陈俏丽
- 作品数：48 被引量：73H指数：6
- 供职机构：东北林业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- MicroRNA转录后调控欧美杨R2R3-MYBs抗锈菌表达被引量：6
- 2017年
- [目的]强致病锈菌亲和型树种欧美杨适合做寄主感病分子机理研究。研究表明转录因子及其调控miRNA在杨树抗/感病过程中起重要的信号传导和调控作用,决定杨树与锈菌的亲和性。为深入研究杨树感病性,对欧美杨R2R3-MYB转录因子及其调控miRNA进行研究。[方法]构建锈菌侵染和未侵染miRNA组、降解组文库和基因表达谱文库,进行高通量测序。对基因表达谱结果进行生物信息学分析鉴定R2R3-MYBs,根据miRNA组和降解组数据确定R2R3-MYBs调控miRNA。应用定量PCR技术鉴定候选R2R3-MYBs和其调控miRNA的表达量。[结果]共鉴定到230个欧美杨R2R3-MYBs,其中55个R2R3-MYBs在锈菌侵染和未侵染叶片间表达量差异显著,其余表达量变化不显著。基于降解组,共鉴定到由22个miRNA调控18个R2R3-MYBs的86个转录后调控关系。定量PCR结果表明PC-3p-2521022_1与Pnd MYB173存在转录后负调控关系。预测的R2R3-MYB靶基因涉及水杨酸、茉莉酸、乙烯和脱落酸等多个植物激素抗性路径。[结论]E4强致病锈菌侵染导致亲和型树种欧美杨23.9%的R2R3-MYBs表达量发生变化,锈菌侵染不但可以影响R2R3-MYBs的表达量,还可以启动或关闭R2R3-MYBs的表达。欧美杨在E4强致病锈菌胁迫条件下,R2R3-MYBs转录后主要受miR159和miR858家族的miRNA调控。
- 李丹蕾张瑞芝王峰陈俏丽牛春阳零雅茗郝昕
- 关键词：MICRORNA欧美杨落叶松-杨栅锈菌
- 松材线虫抗逆态基因Bx-DAF6鉴定及基因沉默被引量：9
- 2016年
- 为探究松材线虫抗逆态幼虫形成的分子机理,本文对抗逆态基因daf-6进行了鉴定和基因沉默研究。应用BLAST比对技术,在松材线虫基因组数据中鉴定得到秀丽线虫daf-6的同源基因,命名为Bx-DAF6。应用PCR技术进行Bx-DAF6完整蛋白编码区(CDS)扩增。采用RNAi技术进行Bx-DAF6沉默,分析该基因的沉默对松材线虫抗逆态幼虫形成的影响。PCR扩增得到CDS区全长2 700 bp,Bx-DAF6编码的蛋白质具有固醇传感结构域。Bx-DAF6沉默抑制了2龄幼虫转变为抗逆态幼虫,表明Bx-DAF6在2龄幼虫转变为抗逆态幼虫生理过程中起正向调控作用。
- 王峰李丹蕾马玲王博文陈俏丽张瑞芝苏丹康新宇翟雯
- 关键词：松材线虫松树萎蔫病基因鉴定基因沉默
- 恶性疟原虫Pfs25基因在毕赤酵母中三拷贝串联分泌表达
- 2014年
- 目的:Pfs25蛋白是传播阻断型疟疾疫苗重要的候选抗原,然而,I期临床研究显示该蛋白在人体内只能激发较弱的免疫应答,如何提高Pfs25蛋白质的免疫原性成为研究重点。已有的研究表明:体外通过化学偶联方法获得的Pfs25蛋白聚合物,能显著提高其免疫原性。方法:本文从基因水平,利用同尾酶的特性构建串联的Pfs25基因三拷贝融合基因(Pfs25)3,每个单拷贝基因由连接臂(linker)连接,以保证每个单体Pfs25蛋白的活性不受影响。构建重组质粒(Pfs25)3/pPICZαA[或(Pfs25)3/pGAPZaA]电转毕赤酵母菌,获得酵母重组体。在三角瓶规模表达重组菌并初步纯化了目的蛋白(Pfs25)3。结果:ELISA和SDS-PAGE检测表达上清,显示有弱阳性表达。获得了纯度为83%的纯品蛋白。结论:在毕赤酵母中实现了Pfs25基因的三拷贝串联表达,为恶性疟疾疫苗的研发奠定了基础。
- 陈勇陈俏丽雷清杨军李刚蒋琳
- 关键词：融合基因毕赤酵母基因表达
- 水稻抗干尖线虫基因OC-XⅡ的克隆及表达研究
- 2015年
- 抗性验证试验表明籼稻大白谷抗水稻干尖线虫侵染。为进一步探究此抗性与病程相关蛋白——半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)的相关性,基于水稻基因组数据克隆籼稻大白谷Cystatin家族的OC-XII基因,分别进行OC-XII、JaponicaOC-XII和Indica-OC-XII蛋白质三维结构构建,并与水稻干尖线虫组织蛋白酶B(Cathepsin B)进行分子对接以验证OC-XII基因编码蛋白对Cathepsin B的抑制功能。通过荧光定量qPCR验证OC-XII基因在线虫侵染前后的表达特性,OC-XII蛋白可以与水稻干尖线虫Cathepsin B蛋白质特异结合,线虫侵染后OC-XII基因在浸染12h^2d期间表达量持续上调,侵染3d后下调。表明OC-XII基因在大白谷抗水稻干尖线虫侵染过程中发挥功能,具有对植物寄生线虫进行生物防治的潜力,有必要对其进行深入研究。
- 王峰陈俏丽李丹蕾零雅茗王博文张瑞芝贾岩岩李永航裴雨滢逯昕明
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂水稻干尖线虫组织蛋白酶B
- 欧美杂交杨Pnd-LRR3基因克隆及其抗锈菌侵染表达被引量：6
- 2015年
- 为深入探究欧美杂交杨(Populus nigra×P.deltoides)感病的分子机理,以及抗病基因在发病过程中所起的作用,克隆了欧美杂交杨LRR3蛋白编码基因Pnd-LRR3。对Pnd-LRR3基因进行了生物信息学分析,并对其在抗锈菌过程中的功能进行了研究。Q-PCR结果显示,强致病性的落叶松-杨栅锈菌(Melampsora larici-populina)E4菌株接种6 h,Pnd-LRR3基因表达量上调增幅较大,168 h为显著下调。说明Pnd-LRR3基因在E4侵染过程中起到一定抗性作用,但最终无法阻止锈菌的侵染。
- 陈俏丽李丹蕾王峰邹莉王志英牛春阳王博文零雅茗崔嵘张玉洲
- 关键词：落叶松-杨栅锈菌Q-PCR
- 松材线虫热激转录因子Bx-HSF-1基因的克隆及表达分析被引量：5
- 2016年
- 【目的】通过对热激转录因子基因Bx-HSF-1的克隆和表达分析,为深入研究c GMP、TGFβ-like和Insulin/IGF等热激抗逆代谢路径提供理论基础。【方法】根据松材线虫基因组数据设计引物克隆松材线虫Bx-HSF-1基因。进一步对Bx-HSF-1进行Gene Ontology基因功能预测、系统发育分析、保守结构域分析等生物信息学分析。应用JASPAR预测Bx-HSF-1靶位点DNA序列,根据松材线虫基因组数据筛选含有该序列的靶基因,并通过蛋白质三维结构分析和分子对接验证。应用荧光定量q-PCR检测Bx-HSF-1及其靶基因在热激和低温处理条件下4个时间点的表达量,结合转录组数据对Bx-HSF-1及其靶基因的表达量相关性进行分析。采用原位杂交对Bx-HSF-1基因在松材线虫体内的表达部位进行了分析。【结果】根据基因组数据,克隆到松材线虫热激转录因子Bx-HSF-1基因长度为1 404 bp的涵盖完整蛋白编码区基因序列。结构域分析表明Bx-HSF-1基因编码蛋白质的氨基酸序列含有DNA结合结构域和亮氨酸拉链结构域。GO分析表明该基因参与延长线虫寿命、正向调控繁殖率、运动、热激反应、抗逆态幼虫发育和抗逆反应等生理过程,并具有特异DNA序列结合的分子功能。氨基酸疏水性分析表明该DNA结合结构域由3个α螺旋和4个反向平行的β折叠构成一个疏水核心,该疏水核心可以与热激元件靶位点互作。对松材线虫基因组进行BLAST比对筛选出Bx-DAF-7是Bx-HSF-1的靶基因,Bx-DAF-7基因TATA盒上游序列具有Bx-HSF-1靶位点序列。荧光定量q-PCR结果表明热激和低温处理同样促进Bx-HSF-1转录、抑制Bx-DAF-7转录,Bx-HSF-1与Bx-DAF-7的表达量负相关。原位杂交结果表明Bx-HSF-1基因在正常培养线虫体内各细胞均有微量表达,热激培养线虫前体部信号显著,峡部和肠区体壁信号较显著。【结论】本研究表明Bx-HSF-1具有特异DNA序列结合的分子功能。预测抗逆�
- 王峰马玲陈俏丽王博文郝欣何芳林柳燕
- 关键词：松材线虫热激转录因子
- C14族R2R3-MYB基因调控杨树抗锈菌过敏性反应被引量：5
- 2016年
- 由落叶松-杨栅锈菌引起的杨树叶锈病分布广泛,危害严重。为探究杨树C14族R2R3-MYB基因在杨树抗锈菌过敏性反应中的调控作用,对接种了落叶松-杨栅锈菌E4强致病性生理小种的2种杨树叶片进行症状观察、感病指数判定并对2种杨树C14族共6条R2R3-MYB基因表达量变化情况进行分析。接种7 dpi后,弱感病性树种杂交杨叶片产生的夏孢子堆数量显著少于感病树种欧美杨。杂交杨叶片4 dpi开始出现过敏性反应症状,欧美杨未观察到类似症状。表明过敏性反应可有效阻止锈菌夏孢子堆形成,降低杨树感病性。杂交杨与欧美杨R2R3-MYB基因表达量变化趋势相反,预测杨树C14族R2R3-MYB基因为杨树与病原互作过程中调控过敏性反应的正向调控因子。本研究为进一步系统研究杨树R2R3-MYB基因与过敏性反应的调控机理及杨树抗病育种工作提供理论依据。
- 牛春阳王峰李丹蕾陈俏丽张瑞芝
- 关键词：欧美杨落叶松-杨栅锈菌
- 恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白ELISA定量检测方法的建立及其应用
- 2016年
- 目的建立恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白（25 KDa Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25）的ELISA定量检测方法。方法以双抗体夹心ELISA法为基础,建立Pfs25蛋白的ELISA定量检测方法,并对该方法进行重复性和准确性验证。用建立的方法检测不同重组菌株、CHO细胞中,以及经10 L发酵罐培养菌株纯化各阶段样品中Pfs25蛋白的表达量。结果建立的方法线性范围为0-1.6μg/ml,R2=0.984,检测灵敏度为0.032μg/ml,回收率为81%-119.0%,CV﹤15%。Pfs25-Pet42a/DE3表达后的Pfs25蛋白浓度在2.03-7.26μg/ml;Pfs25-p GAPZαA/GS115、Pfs25-p PICZαA/GS115和（α-Pfs25）8-p AO815/GS115表达后的Pfs25蛋白浓度分别为113、105和280μg/ml;3株Pfs25/CHO细胞表达的Pfs25蛋白浓度分别为106.11、116.89和155.01μg/ml。p PICZαAPfs25/GS115菌株发酵液中,Pfs25蛋白的增加呈先快后慢的趋势,72 h后,目的蛋白增加逐渐平缓;纯化洗脱液3个峰中Pfs25蛋白浓度分别为22.67、42.12和55.27μg/ml,流穿液中Pfs25蛋白浓度仅为0.096μg/ml。结论建立的Pfs25蛋白ELISA定量检测方法可用于疟疾疫苗研究中Pfs25蛋白的定量分析。
- 李刚马亚茹陈俏丽杨军陈勇蒋琳
- 关键词：蛋白含量酶联免疫吸附测定
- 水稻干尖线虫Ab-lea基因在高渗透压下的表达被引量：2
- 2017年
- 【目的】水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)在侵染寄主以前,能够以变渗隐生状态在土壤和种子中的高渗透压环境下长期存活,使防治该线虫极为困难。通常,非生物胁迫下,胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA)的基因表达量会显著上调。作为逆境表达蛋白,LEA能在逆境下保护生物。为探究水稻干尖线虫LEA编码基因(Ab-lea)在高渗透压胁迫下的表达模式及功能,【方法】根据转录组数据克隆到Ab-lea。以无机溶剂饱和Mg SO4·7H2O溶液为高渗透压胁迫剂,对水稻干尖线虫进行高渗透压胁迫,240 min后该线虫进入变渗隐生。通过RT-PCR验证Ab-lea在线虫进入变渗隐生及维持变渗隐生过程中的表达特性。使用RNAi技术,探究该线虫Ab-lea沉默后,高渗透压胁迫下存活率变化。【结果】RT-PCR结果表明,Ab-lea在进入变渗隐生前期及维持变渗隐生过程中表达量上调。Ab-lea沉默后,水稻干尖线虫在进入变渗隐生后存活率显著下降。【结论】表明该基因可能参与调控水稻干尖线虫变渗隐生。本研究为进一步探究该线虫抗高渗透压胁迫的生理机制奠定基础,为防治该线虫提供新思路。
- 陈俏丽王峰李丹蕾零雅茗张瑞芝
- 关键词：水稻干尖线虫
- 一种抗锈病黑杨组培苗的继代培养方法
- 一种抗锈病黑杨组培苗的继代培养方法，涉及一种黑杨组培苗的继代培养方法。本发明是要解决目前组培扩繁过程中及继代培养后抗锈病的抗性易缺失的问题。方法：一、从活化培养的1年生黑杨休眠枝条上分离叶片，接种锈菌，将接种叶片置于生长...
- 李丹蕾王峰陈俏丽张瑞芝牛春阳王博文
- 文献传递
