徐永春
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：广东医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湛江市科技计划项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于慢病毒介导RNA干扰技术的人PARP-1基因沉默细胞株构建被引量：6
- 2014年
- 目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术构建人淋巴母细胞TK6细胞的PARP-1基因沉默细胞株,为后续PARP-1基因功能和表观遗传学调控机制的研究提供有效的工具细胞。方法利用瞬时转染方法筛选最佳干扰效果的shRNA片段,与慢病毒载体pLVX-shRNA1连接,形成重组质粒,DNA测序鉴定后进行病毒包装,转导TK6细胞,利用嘌呤霉素筛选得到稳定表达PARP-1siRNA的PARP-1沉默细胞株,并用定量PCR和Western blotting鉴定所构建的细胞株。结果转染shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4细胞的PARP-1相对表达量分别为0.289、0.538、0.375和0.474,故选择shRNA1作为干扰PARP-1基因最佳片段。用0.5μg/ml的嘌呤霉素成功筛选出PARP-1沉默细胞株和空载体对照细胞株,并从mRNA、蛋白质、细胞表型来检测PARP-1基因的干扰效率,抑制效率超过80%。结论成功构建PARP-1的siRNA慢病毒干扰载体,并筛选出PARP-1基因沉默的TK6细胞株,携带shRNA的慢病毒稳定、高效干扰PARP-1基因表达。
- 杨慧梁海荣陈佳佳徐永春翟璐唐焕文
- 关键词：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1RNA干扰慢病毒TK6细胞
- 多聚聚合酶-1在氢醌诱导的DNA损伤应答中的作用及其机制被引量：8
- 2015年
- 目的探讨多聚聚合酶-1(PARP-1)在氢醌(hydroquinone,HQ)诱导的DNA损伤应答中的作用及其相关的调控机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以10μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组,分别在染毒0.5、1、2、3、4、5和6 h时收集细胞,以0 h为对照组,或用HQ处理PARP-1沉默细胞,运用western bloting技术检测TK6细胞中磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)、聚腺苷二磷酸核糖(PAR)以及DNA损伤应答(DDR)相关蛋白PARP-1和抗凋亡转录因子(AATF)的表达情况。结果 HQ处理TK6细胞后,γ-H2AX的含量在3 h时达到高峰[(14.83±1.14)倍](P<0.05),此后逐渐下降;AATF的含量一直上升,6 h含量最高[(15.62±1.14)倍](P<0.05)。PARP-1的含量先下降后上升,3 h其含量最低[(0.66±0.04)倍](P<0.05)。PAR的含量在0.5 h达高峰[(1.78±0.13)倍](P<0.05),而后逐渐下降。PARP-1沉默细胞中,HQ处理使得PARP-1、PAR和AATF的含量分别降了77%(P<0.05)、64%(P<0.05)和68%(P<0.05),γ-H2AX的含量上升了1.65倍(P<0.05)。结论 PARP-1通过聚多聚腺苷二磷酸(ADP)核糖基化作用增强AATF稳定性参与由氢醌诱导的DNA损伤修复。
- 凌晓璇温桥生杜谕君云林唐焕文徐永春刘林华
- 关键词：氢醌DNA损伤修复PARP-1TK6细胞
- PARP-1在苯代谢物氢醌诱导细胞凋亡中的作用被引量：3
- 2014年
- 苯(benzene)是一种常见的职业性毒物和环境污染物,主要由其代谢产物氢醌(Hydroquinone,HQ)发挥毒性作用。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]是一类存在于多数真核细胞内的多功能蛋白质翻译后修饰酶,其中PARP-l是研究最早、最为深入的一种。PARP-1在氢醌诱导细胞凋亡中发挥了重要作用。本文从HQ的概述、PARP-1的结构与功能以及PARP-1在HQ诱导细胞凋亡中的作用等方面做一综述,以期对苯暴露引起的各类疾病的防治提供理论指导。
- 徐永春陈佳佳陈玉婷云林唐焕文
- 关键词：苯氢醌聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1凋亡
- PARP-1/P53信号通路在氢醌诱导人淋巴母细胞凋亡中的作用及其可能机制
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<DIV ID="SHORTABSTRACT">[目的]： 1.利用慢病毒介导的RNA干扰技术构建人类淋巴母细胞（简称TK6细胞）的PARP-1基因沉默稳...
- 徐永春
- 关键词：氢醌细胞凋亡
- 文献传递
- 沉默信息调节因子1在苯所致白血病发生发展中作用
- 2014年
- 苯为人类致癌物。尽管有关苯血液毒性的研究已深入到分子水平，但其机制尚未阐明，针对其表观遗传毒作用机制的研究更少。表观遗传是调节基因表达的主要机制之一，其改变主要表现为组蛋白乙酰化修饰、DNA甲基化和microRNA调控等，相关研究已成为生命科学研究的前沿和热点。沉默信息调节因子1（ Silent information regulator 1，SIRT1）是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ Nicotinamide adenine dinucleotide， NAD＋）依赖的去乙酰化酶，其介导的乙酰化修饰在表观遗传诸多形式中占有重要地位。现就 SIRT1可能在苯所致白血病发生发展中的作用进行综述。
- 陈佳佳徐永春陈玉婷云林唐焕文
- 关键词：苯白血病DNA损伤修复
