3-SM22-Luc。转染pGL3-SM22-Luc到血管平滑肌(VSMCs)中,通过检测荧光素酶(Luc)值观察pSM22在VSMCs内的启动活性。利用PCR从pTK-HSV-SCAP(D443N)质粒中扩增出SCAP(D443N)后克隆入pGL3-control中,成为pGL3-SCAP。然后再将pSM22克隆入pGL3-SCAP中,成为表达质粒pGL3-SM22-SCAP(D443N)。转染表达质粒到CHO细胞,用real-timePCR和Western blotting验证SCAP(D443N)的表达。结果证实pSM22在体外VSMCs中能启动Luc的表达;表达质粒pGL3-SM22-SCAP(D443N)酶切及测序结果正确;将其转染到CHO细胞后,与转染pGL3-control的对照细胞相比SCAP(D443)mRNA和蛋白表达显著增强。
- 王媛媛胡接力崔静黄爱龙阮雄中陈压西
- 关键词：SM22质粒构建转染
- 代谢性炎症,mTOR信号通路与脂肪肝
- 代谢性炎症与脂代谢紊乱,胰岛素抵抗和非酒精性脂肪性肝病的发生发展密切相关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸激酶,对细胞成长和代谢起着关键的调控作用,近期研究提示其可能参与了胰岛素抵抗的发...
- 阮雄中
- 文献传递
- 白细胞介素1β对美伐他汀处理的HepG2细胞胞内胆固醇含量的影响被引量：1
- 2016年
- 目的观察白细胞介素1β(IL-1β)能否干扰美伐他汀降低HepG2细胞内胆固醇含量的作用。方法给予不同浓度的美伐他汀(0,1,10,50,100μmol·L^(-1))单独处理或联合20 ng·mL^(-1)IL-1β处理HepG2细胞24 h。用酶学反应法检测3-羟基3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA-R)的酶活性,用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)方法测定低密度脂蛋白胆固醇(LDL)受体中mRNA的表达水平。然后选取100μmol·L^(-1)美伐他汀单独处理或联合20 ng·mL^(-1)IL-1β处理HepG2细胞24 h,用酶学反应法测定细胞内胆固醇含量,用Real-Time PCR测定细胞内酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶(ACAT)酶表达。结果美伐他汀能显著抑制HepG2细胞的HMG-CoA还原酶活性。IL-1β能有效地削弱美伐他汀对酶活性的抑制作用,同时进一步上调LDL受体的mRNA表达。IL-1β还能促进美伐他汀处理的HepG2细胞中ACAT mRNA的表达,增加细胞内胆固醇酯的含量。结论 IL-1β能增强HepG2细胞的HMG-CoA还原酶活性,促进ACAT酶和LDL受体表达,导致细胞脂质摄入和酯化增加。
- 周维王沛陈压西阮雄中赵蕾
- 关键词：美伐他汀白细胞介素1Β胆固醇HEPG2细胞
- 炎症应激相关的脂质异位沉积在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用被引量：8
- 2011年
- 目前，在对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病机制和治疗的对策研究中，更多的是关注饮食控制，改善胰岛素抵抗，加强肝脏对游离脂肪酸的氧化等方面，而对脂质从外周组织向肝脏异常转运的研究不多。由于对肝脏脂肪酸、胆固醇摄取的机制认识不清，目前还没有有效抑制肝脏对脂质摄取的治疗方法。因此，深入探讨脂质的转运机制对于了解NAFLD的发病机制以及发现新的治疗靶点有非常重要的意义。
- 陈压西阮雄中
- 关键词：脂肪肝炎症
