张雨杭
- 作品数：18 被引量：15H指数：2
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 一株产普鲁兰酶细菌的分离鉴定及其发酵条件优化被引量：1
- 2014年
- 从淀粉加工厂附近土壤中筛选得到一株普鲁兰酶高产菌株,编号为Z-13,其初始酶活达到5.7 U/mL.通过对此菌株的16S rDNA比对,以及生理生化鉴定,鉴定此菌株为克雷伯氏菌(Klebsiella variicola),通过发酵条件优化,确定最佳发酵产酶条件为:玉米淀粉1.5%,蛋白胨2.0%,KH2PO40.05%,MgSO4·7H2O 0.01%.装液量为70 L/250 L,培养基最初pH为6.0,发酵温度30℃,摇床转速200 r/min,发酵时间48 h,优化后菌株产普鲁兰酶的酶活高达67.8 U/mL,是优化前菌株产普鲁兰酶活性的11.89倍.
- 王明道郭双张雨杭孙利鹏时延光邱立友
- 关键词：普鲁兰酶产酶条件优化
- 鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2017年
- 采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。
- 李青梅王丽冯丽丽张雨杭赵东杨艳艳邢广旭柴书军李赛赛张丽萍郭军庆张改平
- 关键词：鸡新城疫病毒单克隆抗体血凝抑制试验中和活性
- 猪瘟病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究被引量：1
- 2019年
- 为了了解猪瘟病毒(CSFV)在PK-15细胞上的增殖规律。根据GenBank中CSFV Shimen毒株的NS5A基因保守区域序列,设计1对特异性引物,以CSFV总RNA为反转录模板,经优化反应条件,建立了基于实时荧光定量PCR技术的CSFV检测方法,并对其进行了敏感性、特异性、重复性试验,结果显示,该方法重复性好、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,并且CSFV的最低检测限为1 TCID_(50)/mL。利用所建立的方法研究CSFV在PK-15细胞上清中的增殖动态,并与TCID_(50)方法绘制的复制动态曲线进行比较。结果显示,两种方法测定的CSFV在PK-15细胞上的复制动态具有一定的平行关系,该方法为研究猪瘟病毒的致病机理及利用体外细胞培养毒生产疫苗提供了试验依据。
- 王瑞宁王瑞宁李存法李存法李青梅张雨杭王丽郭军庆郭军庆
- 关键词：猪瘟病毒荧光定量PCR增殖规律
- 地黄连作障碍的自毒物质及转化菌株的发现与鉴定被引量：2
- 2021年
- 利用薄层色谱法(TLC)对地黄(Rehmannia glutinosa)头茬土壤与空白土的差异性化学成分进行系统分析、定位,并通过微生物发酵法对该物质进行了制备、分离与纯化.确定其为地黄连作障碍自毒物质.研究结果表明,地黄头茬土壤的二氯甲烷提取物中存在该物质为麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮,其转化菌株为曲霉属焦色组红紫曲霉(Aspergillus puniceus),命名为Aspergillus puniceus FF5YH.
- 王明道楚梦晓曹宏丽郝尚华邱爽张雨杭
- 关键词：地黄连作障碍薄层色谱分析自毒物质
- 一种非洲猪瘟病毒p22蛋白的抗原表位及应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及非洲猪瘟病毒，特别是指一种非洲猪瘟病毒p22蛋白的抗原表位及应用。本申请鉴定了单克隆抗体14G1与p22蛋白结合的关键氨基酸为C39、K40、V41、D42、C45、G48、E49和C51；单...
- 何文瑞韩世充任豪杰石兰芳万博张雨杭张改平张彪史赛燕林志钊赵燕燕
- 非洲猪瘟病毒抗原表位肽、单克隆抗体及其用途
- 本发明属于生物医药技术领域，具体公开了一种非洲猪瘟病毒抗原表位肽或其编码核酸、与非洲猪瘟病毒S273R蛋白抗原表位特异性结合的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其在制备预防和/或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物、检测...
- 万博史赛燕何文瑞韩世充张雨杭张改平任豪杰赵燕燕林志钊张彪杨曌源凌向辉柳顺达郭科威
- 基于生物安全三级实验室的高致病性病原微生物检测虚拟仿真实验教学的构建被引量：1
- 2022年
- 新发突发传染病始终是全球安全的重大威胁。为树立学生的生物安全意识,强化学生的生物安全防护技能,构建了基于生物安全三级实验室模型的虚拟仿真实验。本项目采用虚实结合、沉浸体验、自主学习等教学方式,集聚以学生为中心、以问题为导向的教学理念,设置多维度考核评价体系,不仅实现了学生在高等级生物安全实验室对高致病性病原微生物检测实验的全流程培训,还激发了学生学习兴趣,实现了实验教学质量和效率的全面提升。
- 韩世充何文瑞张雨杭褚贝贝万博
- 关键词：生物安全生物检测
- CRISPR/Cas13a重组蛋白表达纯化及其连带剪切酶活性的鉴定被引量：2
- 2021年
- 为建立LwaCas13a连带剪切酶活性的检测方法,在大肠杆菌中表达LwaCas13a重组蛋白,并对其连带剪切酶活性进行鉴定。将重组质粒pET His6-TwinStrep-SUMO-LwaCas13a转化至Rosetta(DE3)感受态细胞诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果显示,成功表达了可溶性LwaCas13a重组蛋白。对诱导温度和时间进行优化,结果显示,在16℃条件下诱导培养15 h时,LwaCas13a重组蛋白的可溶性表达量最高。通过镍柱亲和层析法对表达的LwaCas13a重组蛋白进行纯化,得到单一的目的条带,纯化效果较为理想。此外,通过体外转录合成了1对CRISPR RNA及靶标RNA,建立LwaCas13a连带剪切酶活性的检测方法,可在37℃条件下30 min内完成检测,对靶标RNA的检出限为31.2 nmol/L。综上,成功利用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株可溶性表达了LwaCas13a重组蛋白,且纯化后的LwaCas13a重组蛋白具有良好的连带剪切酶活性,建立了LwaCas13a连带剪切酶活性的检测方法。
- 王勋张雨杭孙亚宁孙亚宁李青梅李鸽王丽郭军庆邓瑞广
- 关键词：原核表达核酸检测
- 猪瘟病毒E^(rns)/E2融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及评价被引量：3
- 2021年
- 为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E^(rns)和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌。SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示,表达的E^(rns)/E2蛋白分子质量约为43 ku,能够被CSFV阳性血清识别,主要以包涵体形式存在。通过快速稀释法复性了纯化的包涵体蛋白,复性效率大于40%。以纯化复性的E^(rns)/E2蛋白为包被抗原,经优化各反应条件,建立了间接ELISA检测CSFV抗体方法(E^(rns)/E2-ELISA)。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法对121份随机采取的临床血清样本进行检测,与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E^(rns)/E2-ELISA检测方法符合率为86.78%,敏感性为92.11%,特异性为77.78%。利用建立的E^(rns)/E2-ELISA检测方法和IDEXX CSFV抗体检测试剂盒同时评价CSFV C株疫苗免疫的4只30日龄健康仔猪抗体消长规律,可分别于免疫后7 d和14 d开始检出阳性,35~42 d抗体水平达到高峰,49~56 d抗体趋于稳定。
- 王丽冯丽丽张雨杭孙亚宁杨继飞杨继飞赵东王瑞宁李学伍郭军庆
- 关键词：猪瘟病毒融合蛋白包涵体
- 基于动物医学专业创新人才培养的策略研究与实践——以《分子生物学》为例的教学创新成果报告
- 2023年
- 基于“一个健康”理念和“新农科”背景下对动物医学专业创新人才的培养要求,针对《分子生物学》课程存在学生专业认同不够、学习动力不足;课程抽象,学习难度大;实验教学方式单一等“痛点”问题。本团队以专业知识为载体,充分发挥课程思政建设“主力军”作用培养学生的三农意识,以“榜样零距离”为先导激发学生自主学习的内驱力;打破传统课程框架,将现代信息技术与教学深度融合,构建产学研用案例,创设多知识点融会贯通的教学情境,通过任务驱动法引导学生自主、合作与探究式学习,培养学生的学习兴趣和解决问题的能力;采用“产教融合、校企协同、科研反哺”的实践教学方法培养学生的动手能力。经过持续的教学改革与不断完善,建成了“线上+线下+产学研用”三位一体的教学新模式,培养了一批活跃在科研一线,扎根在基层动物防疫和投身西部建设的优秀兽医学人才。
- 曾磊王江褚贝贝何文瑞张雨杭
- 关键词：分子生物学动物医学专业教学模式
